幽門(mén)螺桿菌感染密度與血清IL-6和IL-8及TNF-α表達(dá)的關(guān)系

謝會(huì)忠，王　莉，符仲標(biāo)，劉昌江，楊維忠

(海南省農(nóng)墾總醫(yī)院 a.消化內(nèi)科， b.病理科， c.消化內(nèi)鏡科，海口 570311)

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幽門(mén)螺桿菌感染密度與血清IL-6和IL-8及TNF-α表達(dá)的關(guān)系

謝會(huì)忠a※，王莉b，符仲標(biāo)a，劉昌江a，楊維忠c

(海南省農(nóng)墾總醫(yī)院 a.消化內(nèi)科， b.病理科， c.消化內(nèi)鏡科，海口 570311)

摘要：目的探討幽門(mén)螺桿菌(Hp)密度與血清白細(xì)胞介素6(IL-6)、IL-8和腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平的關(guān)系。方法隨機(jī)選擇2011年1月至2013年12月在海南省農(nóng)墾總醫(yī)院消化內(nèi)科接受胃鏡檢查的門(mén)診患者134例,采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)IL-6水平，放射免疫法測(cè)檢測(cè)IL-8和TNF-α水平，病理學(xué)診斷Hp密度及胃黏膜炎癥分期。結(jié)果134例受檢患者中病理診斷Hp感染83例，陽(yáng)性率為61.94%(83/134)；Hp感染密度1級(jí)41例、2級(jí)29例、3級(jí)13例。慢性胃炎輕度18例、中度50例、重度15例。活動(dòng)期炎癥66例，炎癥靜止期共17例，其中輕度9例、中度5例、重度3例。Hp陽(yáng)性炎癥活動(dòng)期IL-6、IL-8和TNF-α水平高于靜止期(P<0.05)；重度組IL-6、IL-8和TNF-α水平高于輕度組和中度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同Hp密度組間IL-6、IL-8和TNF-α水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論Hp感染可引起IL-6、IL-8和TNF-α水平升高，后者可能參與Hp陽(yáng)性胃黏膜炎癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。

關(guān)鍵詞：幽門(mén)螺桿菌；胃炎；白細(xì)胞介素；腫瘤壞死因子α

幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是胃十二指腸疾病的重要病因，其與慢性胃炎、消化性潰瘍及胃癌的發(fā)病有密切相關(guān)性[1]。Hp感染后的細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、細(xì)胞毒素、Hp酶類(lèi)及黏附因子等可能參與機(jī)體非特異性炎性反應(yīng)，導(dǎo)致胃十二指腸黏膜損傷，炎性細(xì)胞因子或許參與了Hp感染后胃黏膜的致病過(guò)程[2-3]。Hp感染密度不同引起炎性反應(yīng)程度不同，造成胃黏膜的病理?yè)p傷程度也不同[4]。本研究檢測(cè)了慢性胃炎患者Hp感染密度、血清因子白細(xì)胞介素(interleukin，IL)6、IL-8及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)表達(dá)水平及胃黏膜損傷程度，以探討Hp感染不同密度對(duì)血清因子水平的影響及后者在胃黏膜炎癥發(fā)生中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料隨機(jī)選擇2011年1月至2013年12月在海南省農(nóng)墾總醫(yī)院消化內(nèi)科接受胃鏡檢查的門(mén)診患者134例，男83例、女51例，年齡24～82歲，平均(60.3±12.8)歲。研究對(duì)象受檢前2周內(nèi)均未接受抗生素、鉍劑、H2受體拮抗劑和質(zhì)子泵抑制劑類(lèi)藥物等治療，未食用腌、泡、熏制品及富含硝酸鹽的食物。同時(shí)采集同一患者的空腹靜脈血3 mL，進(jìn)行血清學(xué)細(xì)胞因子IL-6、IL-8及TNF-α檢測(cè)。

