脂肪乳輸注對血紅蛋白測定的影響研究*

黃 浩，黃玲莎，朱 波，梁藝華，任寧毅，徐 茜

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科，南寧 530021)

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·論 著·

脂肪乳輸注對血紅蛋白測定的影響研究*

黃 浩，黃玲莎△，朱 波，梁藝華，任寧毅，徐 茜

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科，南寧 530021)

目的 探討脂肪乳輸注對血紅蛋白(Hb)及相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果的影響。方法 選取10例輸注脂肪乳的自愿者，于脂肪乳輸注后1、2、4、8、12 h采集靜脈血2 mL，離心后檢測血漿三酰甘油(TG)及Hb水平，并將不同時間點的血漿標(biāo)本混合制備5份混合乳糜血漿。選擇1例O型血健康自愿者，采集靜脈血6 mL，離心后吸去血漿，制備健康濃縮紅細(xì)胞(RBC)，在200 μL各時間點混合乳糜血漿中分別加入200 μL濃縮RBC，以200 μL生理鹽水加入200 μL健康濃縮紅細(xì)胞為對照。選擇1例O型血小細(xì)胞低色素貧血自愿者，采集靜脈血6 mL，離心后吸去血漿，制備小細(xì)胞低色素濃縮RBC，將100 μL濃縮紅細(xì)胞加入100、200、300、400 μL TG濃度為15.23 mmol/L的乳糜血漿中，以100 μL濃縮紅細(xì)胞加入等體積生理鹽水為對照。采用邁瑞公司BC-6800型血細(xì)胞分析儀對各試驗管進(jìn)行Hb及相關(guān)指標(biāo)檢測，每管測2次，計算均值。結(jié)果 輸注脂肪乳后自愿者血漿TG水平迅速升高，最高可達(dá)25.89 mmol/L，乳糜血漿直接測定Hb水平最高可達(dá)19 g/L。各時間點乳糜血漿對健康濃縮RBC和小細(xì)胞低色素濃縮RBC中的RBC、紅細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)檢測結(jié)果影響不大，對Hb、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)造成假性增高，輸注后4 h內(nèi)影響程度尤為明顯；貧血越嚴(yán)重，Hb、MCH、MCHC受影響程度越大。脂肪乳輸注12 h后，血漿對Hb及相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果影響較小。結(jié)論 輸注脂肪乳后4 h內(nèi)盡量避免檢測Hb及MCH、MCHC，特別是嚴(yán)重貧血的患者，輸脂肪乳后12 h的檢測結(jié)果則相對可靠。

脂肪乳； 血紅蛋白； 血細(xì)胞分析

血紅蛋白(Hb)測定方法包括比色法、全血鐵法、比重法、折射儀法等，血細(xì)胞分析儀通常采用比色法。采用比色法進(jìn)行Hb檢測時，引起比色液混濁的因素均可能對檢測結(jié)果造成影響，其中乳糜血是最常見的影響因素之一[1-2]。然而，關(guān)于靜脈輸注脂肪乳所致乳糜血的脂濁程度、脂濁持續(xù)時間及其對Hb測定的影響程度和影響時間國內(nèi)外尚無明確報道。本研究探討了輸注脂肪乳所致乳糜血對外周血常規(guī)檢測的影響，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本采集與制備 選擇10例接受脂肪乳靜脈滴注治療的自愿者，采用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管，在脂肪乳輸注后1、2、4、8、12 h分別采集靜脈血2 mL，常規(guī)離心后分離血漿，采用日立公司7600型生化分析儀及其配套試劑檢測血漿三酰甘油(TG)，采用邁瑞公司BC-6800型血細(xì)胞分析儀及其配套試劑檢測血漿Hb；分別吸取各時段血漿標(biāo)本500 μL，混合后制備成混合血漿。另選擇1例O型血健康自愿者，采用3支EDTA-K2抗凝管，分別采集2 mL靜脈血，常規(guī)離心后吸去血漿，混合后制備成健康濃縮紅細(xì)胞(RBC)。另選擇1例O型血小細(xì)胞低色素貧血患者，相同方法采集6 mL靜脈血，常規(guī)離心后吸去血漿，混合后制備成小細(xì)胞低色素濃縮RBC。

