老年慢性房顫患者血清熱休克蛋白70和胱抑素C的表達及意義*

梁 鵬，周 芳

(重慶醫科大學附屬第一醫院大足醫院心內科，重慶 402360)

慢性心房顫動(chronic atrial fibrillation，CAF)是臨床上常見的心律失常，具有較高的發病率及死亡率，血栓栓塞和心力衰竭是其最主要的并發癥［1］，嚴重影響老年患者的生活質量。然而，心房顫動的確切發生機制尚不明確，近年研究發現，炎癥反應及氧化應激與房顫的發生發展、自我持續和復發有關［2，3］。熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)是一種細胞應激反應的生物標志物及細胞內源性保護蛋白［4］，而胱抑素 C(Cystatin C，CysC)作為一種分泌型蛋白，參與心血管疾病病理生理過程［5］，但兩者與房顫的關系尚無定論。本文研究擬通過檢測老年患者血清HSP70及CysC水平，探討兩者水平與房顫發病的相關性及臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象:選擇2014年1月至2015年1月診治的老年慢性房顫患者100例。入選標準:①年齡≥60歲;②心電圖或動態心電圖診斷為房顫。排除標準:①年齡＜60歲;②合并肝腎功能不全、急慢性感染、惡性腫瘤、自身免疫系統及內分泌代謝性疾病者;③孕婦及哺乳期婦女。根據持續時間，房顫組進一步分為三個亞組，及陣發性房顫組(A組，28例)、持續性房顫組(B組，31例)及永久性房顫組(C組，41例)。對照組為同期于我院就診的年齡、性別匹配的非房顫老年患者55例。

1.2 房顫定義:陣發性房顫(paroxysmal AF):房顫發作時間通常小于7d，多為自限性。持性房顫(persistent AF):房顫發作時間一般在7d以上，多不能自行終止，需應用藥物或電復律終止。永久性房顫(permanent AF):房顫持續時間在1年以上，難以復律或復律后難以維持竇律。

1.3 血樣采集:所有入選研究對象于清晨空腹抽取靜脈血3～4mL(EDTA抗凝)，以3000r/min離心15min，微量移液器取上清，-80℃保存待成批檢測。

1.4 實驗方法:采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清HSP70濃度，試劑盒為Uscn產品，購自上海超研生物科技有限公司。應用免疫比濁法檢測血清CysC水平，試劑盒購自北京九強生物技術有限公司，靈敏度0.1mg/L。實驗步驟嚴格按照說明書進行操作。

1.5 統計分析:采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，連續型變量采用±s表示，分類變量采用率表示，多組定量資料比較采用卡方檢驗，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。應用多因素Logistic回歸分析HSP及CysC與房顫的相關性并計算回歸系數。變量之間的相關性分析采用Spearmanz相關性檢驗。P＞0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 一般臨床資料:房顫組與對照組基礎臨床資料比較無統計學差異(P＞0.05)，見表1。

表1 房顫組與對照組一般臨床資料比較n(%)

表2 房顫組與對照組血清HSP70及CysC水平比較±s)

表2 房顫組與對照組血清HSP70及CysC水平比較±s)

注:A組陣發性房顫，B組持續性房顫，C組永久性房顫組。*與A組比較P＜0.05，＊＊與A組比較P＜0.01;#與B組比較 P＜0.05

組別 n HSP70(ng/mL) CysC(mg/L)房顫組100 16.07 ±6.28 1.22 ±0.48 A 組 28 14.91 ±4.73 0.98 ±0.29 B 組 31 15.65 ±5.27* 1.12 ±0.32*C 組 41 17.86 ±5.05＊＊# 1.30 ±0.34＊＊#對照組 55 13.55 ±5.73 1.01 ±0.44 t 2.758 2.638 P 0.0148 0.0081

