88份痰培養(yǎng)檢驗(yàn)結(jié)果的調(diào)查分析

喻云平，費(fèi) 櫻，余紅嵐

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴陽 550004；2.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院微生物免疫科，貴陽 550004；3.貴陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴陽 550002)

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·論 著·

88份痰培養(yǎng)檢驗(yàn)結(jié)果的調(diào)查分析

喻云平1，費(fèi) 櫻2，余紅嵐3△

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴陽 550004；2.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院微生物免疫科，貴陽 550004；3.貴陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴陽 550002)

目的 調(diào)查該院痰標(biāo)本病原菌的分布及耐藥情況，指導(dǎo)臨床合理用藥。方法 對痰標(biāo)本進(jìn)行涂片檢查，篩選合格標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果 128份標(biāo)本中，篩選出合格標(biāo)本88份(合格率68.75%)；每例痰培養(yǎng)分離出病原菌各1株，共88株，其中革蘭陽性菌14株，占15.9%，均為金黃色葡萄球菌；革蘭陰性菌74株，占84.1%，以肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌為主。金黃色葡萄球菌對阿莫西林和苯唑西林的耐藥率為71.43%，對四環(huán)素、頭孢唑啉、亞胺培南及克林霉素的耐藥率均為64.29%，對羅米沙星和紅霉素的耐藥率均為57.14%。肺炎克雷伯菌和銅綠假單胞菌對大多數(shù)抗菌藥物的耐藥率較低，大腸埃希菌對頭孢噻肟、頭孢曲松的耐藥率均為62.50%。鮑曼不動桿菌對所用的實(shí)驗(yàn)藥物呈普遍耐藥趨勢,對抗菌譜廣的亞胺培南、頭孢吡肟及阿米卡星的耐藥率分別達(dá)77.78%、77.78%及55.56%。結(jié)論 對于有呼吸道感染癥狀的患者應(yīng)盡早送合格的痰標(biāo)本進(jìn)行痰培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)。

痰涂片； 病原菌； 痰培養(yǎng)； 耐藥性

呼吸道標(biāo)本是我國臨床微生物室最常見的標(biāo)本類型，而此類標(biāo)本的采集和運(yùn)送存在不確定性，影響了肺部感染病原菌的判斷，進(jìn)而可能導(dǎo)致抗菌藥物的不合理使用。痰培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果是呼吸道感染診斷與治療的依據(jù)，目前臨床醫(yī)生對感染性疾病的診斷和治療主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用和細(xì)菌的變異，細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生及耐藥菌株引起的感染日益嚴(yán)重，多種致病菌已對臨床常用抗菌藥物產(chǎn)生耐藥。為指導(dǎo)臨床合理性用藥，現(xiàn)將本院2014年1～2月住院患者痰標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡檢，并進(jìn)行培養(yǎng)分離鑒定及藥敏分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 128株病原菌來源于貴陽市第一人民醫(yī)院2014年1～2月住院患者痰液，所有標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡檢、培養(yǎng)分離鑒定及藥敏試驗(yàn)。

1.2 儀器與試劑 西門子公司生產(chǎn)的MicroScan WalkAway 40全自動細(xì)菌分析儀及配套的細(xì)菌鑒定藥敏分析試劑板；二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱YCP-50。血平板和巧克力平板均為廣州市迪景微生物科技有限公司產(chǎn)品。標(biāo)準(zhǔn)菌株:大腸埃希菌ATCC 25922、銅綠假單胞菌ATCC 27853、金黃色葡萄球菌ATCC 25923。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片的制備 將臨床送檢的痰標(biāo)本進(jìn)行涂片及革蘭氏染色，根據(jù)染色結(jié)果將痰標(biāo)本分為3類[均為低倍視野(LHP)]：(1)合格標(biāo)本(鱗狀上皮細(xì)胞≤10/LHP，白細(xì)胞≥25/LHP)；(2)可接受標(biāo)本(鱗狀上皮細(xì)胞<10～<25/LHP，白細(xì)胞≥25/LHP，且細(xì)菌種類為3種或3種以上)；(3)不合格標(biāo)本(鱗狀上皮細(xì)胞≥25/LHP，白細(xì)胞≤10/LHP)。