1.2 方法

1.2.1 試驗一 于200 μL各時間點混合乳糜血漿中分別加入200 μL健康濃縮RBC，以200 μL生理鹽水加入200 μL健康濃縮RBC為對照。采用同一臺BC-6800型血細(xì)胞分析儀對各標(biāo)本進(jìn)行血常規(guī)檢測指標(biāo)的測定。每份標(biāo)本各檢測2次，計算均值。每次標(biāo)本檢測的同時進(jìn)行高、中、低值質(zhì)控品檢測，檢測結(jié)果均在控制范圍內(nèi)。

1.2.2 試驗二 于100、200、300、400 μL脂肪乳滴注后1 h混合乳糜血漿中分別加入100 μL小細(xì)胞低色素濃縮RBC，以100、200、300、400 μL生理鹽水中分別加入100 μL小細(xì)胞低色素濃縮RBC為對照。采用同一臺BC-6800型血細(xì)胞分析儀對各標(biāo)本進(jìn)行血常規(guī)檢測指標(biāo)的測定。每份標(biāo)本各檢測2次，計算均值。每次標(biāo)本檢測的同時進(jìn)行高、中、低值質(zhì)控品檢測，檢測結(jié)果均在控制范圍內(nèi)。

1.2.3 數(shù)據(jù)計算 試驗管檢測結(jié)果增幅=(試驗管檢測結(jié)果-對照管檢測結(jié)果)/對照管檢測結(jié)果×100%，以此公式計算試驗管RBC、Hb、紅細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)的變化程度，以百分?jǐn)?shù)為單位。

2 結(jié) 果

2.1 血漿TG及Hb檢測結(jié)果 10例脂肪乳輸注患者，脂肪乳輸注后1 h血漿TG檢測結(jié)果為10.21～25.89 mmol/L，平均15.42 mmol/L，血漿Hb檢測結(jié)果為9～19 g/L，平均16 g/L。脂肪乳輸注12 h后，血漿TG檢測結(jié)果為2.42～6.02 mmol/L，平均3.92 mmol/L，血漿Hb檢測結(jié)果為1～5 g/L，平均3 g/L。

圖1 不同時間點混合血漿對健康濃縮RBC檢測結(jié)果的影響

2.2 不同類型混合標(biāo)本檢測結(jié)果 (1)與對照管相比，200 μL健康濃縮RBC、200 μL不同時間點乳糜血漿混合標(biāo)本，RBC、MCV、HCT檢測結(jié)果沒有明顯變化，Hb增幅則分別為9.24%、8.56%、7.88%、4.20%、2.52%，MCH、MCHC檢測結(jié)果也相應(yīng)升高，見圖1。(2)與對照管相比，100 μL小細(xì)胞低色素濃縮RBC與不同體積、TG濃度為15.23 mmol/L的1 h乳糜血漿混合標(biāo)本，RBC、MCV、HCT檢測結(jié)果沒有明顯變化，Hb增幅分別為11.24%、29.14%、41.46%、68.96%，MCH、MCHC也相應(yīng)升高，見圖2。(3)試驗二第1～4組樣本中，對照樣本的Hb濃度分別為89、58、41、29 g/L，實驗樣本的Hb濃度分別為99、87、57、49 g/L，實驗樣本比對照樣本Hb濃度增幅分別為11.24%、29.14%、41.46%、68.96%。

圖2 不同體積混合血漿對小細(xì)胞低色素濃縮

3 討 論

對直接加入脂肪乳人工制備的乳糜血標(biāo)本進(jìn)行外周血常規(guī)檢測時，儀器可提示標(biāo)本存在混懸、RBC抗溶等現(xiàn)象，但筆者在實際工作中發(fā)現(xiàn)，乳糜血標(biāo)本極少出現(xiàn)上述提示，可見直接加入脂肪乳并不能完全模擬經(jīng)過人體代謝后的乳糜血。而且，脂肪代謝能力受個體性別、年齡等因素的影響較大。本研究納入的10例輸注脂肪乳的自愿者脂肪乳輸注后1 h血漿TG最高值和最低值相差2.5倍，故本次試驗將采集自10例不同年齡、不同性別自愿者的血漿等量混合后制備為混合乳糜血漿，并在同一試驗中采用相同的濃縮RBC，既部分消除了脂肪代謝的個體差異，又保證了試驗條件的穩(wěn)定性和一致性。

