類風濕關節炎患者血清白細胞介素的檢測及意義*

耿學麗，陳向華，丁 萌，肖麗君，宗春光，宋鴻儒

(承德醫學院附屬醫院檢驗科，河北承德 067000)

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·論 著·

類風濕關節炎患者血清白細胞介素的檢測及意義*

耿學麗，陳向華，丁 萌，肖麗君，宗春光，宋鴻儒△

(承德醫學院附屬醫院檢驗科，河北承德 067000)

目的 探討白細胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23及類風濕因子(RF)、C-反應蛋白(CRP)在類風濕關節炎(RA)患者發病中的作用。方法 采用流式液相多重蛋白定量技術(CBA)檢測60例活動期RA患者和32例健康對照組血清中IL-6、IL-17、IL-23的水平，采用免疫比濁法檢測RF及CRP水平。結果 活動期RA患者血清中IL-6、IL-17、IL-23、RF、CRP的水平高于健康對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。RF與IL-17呈正相關。不同年齡組的RA患者之間，IL-17水平差異有統計學意義(P<0.05)。結論 IL-6、IL-17、IL-23、RF及CRP在RA的發病過程中起著重要的作用，IL-17可能成為臨床診斷的潛在候選指標之一。

類風濕關節炎； 白細胞介素； 類風濕因子； C-反應蛋白

類風濕關節炎(RA)是以關節滑膜炎癥為主要表現的自身免疫性疾病，其主要病理改變為T淋巴細胞和巨噬細胞等慢性炎性浸潤及多種細胞因子分泌最終導致的關節滑膜組織漸進性損傷及骨質破壞[1]。RA的發病機制至今尚未完全闡明，尋找與RA密切相關的檢測指標對RA的診治及病情的動態觀察顯得尤其重要。目前，臨床上一般采用類風濕因子(RF)及C-反應蛋白(CRP)等傳統指標來判斷RA患者的病情，本研究通過檢測RA患者血清白細胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23水平，探討了RA患者血清IL-6、IL-17、IL-23的水平變化與RA發病機制及與病情嚴重程度的關系，通過RF與IL-6、IL-17、IL-23、CRP的相關性分析，為RA的炎性發展及臨床診療提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 活動期RA患者60例(RA組)，均為2012年5月至2013年1月承德醫學院附屬醫院門診及住院患者，均符合美國風濕病學會(ACR)1987年修訂的RA診斷標準[2]，并排除急性感染、腫瘤及其他自身免疫性疾病等，其中男13例，女47例，年齡22～87歲，平均(56.22±12.90)歲。另設健康對照組32例，其中男9例，女23例，年齡31～66歲，平均(52.53±7.90)歲，均為本院體檢中心接受體檢的健康成年人(排除感染、免疫等可能與RA相關的一些疾病患者)。所有受試者于研究前3個月內均未服用過任何免疫抑制劑及激素。

1.2 標本收集 所有受試者均于晨起時空腹抽取肘靜脈血5 mL，常溫自然凝固1 h后，4 000 r/min離心10 min，分離血清，-70 ℃冰箱保存，用于測定IL-6、IL-17、IL-23、RF、CRP的水平。

1.3 方法 采用流式液相多重蛋白定量技術(CBA)測定細胞因子IL-6、IL-17、IL-23的水平，用美國BD公司的BD FACSCaliber 流式細胞儀測定，試劑由美國BD公司提供；采用免疫比濁法，以Beckman公司生產的Array360特種蛋白分析儀檢測RF及CRP的水平，試劑由Beckman公司提供。嚴格按照儀器操作規程及試劑說明書進行操作檢測。

2 結 果

2.1 兩組各檢測指標水平比較 與健康對照組相比，RA患者血清中IL-6、IL-17、IL-23、RF、CRP的水平明顯升高，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2 相關性分析 將RA患者血清RF與IL-6、IL-17、IL-23、CRP進行多元逐步回歸與相關性分析，結果表明，RF與IL-17呈正相關(P=0.001)，與其他因子無相關性(P>0.05)。

2.3 不同年齡組RA患者各檢測指標水平比較 將RA患者分為3個年齡組：<50歲組(n=19)、50～60歲組(n=20)、≥60歲組(n=21)。不同年齡組的RA患者IL-6、IL-23、RF、CRP之間差異無統計學意義(P>0.05)；<50歲組與≥60歲組RA患者的IL-17水平差異有統計學意義(P=0.046)，見表2。

表1 不同組別IL-6、IL-17、IL-23、RF、CRP測定結果比較

注：與健康對照組比較，△P<0.05(t檢驗)，△△P<0.05(秩和檢驗)。

表2 不同年齡組RA患者IL-6、IL-17、IL-23、RF、CRP測定結果比較[M(Q)]

3 討 論

IL-6可損傷關節軟骨組織，其導致關節軟骨組織損傷的機制與透明質酸裂解酶水平相關[2]。IL-6與自身免疫性疾病有密切關系，使用IL-6受體抑制劑可以緩解RA患者的病情[3]，高水平的IL-6尚可刺激B淋巴細胞合成自身抗體，促進RF及其他細胞因子的生成，從而促進炎性反應過程。本研究表明，活動期RA患者IL-6的水平明顯高于健康對照組，這更進一步說明IL-6參與了RA的炎性反應過程，與相關的研究相吻合[4]。

