FOXQ1基因在肝細胞性肝癌中的表達及與臨床病理特征的關(guān)系

黃　恒

(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院 普外科, 四川 瀘州, 646000)

FOXQ1基因在肝細胞性肝癌中的表達及與臨床病理特征的關(guān)系

黃恒

(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院 普外科, 四川 瀘州, 646000)

摘要:目的探討叉頭框蛋白Q1(FOXQ1)基因表達與肝細胞肝癌(HCC)相關(guān)臨床病理特征之間的關(guān)系。方法選擇病理學(xué)檢查確診，進行肝膽外科手術(shù)治療的肝癌患者68例，術(shù)中分別取新鮮肝癌組織及癌旁組織。以免疫組織化學(xué)法檢測樣本中FOXQ1蛋白的表達，分析其與臨床相關(guān)病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果FOXQ1蛋白陽性表達主要定位于肝癌細胞的胞質(zhì)內(nèi)，肝癌組織中FOXQ1陽性表達率為61.76%, 癌旁組織FOXQ1陽性表達率為11.76%, 2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HCC中FOXQ1蛋白表達與年齡、TNM分期、腫瘤分化程度、腫瘤數(shù)目和腫瘤大小等參數(shù)有相關(guān)性。Spearman等級相關(guān)性分析表明隨TNM分期的增高，F(xiàn)OXQ1蛋白表達升高(r=0.667,P<0.05); 隨腫瘤分化程度降低，F(xiàn)OXQ1蛋白表達顯著升高(r=-0.564,P<0.01)。結(jié)論FOXQ1在肝癌細胞的細胞質(zhì)中高表達，其檢測可作為HCC惡性程度及腫瘤分化程度的判斷指標(biāo)。

關(guān)鍵詞:叉頭框蛋白Q1; 肝細胞肝癌; 病理特征; 免疫組織化學(xué)

肝細胞性肝癌(HCC)是中國常見的惡性腫瘤之一，其死亡率占所有腫瘤的第3位[1]。中國的HCC患者多數(shù)發(fā)生在肝硬化的基礎(chǔ)上，多數(shù)患者就診時已為中晚期HCC，可手術(shù)切除的不到20%，適合局部消融患者有限[2]。因此尋找肝癌發(fā)生發(fā)展中的重要基因及蛋白，尋找早期診斷和治療的有效途徑有其重要意義[3]。叉頭框(FOX)蛋白是一類廣泛存在真核細胞的轉(zhuǎn)錄因子，研究發(fā)現(xiàn)叉頭框蛋白Q1(FOXQ1)作為轉(zhuǎn)錄因子，其活性的高低、亞細胞定位及信號通路均與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其異常高表達見于結(jié)腸癌、卵巢、乳腺、非小細胞肺癌、膀胱癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、胰腺導(dǎo)管癌[4]。關(guān)于其在HCC患者肝癌組織中的表達與臨床病理特征的關(guān)系研究報道甚少。本研究使用免疫組織化學(xué)法檢測FOXQ1在肝癌組織中的表達，探討其與臨床相關(guān)病理特征之間的關(guān)系，報告如下。

1資料與方法

1.1　一般資料

選擇2013年9月—2014年9月于瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理學(xué)檢查確診，并進行肝膽外科手術(shù)治療的肝癌患者68例，所有患者術(shù)前均未放療、化療。其中男52例，女16例；年齡23～72歲，中位年齡52歲。Gleason組織學(xué)分級[5]: 高分化組(Gleason評分2～4)11例，中分化組(Gleason評分5～6)38，低分化組(Gleason評分7～10)19例。根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)及國際抗癌聯(lián)盟(UICC)推薦的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[6]: Ⅰ～Ⅱ期44例，Ⅲ～Ⅳ期24例。本研究經(jīng)瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽外科倫理道德委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2　方法

以免疫組織化學(xué)法檢測樣本中FOXQ1蛋白的表達。所有患者術(shù)中分別取新鮮肝癌組織及癌旁組織(距癌灶邊緣至少2 cm的正常肝組織，并經(jīng)病理學(xué)檢查確定無腫瘤組織殘余)，常規(guī)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，置于-20 ℃冰箱待檢測。使用切片機切取厚度約4 μm連續(xù)切片，高溫抗原修復(fù)，預(yù)處理組織切片，滴加一抗——鼠抗人FOXQ1單克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，3%過氧化氫去離子水孵育5 min，PBS沖洗3 min×3次，加入二抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)和辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗兔二抗(美國Abgent公司)，37 ℃孵育15 min，PBS沖洗3 min×3次；作DAB染色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，封片，鹽酸酒精分化、100%乙醇脫水、氨水返藍5 min; 二甲苯透明、中性樹膠封片、鏡檢。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對照。

