狗肝菜化學(xué)成分與藥理作用的研究進(jìn)展Δ

許有瑞，張可鋒，鐘明利，高 雅，段小群（桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西桂林 541004）

狗肝菜為爵床科狗肝菜屬植物Dicliptera chinensis（L.）Juss.的干燥全草，又名假紅藍(lán)、豬肝菜等，生于海拔1 800 m以下的疏林下、溪邊、路旁，分布在廣西、廣東、福建、臺(tái)灣、云南等地，具有清熱解毒、生津利尿、清肝明目之功效，常用于治療熱病斑疹、腫毒疔瘡、便血、溺血、小便不利等癥[1-2]，同時(shí)還可用于煮粥、煲湯等，在民間應(yīng)用廣泛。狗肝菜最早記載于民國(guó)時(shí)期蕭步丹的《嶺南采藥錄》：“梗青色，葉像杏仁，性寒涼、散熱。有本地羚羊之稱。凡覺(jué)熱氣盛、肝火重，服之甚有功效”[3]。后來(lái)在《嶺南草藥志》《廣西中草藥》《廣西本草選編》《中國(guó)壯藥志》《湖南藥物志》等地方草藥志[4]以及1977年版《中國(guó)藥典》（一部）[5]中也有記載。

對(duì)狗肝菜化學(xué)成分與藥理作用的研究始于近十多年。迄今為止，共從中分離鑒定出了120 多個(gè)化合物，主要有揮發(fā)油類、脂肪酸類、黃酮類、苯丙素類、萜類、甾體及甾體皂苷、多糖等。藥理作用的研究則集中在多糖保肝及抗肝纖維化方面。筆者以“狗肝菜”“Dicliptera chinensis（L.）Juss.”為關(guān)鍵詞，通過(guò)檢索中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方、Google 學(xué)術(shù)、Medline 4 個(gè)中外文數(shù)據(jù)庫(kù)或搜索引擎，共檢索到有關(guān)其栽培（7 篇）、生藥學(xué)（3篇）、化學(xué)成分（12篇）和藥理作用研究（13篇）以及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)（2 篇）的文獻(xiàn)共37 篇，其中有效文獻(xiàn)31 篇。現(xiàn)對(duì)狗肝菜的化學(xué)成分與藥理作用進(jìn)行較為全面的綜述，為進(jìn)一步研究其藥理作用與產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供參考。

1 化學(xué)成分

1.1 揮發(fā)油類化合物

康笑楓等[6]采用水蒸氣蒸餾法提取狗肝菜中的揮發(fā)性成分，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法分離鑒定出了67種化合物，主要有1，4-萘二酮，2-羥基-3-（1-丙烯基）（16.86%）、石竹烯（15.89%）、植醇（10.36%）等。

1.2 脂肪酸類化合物

高毓?jié)萚7]用乙醚提取，氫氧化鉀-甲醇酯化，采用GC-MS法對(duì)狗肝菜中脂肪酸及脂溶性成分進(jìn)行了分析測(cè)定。結(jié)果，從中檢測(cè)出了103 個(gè)成分，鑒定了其中42 個(gè)（占樣品總量的88.54%），包括15個(gè)脂肪酸（54.47%）成分和27個(gè)非脂肪酸成分。總脂肪酸中不飽和脂肪酸占51.30%，主要為油酸（26.86%）、反式亞油酸（21.70%）和棕櫚油酸。此外，還發(fā)現(xiàn)了2-己烷基環(huán)丙烷辛酸和2-辛烷基環(huán)丙烷辛酸這2 種較為少見(jiàn)的奇數(shù)碳脂肪酸。

1.3 苯丙素類化合物

到目前為止，從狗肝菜中共分離得到了9個(gè)苯丙素類化合物，包括苯丙酸、香豆素與木脂素，分別為綠原酸（見(jiàn)圖1 化合物1，下同）、阿魏酸（2）、6-羥基香豆素（3）、濱篙內(nèi)酯（4）[8]、開(kāi)環(huán)異落葉松脂醇二甲醚二乙酸酯（5）、5-甲氧基-4，4′-二氧甲基開(kāi)環(huán)落葉松脂二乙酸酯（6）、羥基華遠(yuǎn)志內(nèi)酯甲醚（7）[9]、去氫催葉蘿芙葉醇（8）與催葉蘿芙葉醇（9）[10]，結(jié)構(gòu)詳見(jiàn)圖1。