1.3.2 細(xì)菌分離 痰標(biāo)本同時涂片革蘭氏染色并接種血平板、巧克力平板，24～48 h后分離可疑細(xì)菌。

1.3.3 細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥敏試驗(yàn) 操作嚴(yán)格按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行。細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)均采用西門子MicroScan WalkAway 40 Plus 全自動細(xì)菌分析儀及配套試劑。

1.3.4 臨床處理調(diào)查 查閱患者病歷，統(tǒng)計(jì)臨床醫(yī)生根據(jù)藥敏結(jié)果調(diào)整用藥方案的具體情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 耐藥率、合格率、臨床處理情況采用百分比表示；合格標(biāo)本與不合格標(biāo)本間耐藥率的比較采用SPSS11.5軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 痰涂片結(jié)果 在128份痰標(biāo)本涂片中，合格標(biāo)本70份，可接受標(biāo)本18份，合格率為68.75%，不合格標(biāo)本40份，不合格率為31.25%。

2.2 痰培養(yǎng)分離病原菌構(gòu)成比 在分離出的88株病原菌中，革蘭陰性菌74株，占84.1%，革蘭陽性菌14株，占15.9%,檢出率較高的病原菌依次為肺炎克雷伯菌(28.4%)、金黃色葡萄球菌(15.9%)、銅綠假單胞菌(12.5%)、鮑曼不動桿菌(10.22%)、大腸埃希菌(9.09%)、奇異變形桿菌(6.81%)、嗜麥芽黃單胞菌(2.27%)、陰溝腸桿菌(2.27%)、產(chǎn)酸克雷伯菌(2.27%)、黏質(zhì)沙雷氏菌(2.27%)、摩根摩根氏菌(2.27%)、洛菲氏不動桿菌(2.27%)、催產(chǎn)克雷伯菌(1.13%)、洋蔥伯克霍爾德菌(1.13%)、產(chǎn)氣腸桿菌(1.13%)。產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)菌的檢出率：肺炎克雷伯菌32%(8/25)、大腸埃希菌75%(6/8)。

2.3 合格標(biāo)本痰培養(yǎng)中主要細(xì)菌的耐藥情況 肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌對各抗菌藥物的耐藥率較低，大腸埃希菌對頭孢噻肟、頭孢曲松的耐藥率均大于60.00%，鮑曼不動桿菌對所用的試驗(yàn)藥物呈普遍耐藥,對抗菌譜廣的亞胺培南、頭孢吡肟及阿米卡星的耐藥率分別為77.78%、77.78%及55.56%，主要格蘭陰性菌對抗菌藥物的耐藥率結(jié)果見表1。金黃色葡萄球菌對阿莫西林、苯唑西林、亞胺培南、克林霉素、四環(huán)素、頭孢唑啉的耐藥率均大于60.00%，分別為71.43%、71.43%、64.29%、64.29%、64.29%、64.29%，對紅霉素、羅米沙星的耐藥率均大于50.00%，均為57.14%，對環(huán)丙沙星、利福平、慶大霉素的耐藥率均為50.00%，對萬古霉素、甲氧芐啶/磺胺甲噁唑、氨芐西林、哌拉西林、喹奴普丁、利奈唑胺、氯霉素、青霉素的耐藥率均為0.00%。

表1 主要革蘭陰性菌對抗菌藥物的耐藥率(%)

續(xù)表1 主要革蘭陰性菌對抗菌藥物的耐藥率(%)

2.4 臨床醫(yī)生對檢驗(yàn)結(jié)果的處理情況 查閱病歷顯示，有72例(81.81%)檢驗(yàn)報告結(jié)果被臨床醫(yī)生采用，根據(jù)報告結(jié)果調(diào)整抗菌藥物或繼續(xù)使用對檢驗(yàn)結(jié)果敏感的抗菌藥物，有14例(18.18%)檢驗(yàn)結(jié)果未被臨床醫(yī)生采用。