1.3　結(jié)果判斷

FOXQ1蛋白染色陽性為胞質(zhì)呈棕褐色。結(jié)果由2名不知情資深病理醫(yī)師進行雙盲評判，在200倍光鏡下以陽性細胞百分率及顯色深淺對染色結(jié)果評分。標(biāo)準(zhǔn)如下: ① 陽性細胞百分率，未見陽性細胞者為0分；1%～33%為1分；34%～66%為2分；>67%為3分。② 染色強度：0=陰性染色，1=弱染色，2=中度染色，3=強染色。陽性細胞百分比和染色強度得分判斷免疫組化結(jié)果：0分為陰性，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中度陽性(2+)，5～6分為強陽性(3+)。

1.4　統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗。等級資料的相關(guān)性使用Spearman等級相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　肝癌組織與癌旁組織樣本中FOXQ1蛋白表達

肝癌細胞形態(tài)不規(guī)則，邊緣模糊，細胞間出現(xiàn)大量纖維化及結(jié)締組織，F(xiàn)OXQ1蛋白陽性表達主要定位于肝癌細胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈大面積黃染；癌旁組織細胞形態(tài)規(guī)則，邊緣清晰，細胞質(zhì)幾乎無FOXQ1蛋白表達。見圖1。

68例肝癌組織中FOXQ1陽性表達42例(61.76%)，陰性26例(38.24%)；68例癌旁組織中，F(xiàn)OXQ1陽性表達8例(11.76%)，陰性表達60例(88.24%)。肝癌組織與癌旁組織FOXQ1蛋白表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

A.癌旁組織;B.肝癌組織圖1 免疫組織化學(xué)檢測肝癌組織和癌旁組織樣本中FOXQ1蛋白表達 200倍

2.2　FOXQ1表達與HCC臨床病理特征的關(guān)系

HCC中FOXQ1蛋白表達與患者性別、乙肝表面抗原(HBsAg)陽性、甲胎蛋白(AFP)水平、是否肝硬化、門靜脈癌栓(PVTT)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)無相關(guān)性，而與年齡、TNM分期、腫瘤分化程度、腫瘤數(shù)目和腫瘤大小等參數(shù)有相關(guān)性。見表1。

表1　FOXQ1蛋白表達與HCC患者臨床病理特征之間的關(guān)系

2.3　FOXQ1蛋白表達與TNM分期、腫瘤分化程度的相關(guān)性

對68例HCC組織進行Spearman等級相關(guān)性分析。結(jié)果表明隨TNM分期的增高，F(xiàn)OXQ1蛋白表達升高(r=0.667,P<0.05); 隨腫瘤分化程度降低，F(xiàn)OXQ1蛋白表達顯著升高(r=-0.564,P<0.01)。

3討論

FOX家族蛋白是含有一段由110個氨基酸組成的保守序列，通過與DNA特異位點結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)調(diào)控功能。FOX蛋白可作為典型的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，還能直接參與染色質(zhì)重構(gòu)，協(xié)同其他轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。目前為止，發(fā)現(xiàn)FOX蛋白可參與多種生理病理過程，如對生長發(fā)育、新陳代謝、癌癥與癌前病變，以及衰老等過程的調(diào)控[7-8]。FOXQ1在多種組織中發(fā)現(xiàn)其廣泛表達，但目前比較明確的功能是調(diào)控毛發(fā)分化，在體外也可見FOXQ1抑制平滑肌分化基因[9-10]。近年來的一些文獻報道發(fā)現(xiàn)FOXQ1 mRNA在結(jié)腸癌、卵巢癌、乳腺癌等發(fā)展過程中扮演著重要的角色，其功能主要涉及到腫瘤惡性增殖、耐藥、血管形成、轉(zhuǎn)移及EMT等方面[11-12]。研究人員揭示了FOXQ1通過改變腫瘤微環(huán)境，誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化并招募巨噬細胞浸潤，從而促進了肝癌轉(zhuǎn)移[13]。

腫瘤的形成、侵襲、轉(zhuǎn)移、需要基因的重新調(diào)整表達，F(xiàn)OXQ1可能作為致癌基因在肝癌中高表達并促進肝癌的發(fā)生發(fā)展。為了解FOXQ1在肝癌中的表達與臨床病理特征之間的關(guān)系，本研究使用免疫組化方法比較肝癌和癌旁組織中FOXQ1蛋白表達，結(jié)果表明FOXQ1蛋白表達定位于細胞質(zhì)，在HCC組織中表達高達61.76%，而在癌旁組織僅為11.76%。同時研究發(fā)現(xiàn)FOXQ1的表達與年齡、TNM分期、腫瘤分化程度、腫瘤數(shù)目和腫瘤大小等參數(shù)具有相關(guān)性。其中，中、低分化以及多個腫瘤病灶、腫瘤直徑>5 cm的肝癌組織FOXQ1蛋白表達陽性率高于高分化、單個腫瘤及腫瘤直徑≤5 cm的肝癌組織，表明FOXQ1的表達與肝癌的惡性生物學(xué)特性相關(guān)，上述結(jié)果與鄧大煒[14]等研究一致。而本研究顯示PVTT者FOXQ1陽性表達率雖高達71.43%, 但PVTT與無PVTT者FOXQ1表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與腫瘤晚期無法手術(shù)切除[15], 導(dǎo)致樣本量過小有關(guān)。進一步Spearman等級相關(guān)性分析表明FOXQ1蛋白表達與TNM分期呈正相關(guān)、與腫瘤分化程度呈負相關(guān)，結(jié)果首次表明FOXQ1可作為HCC臨床診斷及分期的指標(biāo)，該結(jié)果需進一步擴大樣本量并驗證。

參考文獻

[1]劉強, 劉靜. 肝細胞性肝癌相關(guān)分子信號通路的研究進展[J]. 世界華人消化雜志, 2014, 22(1): 59.