圖1 狗肝菜中苯丙素類化合物的結(jié)構(gòu)

1.4 黃酮類化合物

黃酮類化合物是一類重要的含氧雜環(huán)天然有機(jī)化合物，具有抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、抗癌等生物活性。當(dāng)前臨床應(yīng)用的黃酮類成分主要有蘆丁、黃芩苷、葛根素、水飛薊素等。到目前為止，從狗肝菜中分離得到的黃酮類化合物僅有2個(gè)，分別為表兒茶素（見(jiàn)圖2化合物10，下同）和山奈苷（11）[8]，結(jié)構(gòu)詳見(jiàn)圖2。

圖2 狗肝菜中黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)

1.5 萜類化合物

萜類化合物在自然界中分布廣泛、骨架龐雜，具有多種生物活性，一直是天然藥物化學(xué)研究中比較活躍的領(lǐng)域，也是新藥研究中先導(dǎo)化合物的重要來(lái)源。目前從狗肝菜中分離到5個(gè)萜類化合物，包括單萜、倍半萜、環(huán)烯醚萜和五環(huán)三萜，分別為黑麥草內(nèi)酯（見(jiàn)圖3化合物12，下同）[9]、異土木香內(nèi)酯（13）、梔子苷（14）、齊墩果酸（15）與烏蘇酸（16）[8]。由于12 和13 具有細(xì)胞毒活性，因此其可能是狗肝菜抗癌活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，結(jié)構(gòu)詳見(jiàn)圖3。

圖3 狗肝菜中萜類化合物的結(jié)構(gòu)

1.6 甾體及其苷類化合物

甾體類化合物均具有很強(qiáng)的生理活性，臨床上廣泛應(yīng)用于抗炎、抗過(guò)敏、抗休克等。目前，從狗肝菜中共分離得到了11 個(gè)甾體及其苷類化合物，分別為β-谷甾醇（見(jiàn)圖4 化合物17，下同）[10]、胡蘿卜苷（18）[9]、谷甾烷-4-烯-3-酮（19）[10]、豆甾醇葡萄糖苷（20）[9]、豆甾烷-5-烯-7-酮-3β-棕櫚酸酯（21）、3β，6β-豆甾烷-4-烯-3，6-二醇（22）、6β-羥基-豆甾烷-4-烯-3-酮（23）、3β-羥基-豆甾烷-5-烯-7-酮（24）、羽扇豆醇（25）、羽扇烯酮（26）[10]和薯蕷皂苷元（27）[8]，結(jié)構(gòu)詳見(jiàn)圖4。

圖4 狗肝菜中甾體及其苷類化合物的結(jié)構(gòu)

1.7 多糖

多糖是狗肝菜中研究較多的一類成分，包括含量測(cè)定、提取工藝優(yōu)化與藥理作用的研究。多糖的含量測(cè)定大多采用硫酸-苯酚法。馮小映等[11]就采用該法測(cè)定了狗肝菜中多糖的含量，結(jié)果多糖含量可達(dá)5.23%。在提取方法方面，常用的為水提醇沉法。例如徐玉琳、張可鋒、李南薇等[12-14]采用此法以多糖得率為指標(biāo)，以提取時(shí)間、提取溫度、提取次數(shù)和料液比為考察因素，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選了多糖提取工藝。結(jié)果，最優(yōu)工藝為提取時(shí)間2 h、提取2次、提取溫度85 ℃、料液比1∶20，此工藝條件下多糖得率為（3.26±0.3）%。此外，傅鵬等[15]還比較了微波法、超聲波法和溶劑回流提取法所得多糖的產(chǎn)率和含量，結(jié)果溶劑回流提取法最優(yōu)，多糖得率為9.15%、含量為87.90%。

1.8 其他化合物

除以上各類化合物外，從狗肝菜中還分離得到了環(huán)八硫（見(jiàn)圖5 化合物28，下同）[9]、金色酰胺醇（29）、金色酰胺醇酯（30）和腦苷脂dicliptercerebroside（31）[16]，結(jié)構(gòu)詳見(jiàn)圖5。

