蜂蜜對急性酒精中毒大鼠的解酒作用研究

梁璐璐，王影姣，金小寶

(廣東藥學院基礎學院/廣東省生物活性藥物研究重點實驗室，廣州 510006)

急性酒精中毒是指由于一次過量飲酒而引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)由興奮轉為抑制的狀態(tài)［1］，嚴重者可引起急性胃出血、急性胃炎、急性肝炎、高血壓等甚至死亡。由于飲酒而引起的相關問題是僅次于心血管疾病、腫瘤的第三大公共衛(wèi)生問題［2］，因此，研發(fā)解酒產品有很好的應用前景。《中國藥典》［3］記載，蜂蜜可以“補中、潤燥、止痛、解毒”。有文獻報道，蜂蜜能夠促進酒精的分解吸收和減輕飲酒帶來的頭痛癥狀［4］，很多解酒保健品中都添加了蜂蜜組分。但是，蜂蜜解酒的物質基礎及其可能的作用機制尚未闡明。本研究擬探討蜂蜜是否對急性酒精中毒大鼠具有解酒作用，并對其可能的作用機制進行初步探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 SPF 級雄性SD 大鼠，體質量為180—200g，由廣州中醫(yī)藥大學(大學城)實驗動物中心提供，合格證號SCXK (粵)2013-0020。屏障系統(tǒng)動物房，每籠放養(yǎng)4 只，每天接受12h 光照/12h 黑暗，光照周期為8:00—20:00，動物可以自行攝取標準飼料和清潔用水，適應性喂養(yǎng)3d 后啟用。實驗室室溫控制在(22±3)℃，相對濕度為50%—70%。動物實驗遵守國際實驗動物倫理學要求。

1.1.2 藥物與試劑 食用級無水乙醇、0.9%生理鹽水(廣州文睿科學儀器有限公司);冠生園純凈蜂蜜(上海冠生園蜂制品有限公司，批號170508M1);維衛(wèi)康鼎久解酒口服液 (北京維衛(wèi)康科技有限公司，批號20140417);乙醇檢測試劑盒(BioAssay Systems，USA);ADH 試劑盒(南京建成生物公司，批號:20140417);ALDH 試劑盒(北京安迪華泰科技有限公司，批號:HTBX030);總蛋白試劑盒(南京建成生物公司，批號20140417)。

1.1.3 實驗儀器 高速冷凍離心機(Centrifuge 5810R，德國Eppendorf);組織勻漿機(IKA-T10，德國IKA 公司);電熱恒溫水箱(金壇市精達儀器制造廠);分析天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司);分光光度計(U-2900，日本HITACHI);450nm 酶標儀(ELX808，美國BioTek 公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 36 只SPF 級雄性SD 大鼠，適應性喂養(yǎng)3d 后均禁食不禁水13h，隨機分為6 組:正常組(不做任何處理)、模型組(灌服生理鹽水15mL/kg)、蜂蜜低濃度組(灌服5%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜中濃度組(灌服10%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜高濃度組(灌服20%蜂蜜15mL/kg)、陽性藥物對照組(根據(jù)人與動物藥物劑量換算灌服鼎久解酒口服液12.5mL/kg)，每組6 只。

1.2.2 模型構建及給藥 本研究參考酒精中毒大鼠模型構建的方法［5］并加以改進，采用75%食用級無水乙醇按10mL/kg 一次性灌胃法構建急性酒精中毒大鼠模型。除正常組外，其余各組均以75%食用級無水乙醇按10mL/kg 灌胃大鼠，30min 后，各治療組分別給藥，模型組灌服生理鹽水。

1.2.3 動物取材及標本處理 各處理組大鼠給藥2.5h后腹主動脈取血并處死大鼠，立即剖取肝臟和胃，肝臟去包膜、胃去內容物后經(jīng)預冷的生理鹽水反復沖洗干凈，用濾紙吸干、稱重，冰浴下按1∶9 加入預冷的生理鹽水，用自動組織勻漿機分別制成肝組織和胃組織勻漿。收集的全血靜置1h 后2 500r/min 離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作血清乙醇濃度檢測。制備的10%肝組織勻漿3 000r/min 低溫離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作肝ADH、ALDH、總蛋白含量檢測。制備的10%胃組織勻漿3 000r/min 低溫離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作胃ADH、ALDH、總蛋白含量檢測。