[2]徐輝雄, 謝曉燕, 呂明德. 超聲引導(dǎo)經(jīng)皮熱消融治療肝細胞性肝癌[J]. 中華肝膽外科雜志, 2005, 11(12): 809.

[3]Llovet J M, Bruix J. Molecular targeted therapies in hepatocellular carcinoma[J]. Hepatology, 2008; 48(4): 1312.

[4]吳紅雁, 范方田, 劉兆國, 等. 轉(zhuǎn)錄因子叉頭框Q1與腫瘤相關(guān)性的研究進展[J]. 腫瘤, 2014, 34(7): 662.

[5]Sparks R, Madabhushi A. Statistical Shape Model for Manifold Regularization: Gleason grading of prostate histology[J]. Comput Vis Image Underst, 2013, 117(9): 1138.

[6]邢金春. 前列腺癌診斷治療學(xué)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2011: 22.

[7]Feuerborn A, Srivastava P K, Kuffer S, et al. The Forkhead factor FoxQ1 influences epithelial differentiation[ J]. J Cell Physiol, 2011, 226(3): 710.

[8]Xia L, Huang W, Tian D, et al. Overexpression of forkhead box C1 promotes tumor metastasis and indicates poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J]. Hepatology, 2013, 57 (2) : 610.

[9]Feuerborn A, Srivastava P K, Kuffer S, et al. The Forkhead factor FoxQ1 influences epithelial differentiation[J]. J Cell Physiol, 2011. 226(3): 710.

[10]Potter C S, Peterson R L, Barth J L, et al. Evidence that the satin hair mutant gene Foxq1 is among multiple and functionally diverse regulatory targets for Hoxc13 during hair follicle differentiation[J]. J Biol Chem, 2006, 281(39):29245.

[11]Zhang H, Meng F, Liu G, et al. Forkhead transcription factor foxq1 promotes epithelial-mesenchymal transition and breast cancer metastasis[J]. Cancer Res, 2011, 71( 4) : 1292.

[12]Wu Y, Qiao X, Qiao S, et al. Targeting integrins in hepatocellular carcinoma[ J]. Expert Opin Ther Targets, 2011, 15(4) : 421.

[13]Xia L, Huang W, Tian D, et al. Forkhead box Q1 promotes hepatocellular carcinoma metastasis by transactivating ZEB2 and VersicanV1 expression[J]. Hepatology, 2014, 59(3): 958.

[14]鄧大煒, 孔憲炳, 王平, 等. FOXQ1 在肝癌中的臨床意義及其對 SMMC-7721細胞體外血管形成的影響[J]. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報, 2015, 31(4): 422.

Expression and the relationship with clinicopathological features

of FOXQ1 protein in hepatocellular carcinoma

HUANG Heng

(DepartmentofGeneralSurgery,ChineseMedicineHospitalAffiliatedtoLuzhouMedical

College,Luzhou,Sichuan, 646000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the Forkhead box protein Q1 (FOXQ1) expression in hepatocellular carcinoma (HCC) tissue and the relationship with the clinicopathological features of HCC patients. MethodsSixty-eight HCC patients that diagnosed by pathological examination and underwent hepatobiliary surgery were selected in the study. Fresh HCC tissue and peritumoral tissue were collected during each surgery respectively. FOXQ1 protein expression was determined by immunohistochemistry. Meanwhile the relationships of FOXQ1 protein expression with clinicopathological features were analyzed. ResultsFOXQ1 protein expression was mainly localized in the cytoplasm of HCC cells. the FOXQ1 positive expression was 61.76% in HCC tissue and 11.76% in paracancerous tissue, with a significant difference between these two kind of tissues (P<0.05). FOXQ1 protein expression was correlated with age, TNM stage, tumor differentiation, tumor number and tumor size in HCC patients. Spearman rank correlation analysis showed that FOXQ1 protein expression was positively related to TNM staging (r=0.667，P<0.05) and negitively related to tumor differentiation (r=-0.564，P<0.01). ConclusionsHigh expression of FOXQ1 protein is found in the cytoplasm of HCC cells. Detection of FOXQ1 protein level plays an important role in the judgment of HCC malignant degree and tumor differentiation.

KEYWORDS:Forkhead box protein Q1; hepatocellular carcinoma; clinicopathological feature; immunohistochemistry

基金項目:中國高校醫(yī)學(xué)期刊臨床專項資金(11522409)

收稿日期:2015-03-06

中圖分類號:R 735.7

文獻標(biāo)志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)15-058-04

DOI:10.7619/jcmp.201515017