2 藥理作用

2.1 抗氧化

圖5 狗肝菜中其他化合物的結(jié)構(gòu)

研究表明，機(jī)體的老化及相關(guān)疾病的發(fā)生與其產(chǎn)生的過(guò)多自由基有密切關(guān)系，因此抗氧化是預(yù)防衰老的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。李南薇等[17]分別提取了狗肝菜中的黃酮、多糖和多酚類成分，并對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，狗肝菜中黃酮、多糖和多酚具有較強(qiáng)的清除1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）自由基和羥基自由基的能力，對(duì)DPPH 自由基的清除率分別為76.7%、88.2%、35.8%，對(duì)羥基自由基的清除率分別為90.8%、95.7%、80.9%。

2.2 調(diào)節(jié)肝酶活性及抗炎性因子

張可鋒等[18]通過(guò)建立四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性肝損傷模型，對(duì)狗肝菜85%乙醇提取物的不同極性部位的保肝活性進(jìn)行了篩選。結(jié)果，狗肝菜正丁醇萃取物和水萃取物可明顯抑制模型小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和丙二醛（MDA）的活性，并升高超氧化物歧化酶（SOD）的活性，因此初步判定大極性成分是狗肝菜保肝活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

此外，李海燕等[19]通過(guò)建立CCl4致大鼠肝損傷模型和卡介苗加脂多糖誘發(fā)的小鼠免疫性肝損傷模型，考察了狗肝菜多糖對(duì)模型動(dòng)物血清中ALT與AST活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)其能顯著降低肝損傷模型動(dòng)物血清中ALT 與AST 的活性，表明狗肝菜多糖對(duì)大鼠CCl4致肝損害與小鼠免疫性肝損傷有良好的保護(hù)作用。張小玲等[20-21]還考察了狗肝菜多糖對(duì)D-半乳糖胺（D-GalN）誘發(fā)的大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。結(jié)果，狗肝菜多糖能顯著降低模型大鼠血清中ALT、AST的水平，而且組織病理學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其還能降低肝組織損害程度。同時(shí)，他們也建立了D-GalN及脂多糖所致大鼠急性重癥肝炎模型，考察了狗肝菜多糖對(duì)肝損傷的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)其不僅可以減少炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細(xì)胞介素（IL）-1β和一氧化氮（NO）的分泌，還可明顯減輕肝組織壞死的范圍和程度，而且能夠降低血清氨基轉(zhuǎn)移酶水平，從而降低肝損傷大鼠的死亡率。

崔紅花等[22]通過(guò)透析袋截留將狗肝菜多糖按相對(duì)分子質(zhì)量分段，考察了不同相對(duì)分子質(zhì)量（＜6 000、6 000～8 000、＞10 000）多糖對(duì)CCl4所致急性肝損傷模型大鼠血清中ALT、AST活性、總蛋白（TP）含量的影響以及肝組織中SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性、MDA含量及肝組織形態(tài)學(xué)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)狗肝菜總多糖及3 種不同相對(duì)分子質(zhì)量的多糖均具有保肝作用，其中相對(duì)分子質(zhì)量＜6 000者效果最佳。同時(shí)，趙沁元等[23]也考察了不同相對(duì)分子質(zhì)量狗肝菜多糖對(duì)D-GalN致急性肝損傷模型大鼠的保肝作用，并得到了和文獻(xiàn)[22]一致的結(jié)果。高雅等[24]還研究了狗肝菜多糖對(duì)抗結(jié)核藥物（異煙肼和利福平）致肝損傷模型小鼠的保護(hù)作用與機(jī)制。結(jié)果顯示，狗肝菜多糖能減輕模型小鼠的肝組織病理?yè)p害、減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而且可以降低血清中ALT、AST、堿性磷酸酶（AKP）的活性與肝組織中TNF-α、IL-6、NO的含量。這表明狗肝菜多糖對(duì)異煙肼和利福平類抗結(jié)核藥物致肝損傷具有保護(hù)作用，這可能是由其抗炎作用介導(dǎo)的。