1.2病理組織學(xué)檢測(cè)患者空腹行胃鏡檢查，在距幽門(mén)2.5 cm處取胃竇黏膜組織2塊，作常規(guī)組織病理學(xué)診斷及特殊染色Hp定性定量診斷。活檢組織常規(guī)石蠟包埋、切片及蘇木精-伊紅染色，由一位資深病理醫(yī)師進(jìn)行組織病理學(xué)常規(guī)診斷及Hp檢測(cè)。低倍鏡(10×10)觀察胃黏膜炎癥程度，分為輕度、中度及重度。輕度：炎性細(xì)胞較少并局限于黏膜淺層，不超過(guò)黏膜1/3；中度：炎性細(xì)胞較密集，超過(guò)黏膜層1/3，但不超過(guò)2/3；重度：炎性細(xì)胞密集，占黏膜全層。胃黏膜固有層及上皮內(nèi)或兩者均有嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為炎癥活動(dòng)期[5-6]。油鏡(10×100)檢測(cè)Hp，Hp感染密度定為1～3級(jí)，1級(jí)為偶見(jiàn)或小于標(biāo)本全長(zhǎng)1/3有少量Hp；2級(jí)為Hp分布超過(guò)全長(zhǎng)1/3，未在標(biāo)本全長(zhǎng)2/3或似連續(xù)性，稀疏地存在于上皮表面；3級(jí)為Hp成堆存在，基本分布于標(biāo)本全長(zhǎng)。

1.3血清細(xì)胞因子IL-6、IL-8、TNF-α檢測(cè)接受胃鏡檢查的患者于清晨采集空腹靜脈血3 mL，血清分離(中佳KDC-40型低速自動(dòng)平衡離心機(jī))，離心半徑14 cm,3000 r/min離心2～3 min，取血清檢測(cè)。血清IL-6采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)(西門(mén)子-IMMULITE2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀)；IL-8和TNF-α采用放射免疫法檢測(cè)(IL-8試劑盒購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所，TNF-α試劑盒購(gòu)自天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司)，具體操作步驟按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1病理Hp陽(yáng)性率及常規(guī)診斷134例受檢患者中病理診斷Hp感染83例，陽(yáng)性率為61.94%(83/134)；Hp感染密度1級(jí)41例、2級(jí)29例、3級(jí)13例。慢性胃炎輕度18例、中度50例、重度15例。活動(dòng)期炎癥66例，炎癥靜止期共17例，其中輕度9例、中度5例、重度3例。

2.2慢性胃炎活動(dòng)性與血清IL-6、IL-8、TNF-α的水平活動(dòng)期的血清IL-6、IL-8、TNF-α的水平均高于靜止期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1。

炎癥活動(dòng)性例數(shù)IL-6IL-8TNF-α炎癥靜止期173.0(1.5~4.8)0.4(0.6~2.3)1.4(1.1~1.9)炎癥活動(dòng)期666.8(4.5~9.9)0.7(0.3~0.9)2.2(1.6~2.7)t-4.322-2.183-3.363P 0.000 0.029 0.001

Hp:幽門(mén)螺桿菌； IL：白細(xì)胞介素； TNF-α：腫瘤壞死因子α

2.3慢性胃炎炎癥程度與血清IL-6、IL-8、TNF-α的水平血清IL-6水平，炎癥重度高于輕度和中度(t=5.31,P=0.001；t=3.34,P=0.006)，炎癥中度高于輕度(t=3.17,P=0.010)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；血清IL-8水平，炎癥重度高于輕度(t=3.935,P=0.003)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；血清TNF-α水平，炎癥重度高于輕度(t=3.583,P=0.002)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

炎癥程度例數(shù)IL-6IL-8TNF-α輕度184.0±2.60.43±0.151.6±0.5中度507.0±1.8a0.74±0.41a2.2±0.8a重度1510.7±5.1ab1.02±0.66ab2.7±1.2abF31.5056.1306.398P0.0000.0030.003

Hp:幽門(mén)螺桿菌； IL：白細(xì)胞介素； TNF-α：腫瘤壞死因子α;a與輕度比較，P<0.05；b與中度比較，P<0.05

2.4Hp感染密度與血清IL-6、IL-8、TNF-α的水平血清IL-6組中，3級(jí)者高于1級(jí)者(Z=3.70,P=0.000)、3級(jí)者高于2級(jí)者(Z=2.64,P=0.004)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IL-8水平，3級(jí)者高于1級(jí)者(Z=2.79,P=0.003)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；血清TNF-α水平，3級(jí)者高于1級(jí)者(Z=3.16,P=0.000)、3級(jí)者高于2級(jí)者(Z=2.46,P=0.007)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

