枸杞多糖抗大鼠口腔潰瘍活性部位的篩選研究

張一芳，馮 怡，徐德生

（1．上海健康醫(yī)學院，上海 201318； 2．上海中醫(yī)藥大學，上海 201203）

枸杞多糖抗大鼠口腔潰瘍活性部位的篩選研究

張一芳1，馮 怡2，徐德生2

（1．上海健康醫(yī)學院，上海 201318； 2．上海中醫(yī)藥大學，上海 201203）

目的篩選枸杞多糖抗口腔潰瘍的活性部位。方法采用 DEAE-纖維素柱層析法將枸杞多糖分為 4個組分，即 LBP1，LBP2，LBP3，LBP4，并采用50%冰醋酸誘導大鼠口腔潰瘍模型對枸杞多糖抗口腔潰瘍有效部位進行篩選。結果與結論LBP1為枸杞多糖抗?jié)兊幕钚圆课唬茱@著抑制冰醋酸造成的大鼠口腔潰瘍。

枸杞多糖；抗口腔潰瘍；活性部位

枸杞多糖(LBP)是中藥枸杞的重要活性成分，有降血糖[1]、調血脂[2]、抗衰老[3]、抗疲勞[4]、抗腫瘤[5]、提高免疫力[6]等多種藥理活性，近年又發(fā)現(xiàn)具有抗胃潰瘍的藥理作用[7]。在前期的研究中，采用DEAE-纖維素柱層析法對枸杞多糖進行分級，并篩選出了抗胃潰瘍的有效部位[8]。本試驗中采用50%冰醋酸誘導大鼠口腔潰瘍模型，對這4個多糖組分進行了抗口腔潰瘍有效部位的篩選，現(xiàn)報道如下。

1 動物、材料與試藥

SD大鼠，雌雄各半，體重200～220 g，由上海中醫(yī)藥大學動物中心提供，動物合格證編號為SYXK（滬）2014-0016，飼養(yǎng)于溫度為25℃、相對濕度為60%的空調房間，給予標準的試驗室飼料和自由飲水。西瓜霜潤喉片（桂林三金藥業(yè)股份有限公司，批號為130846）；枸杞由中國寧夏農科院枸杞研究所提供，由上海中醫(yī)藥大學沈嵐教授鑒定為寧夏枸杞 Lycium barbarum L．。

2 方法與結果

2．1 提取與分離

枸杞加6倍量水，溫度80℃，提取0．5 h，共提取3次。合并提取液，濃縮至1∶1，加5倍量95%乙醇醇沉2次，沉淀經Sevag法脫蛋白，真空干燥即得枸杞總多糖[9]。用DEAE-纖維素柱對枸杞多糖進行分離，分別用水和質量濃度為0．05，0．1，0．5 mol／L的 NaCl溶液洗脫，得 4個不同的枸杞多糖組分 LBP1，LBP2，LBP3，LBP4。

2．2 造模

將一小棉球放入滴口直徑為3 mm的滴管內，并與滴口持平，蘸取50%冰醋酸溶液，在乙醚麻醉的大鼠下頜黏膜處放置30 s[10-11]。

2．3 動物分組與給藥

造模后第2天，取60只造模成功的大鼠按性別及潰瘍程度隨機均分為6組，即賦形劑組、西瓜霜陽性對照組、LBP1組、LBP2組、LBP3組、LBP4組。賦形劑配方為淀粉∶HPC∶HPMC=2∶2∶1。西瓜霜組給藥劑量為每只每次60 mg，LBP給藥劑量經前期預試驗確定為每只每次2 mg，加入適量賦形劑。在口腔潰爛處涂抹，1日2次。

2．4 口腔潰瘍愈合試驗

每日在給藥前測量每只大鼠口腔潰瘍的最大直徑，并觀察愈合只數，結果見表1至表3。最后1天對大鼠口腔潰瘍數據行 t檢驗和方差齊性檢驗。

表1 各組動物口腔潰瘍直徑比較（，mm，n=10）

表1 各組動物口腔潰瘍直徑比較（，mm，n=10）

組別賦形劑組西瓜霜組LBP1組LBP2組LBP3組LBP4組第5天3．77±0．55 1．96±1．77 1．93±1．61 3．40±0．77 3．30±0．73 3．08±1．40第1天3．40±0．66 3．45±0．72 3．40±0．66 3．40±0．57 3．35±0．53 3．35±0．67第3天4．37±0．52 3．20±1．53 3．01±1．16 4．07±0．76 3．85±0．97 3．78±0．95第7天3．57±1．01 1．52±1．36 1．63±1．53 2．94±0．92 3．17±0．81 2．83±1．19第9天3．20±1．53 0．60±1．07 0．95±1．23 2．70±1．23 3．35±1．24 3．03±1．50

表2 各組大鼠口腔潰瘍愈合數量比較（只，n=10）

表3 第10天各組大鼠口腔潰瘍愈合數量及潰瘍直徑比較（n=10）

2．5 病理切片檢查

與僅給予賦形劑的陰性對照組比較，LBP1對50%冰醋酸引起的口腔潰瘍有顯著的促進愈合作用。病理切片顯示，治療10 d后賦形劑組與LBP2，LBP3，LBP4組大鼠下頜黏膜普遍有大片細胞壞死脫落，潰瘍形成，表面有滲出，深部有肉芽組織增生修復，肉芽組織中有較多的炎細胞浸潤；而西瓜霜組和LBP1組大多數下頜黏膜上皮完整，未見潰瘍形成，上皮下僅見少量肉芽組織增生修復，或少量炎細胞浸潤，說明大鼠口腔潰瘍愈合較好。見圖1。

