AGR2、P53、GST-π在慢性萎縮性胃炎和胃腺癌中的表達(dá)及其意義

孫　敏

四川省成都市邛崍醫(yī)療中心醫(yī)院　611530

AGR2、P53、GST-π在慢性萎縮性胃炎和胃腺癌中的表達(dá)及其意義

孫敏

四川省成都市邛崍醫(yī)療中心醫(yī)院611530

胃癌是我國(guó)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。胃癌分為胃腺癌、平滑肌肉瘤和胃淋巴癌，其中胃腺癌是臨床上發(fā)病率最高的胃惡性腫瘤，約占所有胃惡性腫瘤的95%。胃腺癌是由胃腺體細(xì)胞惡化所致的，胃腺癌的發(fā)生與慢性萎縮性胃炎、胃黏膜腸化生等胃癌前病變有關(guān)，在胃黏膜癌變過(guò)程中常常伴有多種原癌基因和抑癌基因表達(dá)失衡的共同作用結(jié)果[1，2]。AGR2廣泛存在于胃腺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等腺體組織中，在這些腺體組織中存在過(guò)量表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和轉(zhuǎn)移等過(guò)程密切相關(guān)[3]。GST-π是谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶，具有穩(wěn)定遺傳物質(zhì)，抗氧化應(yīng)激的功效，與惡性腫瘤的關(guān)系密切。筆者通過(guò)對(duì)正常胃組織、慢性萎縮性胃炎、胃腺癌組織中AGR2、突變型P53、GST-π表達(dá)水平的檢測(cè)和分析，探討胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中這些指標(biāo)的意義。

1資料與方法

1.1一般資料收集2012年10月-2014年5月我院病理室的胃腺癌患者(胃腺癌組)、慢性萎縮性胃炎患者(慢性萎縮性胃炎組)和無(wú)胃病患者(正常對(duì)照組)的病變部位或胃部組織標(biāo)本各98例。胃腺癌組：男53例，女45例；年齡45～76歲，平均年齡(64.35±12.78)歲；按照世界衛(wèi)生組織腫瘤組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)：乳頭狀腺癌34例，管狀腺癌32例，黏液腺癌18例，印戒腺癌14例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期43例，Ⅲ～Ⅳ期55例。慢性萎縮性胃炎組：男56例，女42例；年齡43～74歲，平均年齡(63.14±13.75)歲；伴腸上皮化生41例。正常對(duì)照組：男54例，女44例；年齡46～75歲，平均年齡(61.57±12.41)歲。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析三組患者間性別、年齡等基線資料無(wú)顯著差異，具有可比性。

1.2納排標(biāo)準(zhǔn)胃腺癌納入標(biāo)準(zhǔn)：(1) 術(shù)前未經(jīng)任何形式的化療或放療治療；(2)具有完整的病例資料和病理資料；(3)病理組織學(xué)檢查確診為胃腺癌患者。慢性萎縮性胃炎納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)取標(biāo)本前4周內(nèi)無(wú)質(zhì)子泵抑制劑治療史和抗菌藥物應(yīng)用史；(2)具有完整的病例資料和病理資料；(3)病理組織學(xué)檢查確診為慢性萎縮性胃炎伴或不伴腸上皮化生。正常對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)具有完整的病例資料和病理資料；(2)經(jīng)胃鏡和病理組織學(xué)檢查未見(jiàn)胃部異常。排除標(biāo)準(zhǔn)三組一致：(1)合并有身體其他部位癌變者；(2)近4周有非甾體抗炎藥、抗生素、抑酸藥等藥物治療史者。

1.3方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)AGR2(前梯度基因-2)、突變P53、GST-π(谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π)在胃癌組織、萎縮性胃炎病變組織和正常胃壁組織中的表達(dá)。所有標(biāo)本均采用4%的中性甲醛固定，石蠟包埋，采用切片機(jī)將組織蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片10張，每片的厚度為4μm。采用鏈霉素生物素法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，首先依次進(jìn)行烤片、脫蠟、抗原修復(fù)和封閉，然后PBS緩沖液振蕩洗滌3次后，加入小牛血清封閉；然后在每個(gè)切片中加入AGR2、突變P53、GST-π單克隆抗體(由南京建成生物科技有限公司提供)，陰性對(duì)照則加入PBS代替一抗，確保加入的抗體與切片充分接觸，置于冰箱冷藏過(guò)夜；第2天，將切片取出置于37℃恒溫箱中孵育60min，用PBS緩沖液振蕩洗滌3次加入二抗鏈霉素生物素溶液，室溫孵育40min；取出后再次用PBS緩沖液振蕩洗滌3次加入DAB顯色液，顯色5min，蘇木精襯染，脫水透明后用DPX封固。

