高效液相色譜法測定通塞益腦口服液中β-細辛腦含量

王 爭，王曙東，劉文雅，任海祥

（中國人民解放軍南京軍區南京總醫院制劑科，江蘇南京 210002）

高效液相色譜法測定通塞益腦口服液中β-細辛腦含量

王 爭，王曙東，劉文雅，任海祥

（中國人民解放軍南京軍區南京總醫院制劑科，江蘇南京 210002）

目的建立測定通塞益腦口服液中石菖蒲所含 β-細辛腦含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為 Hedera-ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 βm），流動相為甲醇-水（55∶45），檢測波長257 nm。結果β-細辛腦質量濃度在10.5～105 βg/mL范圍內與峰面積積分值線性關系良好（r=0.999 9），平均加樣回收率為99.49%，RSD為2.45%（n=6）。結論該方法簡便、快速、重復性好，分離度好，測定結果準確可靠，可用于通塞益腦口服液中β-細辛腦的含量測定。

通塞益腦口服液；高效液相色譜法；β-細辛腦

通塞益腦口服液是由石菖蒲及其他中藥組成的復方制劑，源于南京軍區著名老中醫于德勇教授的臨床經驗方，具有開竅豁痰、醒腦益智等功效，用于急性缺血性腦損傷及中風的治療，療效肯定、安全可靠，深受患者歡迎[1～2]。方中石菖蒲具有免疫、抑菌、抗癌、抗突變等藥理作用[3-4]。石菖蒲中的揮發油成分α-細辛腦具有鎮靜催眠、抗驚厥等作用，對心血管及呼吸系統均有活性[5]。本試驗中建立了同時測定通塞益腦口服液中α-細辛腦含量的高效液相色譜法，供制劑的質量控制參考。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，包括 Waters 1525型雙泵，Waters 2487型紫外檢測器，Waters 717型自動進樣器，Waters Empower色譜軟件；Mettler Toledo AE240型十萬分之一電子天平；KQ2200DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。通塞益腦口服液（南京軍區南京總醫院制劑科自制，批號為20130215，20130220，20130222）；α-細辛腦對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為100298-200001）；甲醇為色譜純，水為雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[6]

色譜柱：Hedera-ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（55∶45）；檢測波長：257 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；進樣量：10 μL。理論板數按α-細辛腦峰計算不低于2 000。

2.2 溶液制備

取α-細辛腦對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含105 μg的對照品溶液。精密吸取樣品5 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲30 min，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。另按處方量，稱取除石菖蒲外的其余藥材，按制劑工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗：取2.2項下3種溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，色譜圖見圖1。可見，在此色譜條件下，陰性對照品溶液對測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密吸取對照品溶液（105 μg/mL）1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 10 μL，注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件進樣測定峰面積，以峰面積積分值（A）對對照品溶液質量濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程 A=89 402 414 C-58 941，r=0.999 9(n=6)。結果表明，α-細辛腦質量濃度在 10.5～105 μg/mL范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：取同一 α-細辛腦對照品溶液（42 μg/mL）10 μL，在相同色譜條件下重復進樣測定6次。結果峰面積的 RSD為1.24%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：精密吸取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并按擬訂色譜條件進樣測定。結果α-細辛腦平均含量的 RSD為2.24%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時依法進樣測定。結果 α-細辛腦含量的 RSD為2.03%（n=6），表明供試品溶液在10 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品共6份，精密稱定，置5 mL容量瓶中，分別加入對照品貯備液1.0，1.2，1.4 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進樣測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 β-細辛腦加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

稱取3批樣品，精密稱定，依法制備供試品溶液并以外標法測定峰面積，計算含量。結果批號為20130215，20130220，20130222的樣品中α-細辛腦含量分別為39.45，39.29，39.11 μg/mL。

3 討論

在國家標準[7]中，細辛腦的含量測定采用分光光度法，采用給定的吸收系數，根據吸光度值來測定含量。由于實驗儀器和實驗環境的差異，測得的含量存在較大誤差，可靠性不如高效液相色譜法。