圖1 大鼠口腔潰瘍治療后下頜黏膜病理切片圖（×200）

3 討論

口腔潰瘍是一種常見的口腔黏膜病，不同性別、年齡、種族、地域的人均可患病，一般人群的患病率高達20%。其病因尚不明確，可能與局部創(chuàng)傷、壓力、飲食、藥物、激素及維生素和微量元素缺乏等因素有關[12]，會給患者帶來很大痛苦。目前，市場上有多種治療口腔潰瘍的藥物，西藥多含有糖皮質激素類成分，有較大不良反應，且易復發(fā)；傳統(tǒng)的中藥制劑多有用藥量大、使用不方便、口感差等缺點。

本試驗結果表明，枸杞多糖中LBP1能顯著抑制50%冰醋酸誘發(fā)的大鼠口腔潰瘍，具有較好的促進潰瘍面愈合的作用。LBP1為中性多糖，得率為45%，較其他3個組分高，且無異味，每只大鼠每次只用了2 mg，和每只每次60 mg西瓜霜產生類似的抗口腔潰瘍效果，故將其用于開發(fā)口感好、局部用藥量少的抗口腔潰瘍新藥，具有一定前景。其他3個枸杞多糖組分 LBP2，LBP3，LBP4無明顯療效，可能與其均是酸性多糖且對口腔潰瘍會有刺激或干擾愈合相關。至于枸杞多糖 LBP1抗口腔潰瘍的作用機理，還有待進一步深入研究。

本試驗所用口腔潰瘍造模方法在已有文獻的基礎上進行了改進，具有操作簡便、造模效果明顯、刺激程度適中、便于觀察測量等特點。

[1]李朝暉，馬曉鸝，吳萬征．枸杞多糖降血糖作用的細胞實驗研究[J]．中藥材，2012，35（1）：124-127．

[2]吳 琦，李志強，崔忠慧．枸杞多糖降血脂和抗動脈粥樣硬化作用的研究進展[J]．牡丹江醫(yī)學院學報，2008，29（2）：67-69．

[3]蔣萬志，張洪泉．枸杞多糖在免疫和抗衰老方面的研究進展[J]．中國野生植物資源，2010，29（2）：5-7，14．

[4]王彥武，傅偉忠，譚宗艷，等．枸杞多糖抗疲勞作用的實驗研究 [J]．中國熱帶醫(yī)學，2006，6（8）：1 522-1 523．

[5]成日華，李煥德 ．枸杞多糖抗腫瘤機制研究進展[J]．中南藥學，2011，9（12）：921-923．

[6]齊春會，張永祥，趙修南，等．枸杞粗多糖的免疫活性[J]．中國藥理與毒理學雜志，2001，15（3）：180-184．

[7]張一芳，馮 怡，徐德生．枸杞多糖對大鼠實驗性胃潰瘍的作用研究[J]．中國藥業(yè)，2011，20（1）：14-15．

[8]張一芳，馮 怡，徐德生．枸杞多糖抗?jié)兓钚圆课缓Y選研究[J]．中國實驗方劑學雜志，2012，18（12）：209-211．

[9]張一芳，馮 怡，徐德生，等．枸杞多糖酶法脫蛋白工藝研究[J]．應用化工，2010，39（10）：1 532-1 533．

[10]朱萱萱，王廣基，劉建平，等．口腔膜治療實驗性大鼠口腔潰瘍作用機理研究[J]．中醫(yī)藥學刊，2003，21（1）：84-85．

[11]李前進，王宇翎，尹艷艷，等．一種簡便實用的口腔潰瘍實驗模型[J]．安徽醫(yī)科大學學報，2002，37（4）：237-238．

[12]李源媛，王新文．復發(fā)性口腔潰瘍的治療研究進展[J]．中國實驗方劑學雜志，2011，17（11）：270-273．

Screening of Effective Part of Anti-Oral-Ulcer Activity in Lyeium Barbarum Polysaccharide

Zhang Yifang1,Feng Yi2,Xu Desheng2
(1．Shanghai Institute of Health Sciences,Shanghai,China 201318; 2．Shanghai University of TCM,Shanghai,China 201203)

Objective To screen the effective part of anti-oral-ulcer activity in lyeium barbarum polysaccharide．M ethods The lyeium barbarum polysaccharide was divided into 4 parts(LBP1,LBP2,LBP3,LBP4)by DEAE-Cellulose chromatography．The anti-oral-ulcer components were screened by the experiments of 50% acetic acid inducing rats′oral ulcer．Results and Conclusion LBP1 is the active anti-oral-ulcer effective part,and it can inhibit rats′oral ulcer by acetic acid．

lyeium barbarum polysaccharide(LBP);anti-oral-ulcer;active part

R285.5；R282.71

A

1006-4931(2015)21-0099-03

張一芳，碩士研究生，講師，研究方向為中藥有效成分的提取及藥理作用，（電話）021-33755125（電子信箱）yifangz＠163．com。

2015-03-30；

2015-07-10)