1.4結(jié)果判定由兩位病理專(zhuān)家對(duì)病理切片進(jìn)行雙盲分析，將每張切片選擇10個(gè)典型的高倍視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞在1 000個(gè)以上，AGR2、P53陽(yáng)性信號(hào)主要定位于胃腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒，GST-π陽(yáng)性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)和(或細(xì)胞核)呈棕黃色顆粒，采用北京航空航天大學(xué)真彩色圖像分析系統(tǒng)體視力學(xué)分析軟件進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的計(jì)數(shù)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在5%以下者判斷計(jì)0分，5%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，75%以上計(jì)4分。染色強(qiáng)度，無(wú)色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。將陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度得分相乘，即為AGR2、P53、GST-π的表達(dá)水平，得分在1分以上者判斷為陽(yáng)性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗(yàn)，所有統(tǒng)計(jì)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1AGR2、P53、GST-π在胃腺癌、慢性萎縮性胃炎和正常組織中的表達(dá)水平比較檢測(cè)結(jié)果顯示胃腺癌、慢性萎縮性胃炎和正常組織中AGR2、P53、GST-π表達(dá)存在顯著性差異，AGR2、P53、GST-π在胃腺癌組織中表達(dá)量顯著高于慢性萎縮性胃炎組織，在慢性萎縮性胃炎組織中的表達(dá)量又顯著高于正常組織，P<0.05。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2AGR2、P53、GST-π在不同病理分期胃腺癌組織中的表達(dá)水平比較檢測(cè)結(jié)果顯示不同病理分期胃腺癌組織中AGR2、P53、GST-π表達(dá)水平存在顯著性差異，AGR2、P53、GST-π在病理分期為Ⅰ～Ⅱ期的胃腺癌患者中表達(dá)水平顯著低于病理分期為Ⅲ～Ⅳ期者，P<0.05。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表1　AGR2、P53、GST-π在胃腺癌、慢性萎縮性胃炎和

表2　AGR2、P53、GST-π在不同病理分期

3討論

胃癌的發(fā)生是環(huán)境因素、遺傳因素以及吸煙、喝酒、長(zhǎng)期不良飲食等眾多因素交互作用下產(chǎn)生的結(jié)果，與其他癌癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程一樣，盡管在細(xì)胞癌變之前胃腺細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)并沒(méi)有發(fā)生明顯的變化，但是細(xì)胞內(nèi)的一些代謝酶、蛋白質(zhì)及細(xì)胞的功能已經(jīng)出現(xiàn)了一些變化，這些變化又隨著腫瘤的進(jìn)展而放大。因此通過(guò)對(duì)細(xì)胞內(nèi)這些蛋白質(zhì)、酶的檢測(cè)可以預(yù)測(cè)癌變的發(fā)生及進(jìn)展。

AGR2是一種腫瘤轉(zhuǎn)移分泌蛋白，在消化道發(fā)育和疾病中具有重要作用，其對(duì)保持消化道上皮細(xì)胞的增殖和終端分化具有重要作用，AGR2還能調(diào)節(jié)P53的活性，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和外界刺激，調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附和轉(zhuǎn)移造成影響[4]。AGR2在血液、消化道、生殖系統(tǒng)等多種癌癥組織中均有發(fā)現(xiàn)，是癌癥的惡性病變標(biāo)記物[5]。P53基因是重要的抑癌基因，P53蛋白在調(diào)控細(xì)胞周期、DNA修復(fù)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面均發(fā)揮著重要作用[6]。在腫瘤組織中P53基因發(fā)生突變，突變型的P53基因具有抑制野生型P53的轉(zhuǎn)錄活性、誘導(dǎo)原癌基因異常表達(dá)等獲得性的新功能，從而具有誘導(dǎo)腫瘤生成和促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的功效[7]。GST-π具有轉(zhuǎn)運(yùn)親脂性化合物和清除細(xì)胞毒性產(chǎn)物的作用，能減少氧化應(yīng)激、清除氧自由基和穩(wěn)定遺傳物質(zhì)，GST-π主要分布在消化道、呼吸道和泌尿系統(tǒng)中，其在機(jī)體內(nèi)的正常表達(dá)是保護(hù)機(jī)體正常功能和癌癥發(fā)生的保護(hù)因子。在癌癥患者體內(nèi)GST-π過(guò)度表達(dá)，與致癌物質(zhì)結(jié)合發(fā)揮細(xì)胞內(nèi)解毒的功效，但是這一過(guò)程需要消耗大量還原型谷胱甘肽，而還原型谷胱甘肽的活性和數(shù)量是保證細(xì)胞解毒的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此它又反過(guò)來(lái)也促進(jìn)了細(xì)胞的分裂和分化、導(dǎo)致細(xì)胞癌變的發(fā)生[8，9]。