關于流動相的確定，曾嘗試了流動相為乙腈-水（44∶56），結果α-細辛腦于18 min左右出峰，但與相鄰兩色譜峰的分離度較低。考慮換成甲醇溶液以改善峰形[8-13]，調整流動相為甲醇 -水（55∶45），此時峰形變窄、分離良好，且峰形對稱、重復性好。

方法學考察表明，所建立的方法具有良好的線性、精密度、重復性、穩定性，且回收率高，可對通塞益腦口服液中α-細辛腦的含量進行有效、準確地定量，從而對產品進行有效的質量控制。

[1]蘇全勝，趙文新.通塞益腦口服液治療腦梗塞的療效觀察[J].中成藥，1997，19(6)：23-25.

[2]蔡松泉，蘇全勝.通塞益腦液治療急性腦梗塞的臨床研究[J].江蘇中醫，1991，12(11)：10-11.

[3]王愛芹.實用中西醫結合婦科學[M].北京：北京出版社，1996：142.

[4]張迎春，邵冬珊.中藥人工周期療法治療不孕癥研究進展[J].吉林中醫藥，1991，11(5)：39-40.

[5]王 爭，王曙東，侯中華.石菖蒲的成分及藥理作用的研究[J].中國藥業，2012，21(11)：1-3.

[6]柯雪紅，魏 剛，方永奇.HPLC測定石菖蒲藥材中β-細辛醚、β-細辛醚的含量[J].中成藥，2002，24(10)：791-792.

[7]吳 闖.細辛腦研究進展[J].中國藥學雜志，1997，32(3)：129-132.

[8]王 勤，袁小龍.HPLC測定增液承氣口服液中梓醇含量[J].中國中醫藥信息雜志，2014，21(1)：83-87.

[9]郝少君，李文俊，范莉莉，等.HPLC法測定康腎口服液中人參皂苷的含量[J].天津中醫藥，2014，31(3)：181-183.

[10]柳夢婷，方 婧，吳宏偉，等.高效液相色譜法同時檢測石菖蒲中β-細辛醚、β-細辛醚的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20(19)：75-78.

[11]賈樹娟.HPLC測定細辛腦注射液有關物質的含量[J].中國醫藥指南，2013，16(11)：114-115.

[12]李曉光，于彩巖，李志杰.HPLC法測定β-細辛腦的含量[J].內蒙古石油化工，2009，35(20)：21-22.

[13]成 丹.反相高效液相色譜法測定注射用細辛腦的含量[J].醫藥導報，2004，23(8)：587-588.

Content of α-Asarone in Tongsaiyinao Oral Solution by HPLC

Wang Zheng,Wang Shudong,Liu Wenya,Ren Haixiang
(Department of Preparation,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Area Command,Nanjing,Jiangsu,China 210002)

Objective To establish a method for the content determination of α-asarone in Tongsaiyinao Oral Solution.M ethods The Hedera-ODS-2 C18culumn(250 mm×4.6mm,5 μm）column was used.The mobile phases consisted of methanol and water(55∶45) and the detection wavelength was at 257 nm.Results α-asarone showed a linear relationship within the concentration range of 10.5～105 μg/mL(r=0.999 9).The average recovery was 99.49%,and RSD=2.45%(n=6).Conclusion The proposed method appered to be simple,rapid,reliable,sensitive and accurate.It is available to the content determination of Tongsaiyinao Oral Solution.

Tongsaiyinao Oral Solution;HPLC;α-asarone

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)19-0044-02

王爭(1989-)，女，江蘇南京人，大學本科，藥師，現從事中藥制劑研究工作，(電話)025-8086316(電子信箱) wangzheng198921＠163.com；任海祥，碩士研究生，副主任藥師，現從事中藥制劑研究工作，本文通訊作者，(電話)025-80861297 (電子信箱)RHX1111＠sin.com。

2015-01-27；

2015-03-30)