1.2.4 檢測指標 血清乙醇濃度，嚴格按照乙醇檢測試劑盒說明書完成檢測;肝ADH 和ALDH 活性，嚴格按照各試劑盒說明書完成檢測，結果用肝組織蛋白含量校正;胃ADH 和ALDH 活性，嚴格按照各試劑盒說明書完成檢測，結果用胃組織蛋白含量校正。

2 結果與分析

2.1 大鼠灌酒后一般形態(tài)表現(xiàn)

除正常組外，各實驗組大鼠灌酒5min 后均相繼出現(xiàn)后腹拖地，共濟失調(步態(tài)不穩(wěn)，困倦感，動作不協(xié)調)，尿失禁，側臥，翻正反射消失(將大鼠背部向下，保持30s 不動)等醉酒癥狀，說明大鼠急性酒精中毒模型構建成功。

2.2 蜂蜜對急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度的影響

與正常組相比，模型組大鼠血清乙醇濃度極顯著升高(P＜0.01)，說明急性酒精中毒大鼠造模成功。與模型組比較，蜂蜜低、中濃度組大鼠血清乙醇濃度均顯著降低(P＜0.05)，蜂蜜高濃度組大鼠血清乙醇濃度極顯著降低(P＜0.01)。與陽性藥物對照組相比，蜂蜜各處理組大鼠血清乙醇濃度明顯升高(P＜0.01) (表1)。此結果表明，蜂蜜可降低急性酒精中毒大鼠血清中的乙醇含量，但效果不及陽性藥物對照組。

表1 大鼠血清乙醇濃度(±s，n=6)

表1 大鼠血清乙醇濃度(±s，n=6)

注:與正常組相比:# P＜0.01;與模型組相比:* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽性藥物對照組相比:△P＜0.01

2.3 蜂蜜對急性酒精中毒大鼠肝、胃組織中的ADH 的影響

與模型組比較，蜂蜜中、高濃度組大鼠肝組織ADH活性極顯著升高(P＜0.01)，蜂蜜低濃度組大鼠胃組織ADH 活性顯著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組大鼠胃組織ADH 活性極顯著升高(P＜0.01)。與陽性藥物對照組相比，蜂蜜低濃度組大鼠肝組織ADH 活性顯著降低(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組大鼠肝組織ADH活性降低，但無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05)。蜂蜜各濃度組胃ADH 活性均極顯著減低(P＜0.01)(表2)。此結果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝組織和胃組織ADH活性水平，但升高的水平不及陽性藥物對照組。

表2 大鼠肝、胃組織ADH 活性(±s，n=6)

表2 大鼠肝、胃組織ADH 活性(±s，n=6)

注:與模型組相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽性藥物對照組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01

2.4 蜂蜜對急性酒精中毒大鼠肝、胃組織中的ALDH的影響

與模型組比較，蜂蜜低濃度組肝組織ALDH 活性顯著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組肝組織和胃組織ALDH 活性極顯著升高(P＜0.01)。與陽性藥物對照組相比，蜂蜜各濃度組大鼠肝ALDH 活性降低，但無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05)，蜂蜜低濃度組大鼠胃ALDH 活性極顯著降低(P＜0.01)，蜂蜜中、高濃度組大鼠胃ALDH活性升高，但無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05) (表3)。此結果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝組織和胃組織ALDH 活性水平，但部分濃度的蜂蜜組升高水平不及陽性藥物對照組。

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

注:與模型組相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽性藥物對照組相比:△P＜0.01

3 討論

解酒藥物的核心是降低血液中乙醇及其代謝產物的濃度而減輕其對各器官的損傷。進入體內的酒精大部分由ADH 氧化為乙醛，乙醛由ALDH 轉化為乙酸，再經(jīng)三羧酸循環(huán)，最后氧化成二氧化碳和水排出體外［6］。ADH 和ALDH 主要分布在肝臟和胃中，是酒精代謝的關鍵酶［7，8］。本研究結果表明，蜂蜜可以通過提高肝組織和胃組織中ADH 和ALDH 活性從而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度，具有較好的解酒作用。乙醛是導致醉酒不適以及肝損傷的主要物質［9］，肝臟中ALDH 的活性升高直接導致乙醛在肝臟中的量減少，說明蜂蜜具有潛在的護肝功效，可作為解酒護肝產品的原材料進一步研究。