肝纖維化是由許多病因?qū)е碌母闻K彌漫性損傷，是所有慢性肝病發(fā)展的共同病理過(guò)程，對(duì)其有效防治仍是困擾醫(yī)學(xué)界的重大難題。朱華等[25]建立了二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型，評(píng)價(jià)了狗肝菜多糖對(duì)肝纖維化的拮抗作用。結(jié)果顯示，不同劑量的狗肝菜多糖均能降低大鼠血清中的ALT、AST和總膽紅素（TBIL）水平，升高白蛋白（ALB）水平，還可以減輕大鼠脾腫大與肝內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度。此外，李志超等[26-27]還研究了狗肝菜多糖對(duì)二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝組織中基質(zhì)金屬蛋白酶1（MMP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP-1）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)其能升高大鼠肝組織MMP-1 的表達(dá)、降低TIMP-1 與VEGF 的表達(dá)。這表明狗肝菜多糖可能通過(guò)此機(jī)制來(lái)發(fā)揮其抗肝纖維化作用。在此前研究的基礎(chǔ)上，張可鋒等[28]同樣以二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化為模型，研究了狗肝菜多糖對(duì)肝纖維化的拮抗作用與機(jī)制。結(jié)果顯示，其能降低大鼠血清中ALT、AST、MDA、SOD和肝組織中玻璃酸（HA）、層黏連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原（Ⅲ-PC）、Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）、TNF-α、IL-6、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）的水平或者含量；病理切片顯示，其還能減輕肝組織炎癥壞死和肝纖維化病變程度。

2.3 免疫調(diào)節(jié)功能

免疫系統(tǒng)對(duì)機(jī)體維持自身生理動(dòng)態(tài)平衡與相對(duì)穩(wěn)定具有非常重要的作用，它的紊亂不僅會(huì)產(chǎn)生多種疾病，而且與衰老及老年多發(fā)病的發(fā)生有關(guān)。多糖對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)可通過(guò)增強(qiáng)免疫器官和細(xì)胞功能，以及促進(jìn)細(xì)胞因子釋放、活化補(bǔ)體等特異性和非特異性免疫功能來(lái)實(shí)現(xiàn)。朱華等[29]通過(guò)建立環(huán)磷酰胺經(jīng)直腸給藥致免疫低下的小鼠模型，考察了狗肝菜多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響。結(jié)果，狗肝菜多糖能抑制由環(huán)磷酰胺引起的小鼠脾萎縮和胸腺萎縮，促進(jìn)小鼠對(duì)碳粒的吞噬作用和血清溶血素的生成。這表明狗肝菜多糖能增強(qiáng)由環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能。

3 結(jié)語(yǔ)

作為一種藥食同源的植物，人們逐漸認(rèn)識(shí)到狗肝菜在治療與保健方面的功效。近十多年來(lái)國(guó)內(nèi)研究者對(duì)狗肝菜化學(xué)成分與藥理作用開(kāi)展了許多研究工作，但仍有一些不足。一方面，對(duì)狗肝菜化學(xué)成分的研究大多集中于小極性或中等極性成分上且不夠全面，而對(duì)大極性成分的研究較少，主要集中在多糖的提取工藝和含量測(cè)定上，然而到目前多糖的結(jié)構(gòu)尚未確定；另一方面，藥理研究單一，主要集中于其多糖保肝與抗肝纖維化的藥效實(shí)驗(yàn)，作用機(jī)制的研究不夠深入。此外，由于狗肝菜產(chǎn)區(qū)和采收季節(jié)的不同其多糖含量會(huì)存在差異[30-31]。因此，以其多糖含量為指標(biāo)的更為細(xì)致的產(chǎn)地適宜性、采收及其加工方法的研究將不可或缺。隨著對(duì)狗肝菜多糖等成分結(jié)構(gòu)、藥效與機(jī)制的進(jìn)一步深入研究，狗肝菜多糖將有望開(kāi)發(fā)為一種具有保肝作用的藥物制劑或保健品。

[1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].北京：科學(xué)出版社，2002：236.

[2]朱華.中國(guó)壯藥志[M].南寧：廣西人民出版社，2003：287.

[3]蕭步丹.嶺南采藥錄[M].廣州：廣東科技出版社，2009：103.