3 討 論

呼吸道感染疾病在臨床感染性疾病中最為常見，而痰培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)為病原學(xué)診斷及合理使用抗菌藥物提供了依據(jù)[1]。合格痰標(biāo)本的篩選依賴于涂片鏡檢，只有痰標(biāo)本達(dá)到合格條件，細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏結(jié)果才值得參考采用[2-3]?？谘什看嬖诖罅康亩ㄖ簿箍忍挡杉臉?biāo)本易受污染，本院臨床送檢的痰標(biāo)本有68.75%合格、31.25%不合格，該結(jié)果從一定程度上驗(yàn)證了上述觀點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，呼吸道感染的主要致病菌為革蘭陰性菌，占所有分離細(xì)菌的84.1%，與國內(nèi)外近年報道基本一致[1,4-6]。革蘭陰性菌中檢出前4位的細(xì)菌分別是肺炎克雷伯菌(28.4%)、銅綠假單胞菌(12.5%)、鮑曼不動桿菌(10.22%)和大腸埃希菌(9.09%)，其次為奇異變形桿菌(6.81%)，再次為嗜麥芽黃單胞菌(2.27%)、陰溝腸桿菌(2.27%)、產(chǎn)酸克雷伯菌(2.27%)、黏質(zhì)沙雷氏菌(2.27%)、摩根摩根氏菌(2.27%)、洛菲氏不動桿菌(2.27%)。為何引起院內(nèi)呼吸道感染的這些病原菌過去一直被視為機(jī)體“正常菌群”，而如今卻成為主要病原菌呢？這與下面3個主要因素相關(guān)：(1)抗菌藥物濫用導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生。(2)長期大量放療、化療、激素、免疫抑制劑的使用導(dǎo)致機(jī)體防御能力下降。(3)醫(yī)源性侵入使細(xì)菌逃脫機(jī)體固有免疫的防御而直接入侵體內(nèi)。這些因素能使感染的細(xì)菌種類不斷變異。本次檢出的革蘭陽性菌只有金黃色葡萄球菌，占檢出病原菌的15.9%。

本次檢出的革蘭陰性菌中，銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌對各種抗菌藥物的耐藥率較低，這與近年來的研究基本相符[7]。黃學(xué)忠等[7]研究發(fā)現(xiàn)，過去5年痰標(biāo)本銅綠假單胞菌檢出率為39.2%，且亞胺培南耐藥菌株占74.1%，但對頭孢他啶、頭孢吡肟、替卡西林、替卡西林/克拉維酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、慶大霉素、環(huán)丙沙星等的耐藥率呈明顯下降趨勢，但本研究中銅綠假單胞菌的檢出率低于文獻(xiàn)結(jié)果，且并未檢出對亞胺培南耐藥的菌株，這可能與本次檢出細(xì)菌較少有關(guān)。大腸埃希菌對第3代頭孢菌素類藥物(頭孢噻肟、頭孢曲松)的耐藥率均大于60.00%，且75%的大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs，耐藥情況十分嚴(yán)峻，給臨床抗感染治療帶來較大的困難。夏夢巖等[8]報道肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌的產(chǎn)ESBLs率分別為31.5%～85.3%和41.3%～87.2%，且對碳青霉烯類仍然敏感。本研究檢出的肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs率為32%，耐藥情況與上述研究基本相符。鮑曼不動桿菌對所用的試驗(yàn)藥物普遍耐藥,對抗菌譜廣的亞胺培南、頭孢吡肟及阿米卡星的耐藥率分別達(dá)77.78%、77.78%及55.56%，這與近年來鮑曼不動桿菌對大多數(shù)抗菌藥物耐藥率都在50%以上的研究結(jié)果相一致[9-10]。金黃色葡萄球菌對阿莫西林、苯唑西林、亞胺培南、克林霉素、四環(huán)素、頭孢唑啉的耐藥率均大于60.00%，對紅霉素、羅米沙星的耐藥率均大于50.00%,對萬古霉素敏感，與文獻(xiàn)[11]報道一致。

本研究調(diào)查了臨床醫(yī)生對檢驗(yàn)結(jié)果的處理情況，發(fā)現(xiàn)有81.81%的細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏結(jié)果被臨床醫(yī)生采用，這提示檢驗(yàn)科需要做好細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏檢驗(yàn)全程的質(zhì)量控制以便及時、準(zhǔn)確地向臨床提供檢驗(yàn)結(jié)果，為臨床合理用藥提供參考。

綜上所述，對于有呼吸道感染癥狀的患者應(yīng)盡早送合格的痰標(biāo)本進(jìn)行痰培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)，以便及時掌握引起呼吸道感染的病原菌種類及其耐藥性，幫助臨床及時、合理地使用抗菌藥物，避免由于經(jīng)驗(yàn)性使用抗菌藥物導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增加的情況。

[1]陳倩如,陸國標(biāo).228 例痰培養(yǎng)病原菌分布及細(xì)菌耐藥性分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2013,19(1):27-28.