感染密度例數(shù)IL-6IL-8TNF-α1級(jí)415.8(3.8~7.3)0.4(0.3~0.5)1.7(1.3~2.5)2級(jí)295.9(3.5~10.1)0.6(0.4~1.0)2.0(1.4~2.5)3級(jí)1311.1(7.3~15.1)0.9(0.5~1.7)3.0(2.2~3.6)H13.7599.06410.029P0.0010.0110.007

Hp:幽門(mén)螺桿菌； IL：白細(xì)胞介素； TNF-α：腫瘤壞死因子α;a與1級(jí)比較，P<0.05；b與2級(jí)比較，P<0.05

3討論

Hp感染是引起慢性胃炎及消化性潰瘍的主要病因，研究證實(shí)某些免疫機(jī)制和炎性反應(yīng)參與了胃黏膜的致病過(guò)程，其中細(xì)胞因子致病作用受到越來(lái)越廣泛的重視[7]。Hp陽(yáng)性慢性胃炎和消化性潰瘍常伴隨局部細(xì)胞免疫反應(yīng)，引起IL-6、IL-8和TNF-α等細(xì)胞因子分泌增加[7]。研究表明，不同炎癥程度慢性胃炎的細(xì)胞因子水平有異，致病機(jī)制可能是Hp作為始動(dòng)因素活化炎癥細(xì)胞，使其在胃黏膜內(nèi)聚集，達(dá)到介導(dǎo)炎性反應(yīng)的目的。Hp水平越高，胃黏膜炎癥程度可能越嚴(yán)重，Hp陽(yáng)性胃黏膜病變炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度與Hp密度有密切關(guān)系[8-9]。

IL-6是一種多功能細(xì)胞因子，以調(diào)節(jié)免疫為主，主要由T、B淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和纖維母細(xì)胞合成分泌。正常情況下，這些細(xì)胞不產(chǎn)生或很少產(chǎn)生IL-6，只有在某些特殊條件刺激下才產(chǎn)生IL-6。Hp感染后胃黏膜炎癥損傷時(shí)，IL-6大量表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，Hp陽(yáng)性胃黏膜炎癥活動(dòng)期的血清IL-6水平高于Hp靜止期的水平(P<0.05)，且IL-6水平隨著Hp感染密度增加與黏膜炎癥程度加重而升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]。Yamaoka等[11]發(fā)現(xiàn)，Hp陽(yáng)性胃黏膜組織培養(yǎng)上清液中IL-6水平顯著高于Hp陰性者，Hp陽(yáng)性胃黏膜IL-6 mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，認(rèn)為IL-6作為一種重要的前炎性因子參與了Hp陽(yáng)性胃十二指腸病變的發(fā)病機(jī)制，IL-6是病理情況下導(dǎo)致胃腸黏膜屏障破壞的主要炎性細(xì)胞因子。單核細(xì)胞是巨噬細(xì)胞的前身，具有明顯變形運(yùn)動(dòng)，能吞噬清除受傷及衰老的細(xì)胞及其碎片，被Hp感染而損傷的胃黏膜組織細(xì)胞不斷地將附近的單核細(xì)胞吞噬清除，胃黏膜屏障被破壞，導(dǎo)致Hp侵入胃黏膜下層，破壞黏膜肌層組織而造成損傷。Hp陽(yáng)性患者的血清及胃黏膜組織中IL-6水平隨Hp感染加重而增加，根除Hp后IL-6水平明顯下降，說(shuō)明IL-6與Hp感染密切相關(guān)，參與了胃黏膜損傷的病理過(guò)程[12]。

