高效液相色譜概述及其在藥品檢驗中的應用

曲學偉

摘 要：高效液相色譜技術以其高效、快速、準確度高的特點，使其在藥品的主成分含量及雜質檢測中得到廣泛應用，隨著該技術的不斷探索與發展，高效液相色譜法的作用將越來越重要。

關鍵詞：高效液相色譜；藥品檢驗；主成分含量

高效液相色譜法是20世紀70年代開始發展起來的高效、快速、準確度高、適用范圍廣的一項化學分析及分離的技術，高效液相色譜具有高壓、高速、高效、高靈敏度、應用范圍廣、柱子可反復使用以及樣品量少、容易回收等特點，受到人們廣泛的關注及重視[1-3]。該檢測方法也越來越成熟，得到各行業的認可及利用，已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用[4-6]。高效液相色譜技術在藥品檢驗中也被廣泛的應用，其對于藥品中的主成分含量、藥品中的雜質檢測等藥物分析中有著快速、準確、高效的檢測優點及效果[7-9]。

1 概述

1.1高效液相色譜定義

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析[10，11]。

高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相） 內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中做相對運動時，經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。高效液相色譜應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

1.2 特點：

高相液相色譜具有高壓的特點，流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓；高速的特點，分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時；高效的特點，分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍；高靈敏度的特點，紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級；應用范圍廣的特點，百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢；柱子可反復使用的特點，用一根柱子可分離不同化合物；樣品量少、容易回收的特點。樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備[12]。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

2在藥品檢驗中的應用

高效液相色譜技術與很多先進的檢測儀器融合在一起，在藥品檢驗中的應用越來越廣泛。目前采用液質聯用技術相結合的方式去檢驗藥品的主成分含量及相關雜質等，大大提高了藥品檢驗的效率和準確性。

2.1 藥品主成分含量的測定

藥品的主成分含量可以通過高效液相色譜法得到高效準確的檢測。原理為該物質（的官能團）在某一特定波長下有吸收，并且，該物質濃度和峰面積成正比。利用高效液相色譜法可以避免藥品輔料對主成分檢測的干擾，使檢測結果更準確。

例如：使用高效液相色譜技術對米諾磷酸片中主成分米諾膦酸含量進行檢測，測定方法簡便，測定結果準確、可靠。主要方法為將片劑研碎，取一定量用相應試劑進行溶解、過濾、上樣檢測。使用流動相為焦磷酸鈉-四丁基溴化銨-甲醇，檢測波長為226nm，結果顯示在0.104～31.283μg/ml范圍內線性良好，樣品檢測中重復性好，結果穩定。

2.2 藥品中雜質的測定

高效液相色譜法要求要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的了解樣品的有關性質，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點及其應用范圍[13]。選擇色譜分離方法的主要根據是樣品的相對分子質量的大小，在水中和有機溶劑中的溶解度，極性和穩定程度以及化學結構等物理、化學性質。

利用高效液相色譜技術對藥品中的雜質進行檢測，由于靈敏度高，相對比較小的可能一般檢測方法難以檢測出的雜質，高效液相色譜可以定性及定量的檢測，檢測結果更準確，更接近真實值，簡便、可靠、重復性高、線性關系良好、回收率理想，對藥品中的雜質可以更好的反饋，對藥品的藥代及藥效動力學的后續研究奠定基礎。進而更好的保證藥品的使用安全，保證人民的生命安全[14]。

3結束語

高效液相色譜技術具有很大的應用空間及發展前景，在藥品檢驗的領域有著廣泛的應用，它以其獨特的優勢，大大提高了檢測的時效性及準確性。高效液相色譜技術在藥品檢驗中起著越來越重要的作用，尤其是在藥品主成分含量檢測、及藥品雜質檢測[15，16]。高效液相色譜技術應用于多個領域，具有很大的發展潛力，隨著該技術的不斷改進與發展，高效液相色譜法的作用將越來越重要。

參考文獻

[1]張良曉.高效液相色譜在藥物分析中的應用研究進展[J].內蒙古石油化工，2005（7）：3-5.

[2]王緒明，白林.高效液相色譜及其聯用技術在藥物分析中的應用新進展[J].解放軍藥學學報，2004，20（6）：457-459.

[3]楊更亮，劉海燕.高效液相色譜整體柱在藥物分離分析中的應用進展[J].中國科學，2010，40（6）：631-640.

[4]周萍，李英華，鈕靈玲，等.高效液相色譜-串聯質譜對蜂王漿中27種藥物殘留的同時測定[J].分析測試學報，2010，29（6）：539-543.

[5]王媛，張文韜，李斯特，等.固相萃取-高效液相色譜法同時測定減肥功能食品中五種違禁藥物[J].四川大學學報，2010，41（5）：873-876.

[6]陳麗芳. 高效液相色譜技術在食品藥品檢驗中的應用[J]. 中國衛生標準管理， 2016， 7（6）：115-116.

[7]田祥學. 超高效液相色譜法在藥物檢驗分析中的應用[J]. 臨床醫藥文獻電子雜志， 2015（28）：5961-5962.

[8]郭倩倩. 采用反相高效液相色譜法測定降糖類保健食品非法添加降糖化學藥品 檢驗方法的研究[J]. 醫藥衛生：文摘版， 2016（3）：00093-00093.

[9]李湛君， 范慧紅， 楊昭鵬，等. 高效液相色譜在生化藥質控中的應用（一）高效凝膠滲透色譜在多糖類藥物質控中的應用（二）高效液相色譜代替生物測定對基因工程藥物的質量控制[C]// 中國分析測試協會科學技術獎發展回顧. 2015.

[10]楊建冬， 李存金. 高效液相色譜法定性檢測抗風濕及鎮痛類中成藥中氨基比林成分的研究[J]. 中國醫院用藥評價與分析， 2015（5）：609-611.

[11]羅達龍， 王華. 高效液相色譜法同時測定輔助改善記憶類保健食品中非法添加的17種化學藥物[J]. 中國食品衛生雜志， 2015， 27（5）：546-549.

[12]熊亞群， 劉雁鳴. 高效液相色譜技術在藥用輔料檢測中的應用新進展[J]. 中南藥學， 2015（1）：61-64.

[13]鄔偉魁， 嚴倩茹. 超高效液相色譜法在藥物有關物質分析中的應用[J]. 中國藥物評價， 2015（5）：277-279.

[14]王艷紅， 李冰， 陳真. 高效液相色譜法同時測定止咳平喘類中成藥中違規添加的磺胺嘧啶等7種化學抗菌物質[J]. 中國藥學雜志， 2014， 49（8）：683-687.

[15]王琰， 薛晶， 王悅，等. 高效液相色譜-蒸發光散射檢測法測定鹽酸多柔比星脂質體注射液中聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺與氫化大豆磷脂酰膽堿的含量[J]. 中國藥學雜志， 2015， 50（15）：1341-1346.

[16]梁慧敏， 歐妮. 高效液相色譜-電噴霧檢測器法測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量[J]. 中國藥業， 2016， 25（5）：55-57.