筆者發(fā)現(xiàn)胃腺癌、慢性萎縮性胃炎和正常組織中AGR2、P53、GST-π表達(dá)存在顯著性差異，AGR2、P53、

GST-π在胃腺癌組織中表達(dá)量顯著高于慢性萎縮性胃炎組織，在慢性萎縮性胃炎組織中的表達(dá)量又顯著高于正常組織，而且在病理分期為Ⅰ～Ⅱ期的胃腺癌患者中AGR2、P53、GST-π表達(dá)水平顯著低于病理分期為Ⅲ～Ⅳ期者。可見(jiàn)AGR2、P53、GST-π的高水平表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，綜合評(píng)估AGR2、P53、GST-π有助于胃癌高危人群早期篩查，以進(jìn)行預(yù)防性的治療措施。

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(編輯羽飛)

摘要目的：檢測(cè)慢性萎縮性胃炎和胃腺癌組織中AGR2、P53、GST-π的表達(dá)水平，分析其臨床意義。方法：對(duì)98例慢性萎縮性胃炎、98例胃腺癌和98例正常胃壁組織的病理切片進(jìn)行HE染色，采用免疫組化法檢測(cè)病理切片中AGR2、P53、GST-π的表達(dá)。結(jié)果：AGR2、P53、GST-π在胃腺癌組織中表達(dá)量顯著高于慢性萎縮性胃炎組織，在慢性萎縮性胃炎組織中的表達(dá)量又顯著高于正常組織，P<0.05。AGR2、P53、GST-π在病理分期為Ⅰ～Ⅱ期的胃腺癌患者中表達(dá)水平顯著低于病理分期為Ⅲ～Ⅳ期者，P<0.05。結(jié)論：AGR2、P53、GST-π的高水平表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，綜合評(píng)估AGR2、P53、GST-π有助于胃癌高危人群早期篩查，以進(jìn)行預(yù)防性的治療措施。

關(guān)鍵詞慢性萎縮性胃炎胃腺癌AGR2P53GST-π

The Expression and Its Significance of AGR2,P53,GST-π in Chronic Atrophic Gastritis and Gastric Adenocarcinoma

SUN Min.TheMedicalCentralHospitalofQionglai,ChengduCity,SichuanProvince611530

ABSTRACTObjective:To detect the level of the expression of AGR2, P53, GST-π in chronic atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma, and analyze its clinical significance.Methods:98 cases of chronic atrophic gastritis, 98 cases of gastric cancer and 98 cases of normal gastric tissue biopsy were taken for HE staining, and immunohistochemistry method was used to detect the pathological expression of AGR2,P53,GST-π.Results:AGR2,P53,GST-π expression in gastric adenocarcinoma was significantly higher than that of chronic atrophic gastritis,chronic atrophic gastritis in the expression level was significantly higher than in normal tissue,P<0.05. The level of expression of AGR2, P53, GST-π in pathologic stage Ⅰ~Ⅱ stage was significantly lower than pathologic stage Ⅲ ~ Ⅳ,P<0.05.Conclusion:The development of high levels of AGR2, P53 and GST-π expression is closely with gastric cancer. Comprehensive assessment of AGR2, P53, GST-π is contribute to the early screening for the high risk of gastric cancer, and it is good for the preventive treatment.

KEY WORDSChronic atrophic gastritis,Gastric adenocarcinoma,AGR2,P53,GST-π

收稿日期2014-10-28

中圖分類(lèi)號(hào)：R573.3+2；R735.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-7585(2015)05-0566-03