RP-HPLC法測定吡嘧司特鉀片的含量及有關物質

劉春亮

(滁州市食品藥品檢驗中心，安徽 滁州　239000)

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RP-HPLC法測定吡嘧司特鉀片的含量及有關物質

劉春亮

(滁州市食品藥品檢驗中心，安徽 滁州239000)

摘要：目的采用RP-HPLC測定吡嘧司特鉀片的含量及有關物質，為片劑的質量控制提供有效的分析方法。方法采用C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為：甲醇∶水∶冰醋酸(20∶30∶0.1)，檢測波長為260 nm，流速1.0 mL·min-1。結果在選定的色譜條件下，吡嘧司特鉀與有關物質完全分離；制劑中輔料對主藥無干擾，吡嘧司特鉀在19.66～393.2 mg·L-1濃度范圍內，峰面積與濃度線性關系好，相關系數r=0.999 9，平均回收率為100.08% ，RSD= 0.21%。結論該法簡便，準確，專屬性強，可用于吡嘧司特鉀片的有關物質檢查及含量測定。

關鍵詞：高效液相色譜；吡嘧司特鉀片；有關物質

吡嘧司特鉀為肥大細胞穩定劑,制成片劑用于治療過敏性鼻炎、支氣管哮喘。國內三家生產此藥品的原標準[1-4]均采用高效液相色譜法對本品有關物質進行測定,但是流動相比例和限度不一致，同時含量測定方法有紫外分光光度法和高效液相法兩種方法，故我們建立統一的高效液相標準方法，并建立統一的限度對質量加以控制，方法更為合理，高效。

1儀器、試劑與材料

1.1儀器安捷倫1260型高效液相色譜儀，安捷倫化學工作站，PDA檢測器。Sartorius BS21S電子天平。

1.2試劑甲醇、乙腈為色譜純，冰醋酸為分析純。

1.3材料吡嘧司特鉀對照品(A廠家提供，由原料精制而成，化學標定含量為99.8%)，樣品(吡嘧司特鉀片，由A，B，C三廠家提供，批號分別為101001，1006004，100301)。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱： C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇∶水∶冰醋酸(20∶30∶0.1)；檢測波長：260 nm；流速：1 mL·min-1；柱溫：30℃。

2.2破壞實驗和干擾實驗取本品經酸、堿、高溫、氧化和光照破壞后，在本實驗條件下各降解物均與主峰完全分離，片劑輔料和溶劑對主峰無干擾，見圖1。

2.3有關物質檢查

2.3.1樣品測定取吡嘧司特鉀樣品適量，置100 mL的容量瓶中，加水溶解，稀釋至刻度搖勻，制得濃度為0.4 g·L-1的供試液。精密量取供試液1 mL，置100 mL的容量瓶中，加水溶解，稀釋至刻度搖勻，制得濃度為2 mg·L-1的對照液。

同時取經過日光燈(3 000 lx)光照72 h的對照溶液10 mL(1 g·L-1)作為系統適用性溶液,照色譜條件試驗,取系統適用性溶液20 μL注入液相色譜儀,光照分解雜質對主峰的相對保留時間約為0.8 min,與主峰分離度應符合規定。

另取對照溶液20 μL注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿量程的10%～25%；再精密量取供試品溶液與對照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的5倍，檢查雜質。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，各雜質峰面積和不得大于對照溶液中主成份峰面積1.5倍(1.5%)。色譜圖見圖2。

2.3.2測定結果測定A、B、C三廠有關物質的結果分別為(0.53±0.08)%、(0.30±0.06)%、(2.31±0.14)%。

2.4片劑含量測定

2.4.1標準曲線的線性范圍精密稱取吡嘧司特鉀對照品19.66 mg,置100 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋制成標準溶液，在上述色譜條件下分別進樣1、2、5、10、20 μL記錄色譜圖，以對照品溶液進樣濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標做線性回歸。吡嘧司特鉀在19.66～393.2 g·L-1濃度范圍內，相應峰面積A與其對照品濃度呈良好的線性關系，回歸方程為：A=2.445 88C-0.082 55，r=0.999 9。