IL-8主要是由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生并具有重要生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，正常情況下具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、參與機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)等多種生物學(xué)活性。病理狀態(tài)下，因細(xì)菌或病毒的感染侵襲，引起機(jī)體細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡，導(dǎo)致局部炎性反應(yīng)，甚至組織器官損傷，IL-8在感染、炎癥、胰腺炎、黃疸及其他疾病的發(fā)病中有重要作用[13-14]。TNF-α是一種多活性細(xì)胞因子，當(dāng)患有感染、自身免疫性、某些腫瘤等疾病時(shí)，血清水平可有不同程度的增高。TNF-α通過(guò)活化白細(xì)胞并增加其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附性而易于吞噬[15]。本研究結(jié)果顯示，Hp陽(yáng)性黏膜炎癥活動(dòng)期的血清IL-8和TNF-α水平高于靜止期的水平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；重度黏膜炎癥組血清IL-8水平高于輕度組(P<0.05)，中度黏膜炎癥組血清TNF-α水平高于輕度組(P<0.05)；研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，且隨著Hp感染密度的增加，血清IL-8和TNF-α表達(dá)亦升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述，Hp感染引起細(xì)胞因子IL-6、IL-8和TNF-α過(guò)量表達(dá)，后者進(jìn)一步引起胃黏膜損傷。不同Hp感染密度(細(xì)菌數(shù)量)、細(xì)胞因子表達(dá)失衡和胃黏膜炎癥程度三者之間可能有相關(guān)性，細(xì)胞因子IL-6、IL-8和TNF-α可能作為中間環(huán)節(jié)參與胃黏膜致病，Hp感染密度與胃黏膜損傷程度有量效相關(guān)性。針對(duì)Hp感染密度及細(xì)胞因子過(guò)量表達(dá)引起的炎性反應(yīng)，選擇不同療程劑量的Hp根除方案及研制相關(guān)細(xì)胞因子抗體進(jìn)行免疫治療，或許是今后的研究熱點(diǎn)之一。

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Relationship Between Serum Interleukin-6,Interleukin-8,Tumor Necrosis Factor-α and Helicobacter Pylori Density

XIEHui-zhonga,WANGLib,FUZhong-biaoa,LIUChang-jianga,YANGWei-zhongc.

(a.DepartmentofGastroenterology,b.DepartmentofPathology,c.DepartmentofDigestiveEndoscopy,HainanProvinceNongkenGeneralHospital,Haikou570311,China)

Abstract:ObjectiveTo research the relationship between serum interleukin-6(IL-6),interleukin-8(IL-8),tumor necrosis factor α(TNF-α) andHelicobacterpylori(Hp) density.MethodsA total of 134 outpatients were randomly selected in the Department of Gastroenterology of Hainan Province Nongken General Hospital from Jan. 2011 to Dec. 2013 to receive the gastroscopy and their the serum IL-6 level was detected by chemiluminescence and the serum IL-8,the TNF-α level were detected by radioimmunity.TheHpdensity and the histological grading of gastric mucosal inflammation were pathologically diagnosed.ResultsAmong the 134 patients, there were 83 cases of pathologically diagnosedHpinfection,i.e.positive rate 61.94%(83/134);includingHpinfection desity level one 41 cases,level two 29 cases,and level three 13 cases.There were 18 cases of mild chronic gastritis,50 cases moderate gastritis,and 15 cases of severe gastritis.66 cases were in active inflammation stage,17 cases in the resting stage,including 9 mild degree,5 moderate degree and 3 severe degree.The IL-6,IL-8,TNF-α levels ofHppositive inflammation stage were higher than the resting stage′s levels(P<0.05)；the levels of IL-6,IL-8,TNF-α in the severe group were higher than the levels of the mild and the moderate group with statistically significant difference(P<0.05)；the levels of IL-6,IL-8 and TNF-α showed statistically significant difference(P<0.05) between groups with differentHpdensities.ConclusionHpinfection density grade shows closely relationship with the levels of the IL-6,IL-8,TNF-α,and the activity and degree of the inflammation.

Key words:Helicobacterpylori; Gastritis; Interleukin; Tumor necrosis factor α

收稿日期：2013-06-25修回日期：2014-09-05編輯：樓立理

基金項(xiàng)目：海南省自然科學(xué)基金(811170)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.01.057

中圖分類(lèi)號(hào)：R575.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)01-0142-03