IL-17是一種由輔助性T細胞17(Th17)細胞分泌的炎性細胞因子，IL-17可以刺激破骨細胞的分化與活化，從而促進軟骨基質的破壞[5]；Koenders等[6]發現阻止關節炎反應中IL-17的生成可以減少關節的腫脹及骨破壞程度。IL-17具有促炎作用，誘導刺激免疫細胞及非免疫細胞產生促炎細胞因子、趨化因子和基質金屬蛋白酶的表達，引起炎性部位細胞浸潤和組織破壞，是骨質吸收和骨質破壞的主要細胞因子之一[7]；IL-17也參與中性粒細胞的增殖、成熟和趨化，并對中性粒細胞的凋亡起到調節作用。在RA患者血清中有高水平的IL-17，表明其在RA發病中發揮重要的作用[8]。RF是一種自身抗體，RA患者和約10%的健康人體內都存在產生RA的B細胞克隆，在變性的、與抗原結合的IgG或在EB病毒的作用下，可合成大量的RF。RA患者的病情嚴重程度及關節骨破壞程度、易伴發關節外癥狀等因素影響IgA和IgM型RF效價，持續高滴度的RF常提示RA活動，且骨侵蝕發生率高[9]。本研究表明RA組RF、IL-17均高于健康對照組，且RF與IL-17水平呈正相關，不同年齡組IL-17的水平存在差異，提示IL-17不僅參與了RA的炎性反應過程，而且還反映了疾病的活動狀態，可作為RA活動性的參考指標，并提示臨床在診療RA的同時應考慮年齡的因素。

IL-23是一種重要的促炎因子，在RA的發病和骨破壞方面發揮重要作用[10]。IL-23可誘發Th17細胞通過激活間質細胞上的核因子κB受體活化因子配基(RANKL)刺激滑膜成纖維細胞、內皮細胞等產生炎性因子IL-6、IL-8、和PGE2，使滑膜處于慢性炎癥狀態[11]，RANKL不僅可參與慢性炎癥的發生過程，也可以導致骨破壞[12]。有研究發現，IL-23與IL-17相互作用在RA的發病過程中起到重要的作用，IL-23可誘導Th17細胞產生IL-17，IL-17再促進IL-1、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和RANKL的生成，最終導致骨侵蝕和關節的破壞[13]。IL-23可以介導信號傳導與轉錄激活因子3(STAT3)的磷酸化過程從而促進IL-17的分泌，IL-23雖不能誘導初始T淋巴細胞分化為Th17細胞，但對Th17的維持擴增及在之后的免疫應答過程中發揮重要作用[14]。另外IL-17可通過正反饋誘導關節滑膜成纖維細胞產生IL-23，進一步加重關節滑膜炎癥[15]。本研究結果表明，RA患者組IL-23的水平高于健康對照組，這更進一步說明IL-23在RA的發生、發展過程中起著重要的作用，檢測血清中IL-23水平對臨床判斷RA的骨破壞程度具有一定的參考價值，同時也可以輔助臨床作為療效判斷的一種手段。

CRP在人血液中的濃度很低，當組織受到創傷或急性感染引起的炎性反應時則會迅速升高[16]，CRP是炎性反應過程中出現的急性期反應蛋白之一，CRP升高說明本病處于活動期，病情緩解會降低，與RA患者骨破壞的發生、發展呈正相關。本研究表明RA患者組CRP的水平高于健康對照組，其水平變化對臨床了解患者的炎癥發展及觀察病情變化具有一定的參考價值。

RA是由多種細胞因子及炎性因子參與的自身免疫性疾病，因發病機制十分復雜，很多參與因素有待闡明。本研究從RA患者的炎癥發展及骨破壞層面出發，觀察了在RA的發生和發展中發揮重要作用的三種細胞因子IL-6、IL-17、IL-23的定量表達情況，并測定了RF、CRP水平，以多元回歸分析了RF與IL-6、IL-17、IL-23、CRP的相關性，通過確實可靠的實驗數據和統計學分析結果得出了可信的結論。為進一步闡明RA的發病機制提供了實驗依據，并為RA的早期預防及臨床診療提供了參考數據。

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Detection and significance of serum interleukins in patients with rheumatoid arthritis*

GENGXue-li,CHENXiang-hua,DINGMeng,XIAOLi-jun,ZONGChun-guang,SONGHong-ru△

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofChengdeMedicalUniversity,Chengde,Hebei067000,China)

Objective To explore the roles of IL-6,IL-17,IL-23,and C-reactive protein (CRP) in the nosogenesis of rheumatoid arthritis (RA).Methods Cytometric beads array (CBA) technology was used to detect the levels of IL-6,IL-17,IL-23 respectively in 60 cases of patients with active RA and 32 cases of healthy people (normal control group),and the levels of rheumatoid factor (RF) and CRP in the two groups were detected by immunoturbidimetric assay at the same time.Results The levels of IL-6,IL-17,IL-23,RF and CRP in serum of the active RA patients were significantly higher than those of normal control group (P<0.05). The RF level was positive correlated with IL-17 level. The IL-17 levels of the RA patients were significantly different among different age groups (P<0.05).Conclusion IL-6,IL-17,and IL-23 play important roles in the nosogenesis of RA,and IL-17 is expected to become one of the candidate marker for the diagnosis of RA.

rheumatoid arthritis; interleukin; rheumatoid factor; C-reactive protein

河北省承德市科技支撐計劃項目(20132059)。

耿學麗，女，主管技師，碩士，主要從事免疫學研究。△

，E-mail：gengxueli1127@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.014

A

1672-9455(2015)07-0912-03

2014-10-07

2014-12-15)