2.2 血清HSP70與CysC比較:與對照組比較，房顫組患者血清 HSP70(t=2.785，P=0.0148)和 CysC(t=2.638，P=0.0081)水平明顯增高，差異具有統計學意義。房顫組患者根據房顫持續時間分為陣發性房顫組(A組)、持續性房顫組(B組)及永久性房顫組(C組)三組，結果顯示:B組與C組血清HSP70和CysC水平均高于A組(P＜0.05)。C組HSP70及CysC濃度最高，與B組比較差異具有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 Logistic回歸分析:將房顫組與對照組的自變量進行Logistic回歸分析，以除外其他混雜因素對自變量的影響。結果顯示:血清HSP70和CysC是房顫發生的獨立預測因子(見表3)。

表3 房顫組與對照組自變量的logistic回歸分析

2.4 HSP70與CysC相關性分析:Spearman相關性分析顯示，房顫組患者血清HSP70與CysC呈顯著正相關(r=-0.257，P＜0.05)。

3 討論

心房顫動(atrial fibrillation，AF)是最為常見的房性心律失常，研究調查顯示中國AF患病率為70%，且隨年齡的增長而增加，年齡60歲以上人群中發病率達6%，而年齡超過75歲者發病率高達10%以上［6］。房顫的發生機制十分復雜，可能主要涉及兩個方面，一是房顫的觸發因素，包括心動過緩、房性期前收縮或心動過緩、房室旁路和急性心房牽拉等。二是房顫發生和維持的基質［7］。然而，其確切的發生機制目前尚不清楚。

最近研究發現，炎癥通過氧化應激影響心房組織重構和電重構等房顫病理生理的重要過程，從而影響房顫的持續和復發［8］。一方面，心房細胞及間質的炎癥使心房肌細胞發生鈣超載，引起心房肌細胞凋亡，而C-反應蛋白等炎癥因子參與清除凋亡的心房肌細胞，導致心房肌纖維化發生組織重構，心房擴大及收縮功能減低進一步促進房顫持續，形成惡性循環。另一方面，炎癥通過氧化應激反應引起鈉離子通道改變，導致心房規則、有序的點活動喪失，代之以快速、無序的房顫波，造成心房、心室有效的收縮與舒張功能喪失。

熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)又稱應激蛋白，根據分子量大小和氨基酸序列同源性不同，將其分為HSP90、HSP70、HSP60及小 HSP四個家族，HSP具有抗炎、抗氧化、抗細胞凋亡、協同免疫等作用。HSP70家族廣泛存在于真核生物中，非應激狀態下以單體形式定位于正常細胞的胞漿或胞核中，而不與HSP基因上特異DNA片段-熱休克素(heat shock element，HSE)結合。當細胞受到炎癥刺激時，HSP作為啟動子與HSE結合，從而啟動HSP70轉錄過程。本研究發現，老年慢性房顫患者血清中HSP水平較對照組明顯升高，與之前Manda等［9］研究結果一致。

胱抑素C(Cystatin C，CysC)是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，由122個氨基酸殘基組成的低分子量、堿性非糖化蛋白質，機體所有的有核細胞均可持續穩定地產生，其主要功能是參與細胞外基質的重塑和降解。最近研究發現CysC是心血管疾病發病率和病死率的獨立預測因子，而CysC水平更有效地預測了老年人群中心血管事件和死亡的風險。本實驗結果表明老年慢性房顫患者血清CysC水平明顯升高，并與炎癥因子HSP70存在強相關性，兩者是房顫發生的獨立預測因子。其可能作用機制如下:①HSP70具有抑制半胱氨酸蛋白酶、應激活化蛋白激酶活性及抑制促凋亡基因表達的作用，CysC協同HSP70共同抑制心肌細胞凋亡。②炎癥反應刺激HSP70mRNA表達增加，HSP70通過分子伴侶功能修復并維持受損蛋白結構的穩定性，保護心肌細胞，進而延緩心房組織重構。③HSP70還可抑制細胞膜上快鈉通道開放，延緩心房電重構而發揮抗心律失常作用。④房顫時腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RASS)激活致早期腎功能損傷，血清CysC濃度明顯升高。

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