本研究結(jié)果圖1、圖2均顯示混合乳糜血漿對健康濃縮RBC和小細(xì)胞低色素濃縮RBC的RBC、HCT、MCV檢測結(jié)果沒有明顯影響，對Hb、MCH、MCHC則存在明顯影響。邁瑞B(yǎng)C-6800型血細(xì)胞分析儀以電阻抗法直接檢測RBC，以脈沖信號的大小反映MCV，HCT由RBC與MCV檢測結(jié)果的乘積計算獲得，這可能是RBC、HCT、MCV檢測結(jié)果沒有受到明顯影響的主要原因。Hb檢測原理是亞鐵血紅素中Fe2+被十二烷基磺酸鈉(SDS)氧化，形成SDS-Hb衍生物，以538 nm波長進(jìn)行比色法測定。由于乳糜血漿存在不同程度的混濁，導(dǎo)致吸光度增高，從而使Hb檢測結(jié)果假性增高。MCH、MCHM均以Hb檢測結(jié)果為基礎(chǔ)計算獲得，因此Hb假性增高引起MCH、MCHC假性增高。有文獻(xiàn)報道，乳糜血漿幾乎干擾各種類型血細(xì)胞分析儀對Hb、MCH、MCHC的測定[3-5]，邁瑞B(yǎng)C-6800型血細(xì)胞分析儀也不例外。

Hb是外周血常規(guī)檢測的重要指標(biāo)，MHC、MCHC則是用于判斷貧血類型的重要依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，1、2、4 h混合血漿對健康濃縮RBC中Hb、MCH、MCHC檢測結(jié)果影響較大，平均增幅超過8%，可見脂肪乳輸注后4 h內(nèi)，外周血中的TG維持較高水平，符合脂肪代謝特點。12 h混合血漿導(dǎo)致Hb檢測結(jié)果上升2.52%，接近Hb檢測允許偏差(±2%)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[6]。因此，為避免脂肪乳輸注對Hb、MCH、MCHC檢測結(jié)果的影響，應(yīng)盡量避免脂肪乳輸注后12 h內(nèi)進(jìn)行Hb檢測。本研究結(jié)果圖2顯示，采用不同體積的1 h乳糜血漿對100 μL小細(xì)胞低色素貧血自愿者的濃縮RBC進(jìn)行稀釋，隨著稀釋倍數(shù)的增加，Hb、MCH、MCHC檢測結(jié)果受影響的程度逐漸增大，原因可能是隨著血漿與RBC的比例增大單位濃度的乳糜成分對Hb檢測結(jié)果造成的影響增大，MCH、MCHC檢測結(jié)果也假性增高。結(jié)果顯示，貧血程度越嚴(yán)重，Hb檢測結(jié)果受影響程度越大，特別是試驗二中模擬極重度貧血患者的第4組樣本，對照樣本Hb為29 g/L，屬于極重度貧血，實驗樣本Hb為49 g/L，屬于重度貧血，如此不真實的結(jié)果直接影響醫(yī)生對危急值的判斷，甚至可能因延誤處置而危及患者生命。術(shù)后禁食者、腫瘤患者、重癥監(jiān)護(hù)病房患者是接受脂肪乳輸注治療的主要人群，不僅脂肪乳輸注劑量較大，而且輸注時間較長。此外，上述患者容易因手術(shù)出血或長期營養(yǎng)不良導(dǎo)致貧血，甚至重度貧血。此時檢測Hb對出血量、貧血程度、輸血治療效果的評估尤為重要。因此，輸注脂肪乳導(dǎo)致的Hb檢測結(jié)果假性增高不容忽視。