[2]楊朵,辛續(xù)麗,馬東媛,等.痰培養(yǎng)標(biāo)本合格性評估標(biāo)準(zhǔn)的比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,27(9):773-775.

[3]梁金花.238 份痰標(biāo)本涂片與培養(yǎng)結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(13):1634-1635.

[4]戴以順,齊興江,江周書.下呼吸道感染病原菌分布及藥敏分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,24(11):2619-2620.

[5]陳友軍,唐雙陽,李樂.呼吸道感染痰培養(yǎng)的病原菌分布及其耐藥分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2011,21(8):2067-2069.

[6]王福蘭,李福玲,王桂榮,等.ICU 下呼吸道感染者病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2012,22(3):635-637.

[7]黃學(xué)忠,林佩佩,陳曉飛.痰標(biāo)本銅綠假單胞菌 224 株 5 年耐藥變遷[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(5):560-561.

[8]夏夢巖,高全成,袁晨光.大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌耐藥性的變遷研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,24(2):287-289.

[9]錢菁菁，周翠，吳蓮鳳，等．鮑曼不動桿菌耐藥特性及同源性研究[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014,24(8):1188-1190.

[10]白國強(qiáng),李昂,段美麗.鮑曼不動桿菌的耐藥機(jī)制及抗生素治療研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2014,54(4):87-90.

[11]劉軍輝,李鵬,王淑梅,等.葡萄球菌的耐藥性分析[J].西安交通大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2011,32(1):135-136.

Investigation and analysis of 88 cases of sputum culture results

YUYun-ping1，F(xiàn)eiYing2，YUHong-lan3△

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine，GuiyangMedicalUniversity,Guiyang，Guizhou550004，China；2.DepartmentofMicrobiologyandImmunologyofGuiyangMedicalCollegeHospital,Guiyang,550004,China;3.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofGuiyang,Guiyang,Guizhou550002，China)

Objective To investigate the distribution and the drug resistance of pathogenic bacteria in the sputum specimens,in order to guide clinical rational drug use.Methods The sputum specimens were smeared and observed. Qualified sputum specimens were selected for bacterial identification and susceptibility testing.Results Among 128 cases of sputum specimens,there were 88 cases of qualified specimens screened (qualified rate was 68.75%). 88 strains of pathogenic bacteria were respectively isolated from 88 cases of qualified specimens via sputum culture,including 14 strains (15.9%) of Gram positive bacteria and 74 strains (84.1%) of Gram negative bacteria. All of the isolated Gram positive bacteria were Staphylococcus aureus. The isolated strains of Gram negative bacteria were mainly Klebsiella pneumonia,Acinetobacter baumannii,Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli. The resistance rates of Staphylococcus aureus to amoxicillin and oxacillin were both 71.43%,to tetracycline,cefazolin,imipenem and clindamycin were 64.29%,and to romi lomefloxacin and erythromycin were both 57.14%. The drug resistance rates of Klebsiella pneumonia and Pseudomonas aeruginosa to most of the antibiotics were low. The drug resistance rates of Escherichia coli to cefotaxime and ceftriaxone were both 62.50%. Acinetobacter baumannii was resistant to all of the experimental drugs,and its resistance rates to imipenem,cefepime and amikacin were 77.78%,77.78% and 55.56%,respectively.Conclusion The qualified sputum specimens from patients with respiratory tract infection should be sent to culture and test the drug sensitivity as soon as possible.

sputum smear; pathogenic bacteria; sputum culture; drug resistance

喻云平，男，檢驗(yàn)師，碩士，主要從事自身感染性疾病的免疫機(jī)制研究?！?/p>

，E-mail:1049251463@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.022

A

1672-9455(2015)07-0931-02

2014-10-05

2014-12-22)