蜂蜜成分復雜，含有碳水化合物、蛋白質、礦物質、維生素、有機酸、黃酮、酚酸、酶等200 多種化學物質［10］，具有抑菌、抗氧化和抗炎等活性，對治療創(chuàng)傷、燒傷、胃潰瘍等疾病具有一定的療效［11，12］。眾多研究發(fā)現(xiàn)，蜂蜜中的糖類、黃酮類和酚酸類［13-18］化學物質是其主要起作用的生物活性成分。目前已知我國傳統(tǒng)解酒草藥葛根和葛花中的主要解酒有效成分為黃酮類物質［19，20］，但尚不知道蜂蜜中的何種有效生物活性成分導致這種解酒作用。因此，蜂蜜中的有效解酒成分需要進一步研究。

4 結論

本文通過構建急性酒精中毒SD 大鼠模型，探討了蜂蜜的解酒作用及其可能的作用機制，結果表明，蜂蜜可通過提高肝組織和胃組織中ADH 和ALDH 活性從而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度，有較好的解酒作用。

［1］陳小彬，朱衛(wèi)彬，阮林浩，等.高遷移率族蛋白1 在急性酒精中毒中的作用［J］.生物化學與生物物理進展，2014，41(4):388-392.

［2］Lin KONG，Jie Li，Xiuzhen Zhang.Prevention and cure of acute alcohol into-xication in mice by administration of compound of japanese raisintree fruit，lobed kudzuvine flower bud and lightyellow sophora root ［J］.Agricultural Science ＆Technology，2014，15(5):874-876，881.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:337.

［4］喝蜂蜜水能有效解酒［J］.保健醫(yī)苑，2014，2:63.

［5］王亞南，劉儒林，程秀臻.酒精中毒大鼠動物模型的研究［J］.中國康復理論與實踐，2006，12(4):319-320.

［6］屈耀寧，董蕾，史海濤，等.己酮可可堿對小鼠酒精性肝病酒精代謝酶和核受體PPAR-α 的影響［J］.實用肝臟病雜志，2014，17(2):163-167.

［7］Sha K1，Choi SH1，Im J2，et al.Regulation of ethanol-related behavior and ethanol metabolism by the Corazonin neurons and Corazonin receptor in Drosophila melanogaster ［J］.PLoS One，2014，9(1):e87062.

［8］Lee YP1，Liao JT，Cheng YW，et al.Inhibition of human alcohol and aldehyde dehydrogenases by acetaminophen:Assessment of the effects on first-pass metabolism of ethanol ［J］.Alcohol，2013，47(7):559-565.

［9］Hayashi N，George J，Takeuchi M，et al.Acetaldehyde-derived advanced glycation end-products promote alcoholic liver disease ［J］.PLoS One，2013，8(7):e70034.

［10］Ramanauskiene K，et al.The quantitative analysis of biologically active compounds in Lithuanian honey ［J］.Food Chemistry，2012，132(3):1544-1548.

［11］Juraj Majtan.Honey:An immunomodulator in wound healing ［J］.Wound Repair Regen，2014，22 (2):187-192.

［12］王遠，賈歌，王萌，等.蜂蜜抗氧化活性研究進展［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2014，40(7):111-114.

［13］Paulus H.S.，et al.How honey kills bacteria ［J］.FASEB J，2010，24(7):2576-2582.

［14］鄒運璇.糖類敷料應用于傷口治療的研究進展［J］.濱州醫(yī)學院學報，2013，12(6):443-445.

［15］Blasa M，et al.The cellular an-tioxidant activity in red blood cells (CAA-RBC):A newapproach to bioavailability and synergy of phytochemicalsand bo-tanical extracts ［J］.Food Chemistry，2011，125:185-191.

［16］Alvarez-Suarez JM，Tulipani S，Díaz D，et al.Antioxidant and antimicrobial capacity of several monofloral Cuban honeys and their correlation with color，polyphenol con-tent and other chemical compounds ［J］.Food Chen Toxicol，2010，48(8-9):2490-2499.

［17］趙立夫，徐云友，董蕊，等.單花蜜的化學成分研究進展［J］.食品科學，2013，34(07):330-334.

［18］戚亞梅.中國蜂蜜產品競爭力定位分析［J］.中國食物與營養(yǎng)，2014，20(9):42-45.

［19］Wei Song，et al.Chemistry of the Chinese herbal medicinePu-erariae Radix (Ge-Gen):A review ［J］.Journal of Chinese Pharmaceutical Scien-ces，2014，23(6):347-360.

［20］王勝鵬，陳美婉，王一濤.葛花化學成分和藥理活性研究進展［J］.中藥藥理與臨床，2012，28(2):194-197.