[4]葉碧顏，張宜勇，何偉珍.南藥狗肝菜的研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2011，6（20）：235.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].1977年版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1977：369.

[6]康笑楓，徐淑元，秦曉霜.狗肝菜中揮發(fā)油的化學(xué)成分分析[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，23（4）：14.

[7]高毓?jié)瑮钚銈ィF民.GC-MS 法分析狗肝菜中的脂肪酸及其脂溶性成分[J].中草藥，2005，36（12）：1 778.

[8]于治成.狗肝菜的化學(xué)成分及其多糖保肝有效部位篩選研究[D].廣州：廣東藥學(xué)院，2011.

[9]高毓?jié)瑮钚銈ィF民.狗肝菜乙醇提取物的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志，2006，31（12）：985.

[10]高毓?jié)瑮钚銈ィF民.狗肝菜的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2007，38（1）：14.

[11]馮小映，周誠(chéng)，黃恩，等.狗肝菜多糖含量的測(cè)定[J].中藥材，2003，26（9）：643.

[12]徐玉琳，林穎，周誠(chéng)，等.UV法測(cè)定狗肝菜與紅絲線草的多糖含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2008，19（5）：387.

[13]張可鋒，朱華，高雅，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選狗肝菜中多糖提取工藝[J].中國(guó)藥房，2010，21（3）：219.

[14]李南薇，范媛媛，陸映機(jī).狗肝菜多糖提取工藝研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（11）：116.

[15]傅鵬，朱華，張可鋒.狗肝菜中多糖提取工藝的比較研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27（5）：445.

[16]Gao YT，Yang XW，Ai TM.Dicliptercerebroside，a novel cerebroside from Dicliptera chinensis[J].J Asian Nat Prod Res，2007，9（8）：763.

[17]李南薇，劉長(zhǎng)海，陸映機(jī).狗肝菜功能性成分的抗氧化活性[J].食品科學(xué)，2011，32（13）：71.

[18]張可鋒，朱華，高雅.狗肝菜保肝作用有效部位篩選研究[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（4）：497.

[19]李海燕，王旭深.狗肝菜多糖保肝作用研究[J].中藥材，2006，29（8）：833.

[20]張小玲，肖勝軍，高雅，等.狗肝菜多糖對(duì)D-半乳糖胺所致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（2）：278.

[21]張小玲，肖勝軍，容明智，等.狗肝菜多糖減輕D-氨基半乳糖與脂多糖誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷[J].中國(guó)病理生理雜志，2010，26（5）：952.

[22]崔紅花，于治成，沈志濱，等.狗肝菜不同相對(duì)分子質(zhì)量多糖對(duì)四氯化碳所致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（9）：185.

[23]趙沁元，崔紅花，吳潔瑩，等.狗肝菜不同相對(duì)分子質(zhì)量多糖對(duì)D-GlaN 致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（13）：261.

[24]高雅，鐘明利，鐘家良，等.狗肝菜多糖對(duì)抗結(jié)核藥物致肝損傷的研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，31（6）：953.

[25]朱華，陳力鋒，張可鋒.狗肝菜多糖的抗肝纖維化研究[J].華西藥學(xué)雜志，2012，27（6）：634.

[26]李志超，曹慶生.狗肝菜多糖對(duì)肝纖維化大鼠肝組織MMP-1及TIMP-1表達(dá)的影響[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（16）：1 314.

[27]李志超，曹慶生.狗肝菜多糖對(duì)肝纖維化大鼠肝組織VEGF表達(dá)的影響[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，34（4）：192.

[28]張可鋒，高雅，鐘明利，等.狗肝菜多糖對(duì)二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠的影響[J].中藥藥理與臨床，2014，30（6）：71.

[29]朱華，張小玲，張可鋒，等.狗肝菜多糖對(duì)免疫功能低下小鼠免疫功能的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（4）：393.

[30]傅鵬，朱華，楊世聯(lián)，等.不同產(chǎn)地狗肝菜中多糖的含量測(cè)定[J].中華中醫(yī)藥雜志，2010，25（4）：626.

[31]傅鵬，朱華，鄒登峰，等.不同采收季節(jié)的狗肝菜中多糖含量測(cè)定[J].華夏醫(yī)學(xué)，2011，24（3）：300.