臨床工作中如何判斷用于外周血常規(guī)檢測的標(biāo)本存在乳糜現(xiàn)象較為困難。有研究者認(rèn)為，可以根據(jù)RBC與Hb檢測結(jié)果比值異常(正常情況下為1∶30)或MCH、MCHC異常升高判斷標(biāo)本存在乳糜現(xiàn)象[7]。然而，這種判斷方法僅可應(yīng)用于正色素細(xì)胞標(biāo)本，而且一旦疏于計算也是難以發(fā)現(xiàn)的；對于小細(xì)胞低色素貧血患者的標(biāo)本則更難以發(fā)現(xiàn)。此外，不同品牌、型號的血細(xì)胞分析儀對乳糜血的報警方式有所不同，多數(shù)提示為“有混懸/抗溶紅細(xì)胞”或“乳糜/Hb干擾”[3-5]，有的甚至出現(xiàn)白細(xì)胞不分類，并提示堵孔報警的情況[6]。邁瑞B(yǎng)C-6800型血細(xì)胞分析儀在MCHC達(dá)到389 g/L時，沒有“混濁/Hb干擾”報警，在MCHC達(dá)到390g/L時，才有“混濁/Hb干擾”報警，可見MCHC 390 g/L可能是“混濁/Hb干擾”報警的觸發(fā)點之一。如果以此臨界值為觸發(fā)點，正色素細(xì)胞MCHC增幅達(dá)到15%時可能被發(fā)現(xiàn)，但小細(xì)胞低色素MCHC則需要增幅超過40%才可能被發(fā)現(xiàn)，因此多數(shù)乳糜血標(biāo)本的假陰性結(jié)果未被發(fā)現(xiàn)。為便于及時發(fā)現(xiàn)乳糜血標(biāo)本，對于輸注脂肪乳的患者，臨床醫(yī)生應(yīng)在標(biāo)本備注中注明輸注脂肪乳的時間及抽血時間，以提醒檢驗人員給予一定的關(guān)注。對于乳糜標(biāo)本的檢測結(jié)果，目前尚缺乏公認(rèn)的校正公式，多數(shù)時候是采用鹽水或鞘液置換法對標(biāo)本進(jìn)行處理[3-5]，例如以3 000 r/min離心5 min，吸去上清液后加入同體積的生理鹽水或鞘液[6]，再進(jìn)行Hb、MCH、MCHC檢測，并在檢驗結(jié)果報告中備注“脂血標(biāo)本”。

檢驗的目的是為臨床提供準(zhǔn)確、可靠的信息。然而，由于受到方法學(xué)的限制，即使高端儀器也不能完全排除特殊標(biāo)本的干擾。因此，在使用血細(xì)胞分析儀時，應(yīng)在分析前準(zhǔn)備時和分析過程中對乳糜血標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)的處理，從而保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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Influence of fat emulsion infusion on determination of hemoglobin*

HUANGHao,HUANGLing-sha△,ZHUBo,LIANGYi-hua,RENNing-yi,XUQian

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedCancerHospital,GuangxiMedicalUniversity,Nanning,Guangxi530021,China)

Objective To study the influence of fat emulsion infusion on the detection of hemoglobin (Hb) and related indexes.Methods Ten cases of volunteers receiving fat emulsion infusion were selected and taken 2 mL venous blood,at 1,2,4,8 and 12 h after infusion.Plasma levels of triglyceride (TG) and Hb were detected.Then,plasma samples of the five time points were prepared.One healthy volunteer with blood type of O was selected and taken 6 mL venous blood.Condense red blood cells (RBC) suspension was prepared by removing plasma.Then,200 μL of 1,2,4,8 and 12 h mixed chylous plasma was mixed with 200 μL healthy condense RBC suspension respectively,and 200 μL healthy condense RBC suspension was mixed with 200 μL normal saline to prepared control tube.One volunteer with low pigment anemia and blood type O was selected and taken 6 mL venous blood.Condense low pigment RBC suspension was prepared.Then,100 μL condense low pigment RBC suspension was mixed with 100,200,300 and 400 μL chylous plasma,TG concentration of which was 15.23 mmol/L,and 100 μL condense low pigment RBC suspension was mixed with 100 μL normal saline to prepare control tube.Levels of Hb and related indicators of each tubes were detected by using Mindray BC-6800 analyzer.Every indicator was detected for twice,and average was calculated.Results Plasma levels of TG rapidly increased after fat emulsion infusion,and the peak value was 25.89 mmol/L.The peak plasma levels of Hb was 19 g/L.The influences of chylous plasmas of different time points on levels of RBC,haematocrit (HCT) and mean corpuscular volume (MCV) were not obvious,but the false increase of Hb,mean corpuscular hemoglobin (MCH) and mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC),especially with 4 h after infusion.With the increasing of severity of anemia,the degree of influences on Hb,MCH and MCHC were more obvious.Fat emulsion was with little influence on Hb and related indexes,12 h after infusion.Conclusion Hb,MCH and HCHC should not be detected within 4 h after fat emulsion infusion,especially in volunteer with severe anemia.Results detected 12 h after infusion might be more reliable.

fat emulsion infusion; hemoglobin; haemocyte analysis

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費科研課題(Z2014587)。

黃浩，女，副主任檢驗技師，本科，主要從事臨床基礎(chǔ)檢驗研究。△

，E-mail:ls_huang@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.008

A

1672-9455(2015)07-0897-03

2014-10-05

2014-12-10)