2.4.2精密度實驗 取對照品溶液20 μL,重復進樣6次，測定吡嘧司特鉀峰面積，結果RSD為0.06%。

2.4.3重復性試驗 取同一批樣品(A廠)，配制供試品溶液6份，按上述色譜條件測定，取對照品同法操作，記錄色譜圖，按外標法計算含量，平均值為99.2%，RSD為1.0%。

2.4.4穩定性實驗同一份對照溶液，在0、1、2、3、4、8、10 h按上述色譜條件分別進樣分析，吡嘧司特鉀面積分別為478.9、478.3、478.2、478.8、479.0、479.7、478.8，峰面積的RSD為0.1%，樣品峰面積在10 h內穩定。

2.4.5回收率實驗精密稱取吡嘧司特鉀10.31 mg置100 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液，精密量取上述溶液10 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度作為對照品溶液。另取相應的混合輔料9份，分別置50 mL量瓶中，加水適量使溶解，精密量取對照溶液液4、5、6 mL配制成相當于80%，100%和120%濃度的樣品溶液各3份，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液；照含量測定項下的方法，進樣10 μL，計算回收率，結果見表1，平均回收率為100.08%，RSD為0.21%。

表1　回收率實驗結果

2.4.6樣品含量測定取本品精密稱取約20 mg，置100 mL量瓶中，加水適量使超聲溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，至50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，制成每1 mL約含20 μg的溶液。精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取干燥至恒重的吡嘧司特鉀對照品適量，同法測定，計算，即得。見圖3。

A 樣品B 對照品

圖3含量測定圖譜

2.4.7樣品測定結果測定A、B、C三廠樣品質量分別為(99.5±0.3)% 、(100.8±0.2)%、(98.5±0.2)%。

3討論[5-7]

3.1吸收波長的選擇通過使用DAD檢測器分別對本品進行光譜掃描，結果表明在波長為260 nm處吸收最大，所以確定測定波長選在260 nm。

3．2檢測方法的確定考察不同的流動相比例：基本是用水∶冰醋酸∶甲醇系統，但是比例不一樣，主要是冰醋酸的量，用樣品考察了4種比例：(1)水∶冰醋酸∶甲醇(400∶20∶600)；(2)水∶冰醋酸∶甲醇(550∶3∶450)；(3)水∶冰醋酸∶甲醇(600∶2滴∶600)；(4)水∶冰醋酸∶甲醇(300∶1∶200)，看分離情況。選擇水∶冰醋酸∶甲醇(300∶1∶200)這個比例較好。在破壞試驗中，光照實驗在主峰前均有較大雜質峰，考察了WATERS Sunfire C18、Agilent eclipse XDB-C18和大連依利特Hpersil C18三種色譜柱，此雜質峰相對主峰保留時間約為0.8 min，并以此達到有效分離，作為系統適用性考察使方法更為合理。一般有關物質考察到主峰保留時間的3倍，但是C廠記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍時，還有明顯雜質出現，故標準定為記錄色譜圖至主成分峰保留時間5倍。

3.3檢測的結果由于有關物質標準不一，綜合考慮將限度定為1.5%， C廠家雜質較多，按照原標準合格，按本文方法改進后明顯超限，是時間長降解還本身樣品不純，這需要進一步考證。含量試驗結果表明，紫外方法結果偏高，易受輔料的影響，高效液相色譜法則能準確測定其含量，不受輔料的影響。

總之，以上實驗可以看出，采用高效液相色譜法，通過專屬性、線性、回收率等研究證明此檢測方法具有靈敏、準確、重現性好等優點，可更有效測定吡嘧司特鉀片中有關物質和含量。

參考文獻:

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[6]沈衛陽,陳蓉,胡育筑.吡嘧司特鉀膠囊的RP-HPLC測定[J].中國醫藥工業雜志,2003,34(11):573-574.

[7]趙喆,王昕,左文堅.HPLC法測定醋酸可的松有關物質及其注射液的含量[J].中國藥品標準,2006,7(3):38-41.

(收稿日期：2014-04-17，修回日期：2015-02-10)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.08.013