天麻提取物灌胃給予大鼠后入血成分研究

魏雅蕾，蔡 偉，張志超，楊玉琴，李廣雷，昶國平，劉博 ，張宏桂

（北京中醫藥大學中藥學院，北京 100102）

天麻提取物灌胃給予大鼠后入血成分研究

魏雅蕾，蔡 偉，張志超，楊玉琴，李廣雷，昶國平，劉博 ，張宏桂

（北京中醫藥大學中藥學院，北京 100102）

目的確證天麻入血成分信息。方法大鼠禁食12 h，灌胃給藥，給藥量為 2 mL／100 g，固相萃取(SPE)法進行血漿處理，運用HPLC-LTQ-Orbitrap MS法對進入大鼠血液的天麻化學成分進行檢測。結果共檢測到10種入血成分。結論除了天麻苷，天麻中還有對羥基苯甲醛、3，4-二羥基苯甲醛、p-ethoxymethylphenyl-1-O- -glucopyranoside、羥基芐基-1-O- -D-吡喃葡萄糖、鄰苯二甲酸二甲酯、4，4′-二羥基二芐基醚、4，4′-二羥基二苯基甲烷、天麻醚苷、2-乙氧基-4-甲基苯酚進入血液，均為酚性化合物及其苷類。

天麻；化學成分；HPLC-LTQ-Orbitrap MS；碎片離子

天麻 Gastrodia elata Bl．為蘭科植物天麻的干燥塊莖，又名赤箭、定風草等，主產于我國西南地區[1-3]，其性味甘平，歸肝經，具有止痙、息風、平肝、祛風的作用，治療眩暈、頭痛、中風、偏癱以及其他神經性疼痛效果顯著[4-6]。近年來，液質聯用技術因其不可比擬的高靈敏度和選擇性，可快速獲得豐富的信息量，廣泛應用于藥物定性和定量分析、結構鑒定和代謝轉化等研究[7-9]。目前，天麻入血成分尚未見報道。本研究中采用液質聯用技術，對天麻進入血液的化學成分進行分析，為后續天麻的化學物質基礎研究和體內藥效學、代謝研究奠定了基礎[10-11]。

1 儀器與試藥

Accela 600 pump型高效液相色譜儀與 LTQ-Orbitrap XL質譜，配有電噴霧離子源（ESI），Xcalibur 2．1工作站（美國 Thermo Scientific公司）；Sartorius CP225D型(萬分之一)天平；DZ-2BC型烘箱(天津市麥斯特儀器有限公司)；B-220型恒溫水浴鍋(上海亞榮生化儀器廠)；KQ5200E型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；Waters高效液相色譜儀(Waters 1525泵，Waters 2489UV檢測器)。甲醇（色譜純，批號為148671，Fisher公司，）；天麻苷（批號為K01016CB14，上海源葉生物科技有限公司）；天麻購自安國藥材市場，經北京中醫藥大學張貴君教授鑒定為 Gastrodia elata Bl．的干燥塊莖。

2 方法與結果

2．1 動物與給藥方案

SPF級 SD雄性大鼠10只，體重250～280 g，由北京市維通利華實驗動物技術有限公司提供（動物許可證號為 SCXK＜京＞2012-0001），屏障環境飼養1周，給藥前禁食12 h。取90 g天麻飲片，10倍量50%乙醇回流提取2 h，減壓濃縮，蒸干，水復溶，作為試驗用藥。試驗組（5只）每只給藥量為每100 g體重2 mL，空白組（5只）給予等量生理鹽水。

2．2 樣品處理

試驗組大鼠給藥后0，0．5，1，2，4 h于眼眶內眥靜脈叢取血，血液置加入肝素鈉的EP管中，4℃，4 500 r／min離心10 min，合并上清液。血漿樣品用固相萃取(SPE)小柱除血漿蛋白，合并洗脫液，于30℃水浴中通氮氣流揮干，殘渣加入200 μL甲醇復溶，渦旋振蕩1 min，4℃，10 000 r／min離心15 min，取上清液10 μL進樣。空白血漿樣品處理方法相同。

2．3 檢測條件

色譜條件：色譜柱為Thermo C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動相A為甲醇，B為水，梯度洗脫(條件見表1)；流速為1 mL／min；柱溫為30℃；進樣體積為10 μL。

表1 流動相洗脫條件

質譜條件：LC／MS LTQ Orbitrap耦合ESI源，電噴霧離子源在負離子模式下運行，參數為電壓3 kV，毛細管溫度350℃，鞘氣30 arb，輔助氣 10 arb，精確相對分子質量采用外質量校準法（＜1．0×10-6）。

2．4 檢測結果

空白血漿、給藥后大鼠血漿樣品按2．2項下方法處理后，空白血漿、天麻提取物、給藥后大鼠血漿按2．3項下條件進樣檢測，總離子流（TIC）圖見圖1。通過與空白血漿、天麻提取物的比較，根據各種物質的分子質量、保留時間、離子碎片可以推測有10種成分進入血液，見表2。

圖1 TIC圖

表2 天麻進入大鼠血漿中的10種化學物質

3 討論

通過與提取物中化學成分的準分子離子峰、保留時間、離子碎片比較，給藥大鼠血漿樣品中共檢測出10個化合物。除天麻苷外，還有9種化學成分進入血液，均為天麻化學成分中的酚性化合物及其苷類。在負離子模式下，酚酸類成分及一級質譜中都產生豐度較高的準離子峰[M-H]-；而在 MS2中，酚酸類成分會產生[M-H-H2O]-、[M-H-CO]-等碎片離子，是由于其含有羥基和特征基團的原因。本研究初步確立了天麻的化學物質基礎，為以后制劑質量標準研究、藥效學研究奠定了基礎。

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Constituents in Rat Plasma after Oral Administration of the Extract of Gastrodia Elata Bl．

Wei Yalei,Cai Wei,Zhang Zhichao,Yang Yuqin,Li Guanglei,Chang Guoping,Liu Boxuan,Zhang Honggui
（College of Chinese Medicine,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing,China 100102）

Objective To obtain the constituents ofGastrodia elata Bl．in rat plasma．M ethods The rats were fasted 12 h before administration,and the orally dose was 2 mL／100 g．The plasma samples were pre-treated with C18solid-phase extraction(SPE) method．The constituents in rat plasma were analyzed by HPLC-LTQ-Orbitrap MS．Results A total of 10 constituents were detected．Conclusion In addition to gastrodin,3,4-dihydroxybenz aldehyde,p-hydroxybenzaldehyde,dimethyl phthalate,gastrodeoside,2-ethoxy-4-methylphenol,p-ethoxymethylphenyl-1-O-β-glucopyranoside,4-hydroxybenzyl-β-D-glucopyranoside,4,4′-dihydroxydibenzyl ether and 4,4′-dihydroxydibenzyl methane are into blood as well,they are phenolic compounds and glycosides．

Gastrodia elata Bl．;constituent;HPLC-LTQ-Orbitrap MS;fragment ions

R285.5；R282.71

A

1006-4931(2015)21-0008-03

魏雅蕾，女，碩士研究生，研究方向為西藥研發和藥物體內吸收與代謝，（電子信箱）wei_yalei2013＠163．com。

2015-03-04)

國家自然科學基金資助項目，項目編號：31070328。