基質(zhì)金屬蛋白酶2、環(huán)氧化酶2表達(dá)在下咽癌轉(zhuǎn)移中的作用

王佳蓉，吳瑞珊，曾冰微

（1.福建醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院耳鼻咽喉科，福建 泉州362000；2.福建醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院病理科，福建 泉州362000）

下咽癌是頭頸部常見(jiàn)的惡性腫瘤，且多表現(xiàn)為鱗狀細(xì)胞癌，病因尚未完全闡明。該疾病往往分化低，早期難于發(fā)現(xiàn)，且早期即可轉(zhuǎn)移，惡性程度較高，臨床治療困難，患者預(yù)后較差。部分研究顯示，腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，起于對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinases 2，MMP-2）是參與該過(guò)程的主要酶［1-2］。環(huán)氧化酶2（cyclooxygenase 2，Cox-2）則在結(jié)直腸癌、宮頸癌等惡性腫瘤中具有高表達(dá)［3-4］。如果能證實(shí)兩類酶也與下咽癌的轉(zhuǎn)移有一定的聯(lián)系，必然有助于疾病的治療。本研究對(duì)伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移下咽癌、未伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移下咽癌和聲帶息肉3組患者的MMP-2和Cox-2表達(dá)進(jìn)行了對(duì)比分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年9月—2013年9月我院收治的下咽癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者21例為觀察組，男性13例，女性8例，年齡44～77歲，平均（55.7±3.2）歲，已排除術(shù)前有放療史、長(zhǎng)期服用糖皮質(zhì)激素等可能干擾研究的患者標(biāo)本，國(guó)際抗癌聯(lián)盟（union for international cancer control，UICC）分期Ⅰ期3例，Ⅱ期3例，Ⅲ期6例，Ⅳ期9例。選擇同期聲帶息肉患者20例為對(duì)照A組，男性12例，女性8例，年齡44～69歲，平均（54.6±2.5）歲。選擇同期下咽癌但無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者20例為對(duì)照B組，男性13例，女性7例，年齡45～71歲，平均（55.1±1.9）歲。3組性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 主要試劑包括兔抗人抗體Cox-2、鼠抗人抗體MMP-2等，試劑盒購(gòu)自北京華夏遠(yuǎn)洋科技有限公司。檢測(cè)方法一般流程如下：首先，對(duì)載玻片進(jìn)行肥皂水浸泡、酸性液浸泡等常規(guī)處理，備用；隨后，取出標(biāo)本，置于切片機(jī)上，設(shè)定厚度為3 μm進(jìn)行連續(xù)切片，挑選合適樣本各2片，預(yù)處理，備用；接下來(lái)行EnVision免疫組織化學(xué)檢測(cè)，經(jīng)過(guò)脫蠟、水化、抗原修復(fù)、酶活性阻斷、一抗及二抗孵育、顯色及染色、脫水等處理過(guò)程后，以中心樹(shù)膠封片；最后由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師分別獨(dú)立閱片、評(píng)分。

1.3 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)每個(gè)組織標(biāo)本隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，做半定量積分。針對(duì)于細(xì)胞組織著色面積，以面積超過(guò)2／3為3分，以面積在1／3～2／3之間為2分，以面積不超過(guò)1／3為1分，以無(wú)著色為0分；針對(duì)于著色深淺，以棕褐色為3分，以棕黃色為2分，以黃色為1分，以無(wú)色為0分。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為上述2項(xiàng)之和達(dá)3分，強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為2項(xiàng)之和達(dá)4分或以上，總陽(yáng)性率為2項(xiàng)之和。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組標(biāo)本MMP-2表達(dá)比較 觀察組MMP-2表達(dá)陽(yáng)性率與對(duì)照A組和對(duì)照B組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但強(qiáng)陽(yáng)性和總陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照A組（P＜0.05），觀察組與對(duì)照B組及對(duì)照A、B組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。觀察組染色均分高于對(duì)照A、B組，對(duì)照A、B組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 3組標(biāo)本MMP-2表達(dá)比較

2.2 3組標(biāo)本Cox-2表達(dá)比較 觀察組Cox-2表達(dá)陽(yáng)性率與對(duì)照A組和對(duì)照B組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但強(qiáng)陽(yáng)性和總陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照A組（P＜0.05），觀察組與對(duì)照B組及對(duì)照A、B組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。觀察組染色均分高于對(duì)照A、B組，對(duì)照A、B組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 3組標(biāo)本Cox-2表達(dá)比較

3 討 論

下咽癌發(fā)病率高，難以控制，侵襲和轉(zhuǎn)移均較為迅速，如何加強(qiáng)早期診斷成為開(kāi)展治療和提升患者預(yù)后的關(guān)鍵，相關(guān)科研人員對(duì)此展開(kāi)了深入的研究與探討，但取得的效果并不顯著［5］。

研究顯示，MMP-2和Cox-2在部分惡性腫瘤中存在著高表達(dá)現(xiàn)象［6-8］。提示在下咽癌轉(zhuǎn)移患者體內(nèi)可能存在著同樣的高表達(dá)現(xiàn)象。本研究結(jié)果顯示，下咽癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)MP-2和Cox-2表達(dá)陽(yáng)性率分別為66.7%和61.9%，明顯高于聲帶息肉患者的15.0%和10.0%。支持上述觀點(diǎn)。

Cox-2的致腫瘤機(jī)制可能為促進(jìn)細(xì)胞增殖，提升促血管因子的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲性，使多環(huán)芳香烴類化合物轉(zhuǎn)換為親電氧化物、抑制免疫反應(yīng)等［9］。本研究進(jìn)一步提示Cox-2的過(guò)度表達(dá)在下咽癌的轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。MMP-2在下咽癌轉(zhuǎn)移中的主要作用是能夠提升腫瘤細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)及基膜的能力，同時(shí)還能抑制反轉(zhuǎn)錄富含半胱氨酸蛋白基因的表達(dá)，該基因?qū)δ[瘤的抑制作用，已得到了臨床研究的直接證實(shí)［10］。

本研究最主要的成果在于，能夠直接證實(shí)可以通過(guò)檢測(cè)MMP-2及Cox-2來(lái)預(yù)測(cè)下咽癌的進(jìn)程。對(duì)于癌癥患者而言，其疾病出現(xiàn)之后，MMP-2及Cox-2含量將顯著上升，從而發(fā)揮各自病理學(xué)的作用，推動(dòng)癌癥進(jìn)程的發(fā)展；待出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移之后，其含量又將呈現(xiàn)一個(gè)顯著性增長(zhǎng)，這可能是因?yàn)榱馨娃D(zhuǎn)移之后兩蛋白的作用靶點(diǎn)增加，刺激了其分泌量的增加。

總之，本研究結(jié)果證實(shí)下咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者體內(nèi)存在著MMP-2及Cox-2高表達(dá)的現(xiàn)象，如果能在早期對(duì)兩蛋白進(jìn)行檢測(cè)，就能夠有效指導(dǎo)癌癥的治療。

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