脂肪血制備懸浮紅細胞的質量研究

駱展鵬，樊小蓉，戴寶劍，王娟娟，歐陽熊妍△

(1.重慶市血液中心 400015；重慶市合川區中心血站 401520)

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·論 著·

脂肪血制備懸浮紅細胞的質量研究

駱展鵬1，樊小蓉1，戴寶劍2，王娟娟1，歐陽熊妍1△

(1.重慶市血液中心 400015；重慶市合川區中心血站 401520)

目的 研究脂肪血制備的懸浮紅細胞的質量變化。方法 按常規制備濾除白細胞懸浮紅細胞的方法處理輕、中、重度脂肪血及正常血，檢測其過濾前后紅細胞滲透脆性，觀察紅細胞在儲存期K+、Na+濃度、pH值、游離血紅蛋白濃度的變化。結果 中、重度組紅細胞滲透脆性在過濾后明顯增高，輕度組、正常組無明顯變化。儲存期中、重度組紅細胞K+濃度、游離血紅蛋白濃度明顯高于輕度組和正常組(P<0.05)。Na+濃度、pH值各組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論 對于輕度脂肪血可采用棄其血漿，利用紅細胞，而對于中、重度脂肪血應該選擇報廢。

三酰甘油； 脂肪血； 懸浮紅細胞

脂肪血即通常所說的乳糜血，其特點是血漿呈乳白色或混濁狀。以往研究證明，脂肪血輸入患者體內后，會引發不同程度的輸血反應。目前由于我國國民生活水平提高，脂質代謝異常者逐年增加，全國各地血站每年脂肪血報廢率逐年攀升[1-2]。因此，有研究者將脂肪血去除血漿后制備成懸浮紅細胞加以利用，以減少血源的浪費[3-4]。但是紅細胞作為血液中的主要成分，高濃度的脂肪可能會對其產生影響，這種去除脂肪血漿的紅細胞在制備過程中是否受到損傷及能否被再次利用，尚未確定。因此，本文將初步探討這種懸浮紅細胞在制備及儲存期間的質量變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 脂肪全血及正常全血均來自重慶市血液中心。

1.2 儀器與試劑 一次性使用去白細胞型血袋由山東威高集團提供好；722 S紫外可見分光光度計由深圳康立公司提供；AFT-500D電解質分析儀由上海精密科學儀器公司提供；0.9% 氯化鈉(NaCl)溶液購自重慶太極集團。

1.3 方法

1.3.1 三酰甘油(TG)濃度檢測及分組 送重慶醫科大學附屬第二醫院檢驗科檢測TG濃度。依據美國國家膽固醇教育計劃成人治療小組第3次會議報告(NCEP-ATPⅢ)，將脂肪全血分為3組：輕度組(1.69 mmol/L

1.3.2 濾除白細胞懸浮紅細胞的制備及保存 將全血(保存液：ACD-B)于24 h內過濾。全血過濾后離心分離血漿，在濃縮紅細胞中灌注紅細胞保存液，最后保存于2～6 ℃。每隔7天取樣檢測，直至第35天。

1.3.3 紅細胞滲透脆性檢測 按照《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)中“紅細胞孵育滲透脆性試驗”操作[5]。NaCl溶液濃度梯度見表1。以溶血百分率為縱坐標，NaCl濃度為橫坐標作溶血曲線圖，即為紅細胞鹽水滲透脆性曲線。在曲線上，50%溶血的NaCl濃度為紅細胞中間脆性(MCF)。

1.3.4 K+、Na+濃度檢測 按照《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)中“離子選擇電極法”操作[3]。

1.3.5 pH值檢測 按照《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)中“電極法”操作[3]。

1.3.6 游離血紅蛋白檢測 按照《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)中“鄰-聯甲苯胺”法操作[3]。

表1 NaCl溶液濃度梯度

2 結 果

2.1 各組全血TG濃度水平 輕度組、中度組、重度組和正常組的TG水平分別為：(1.88±0.12)、(3.74±0.78)、(6.80±0.71)、(1.00±0.40) mmol/L。各組全血均滿足NCEP-ATP Ⅲ文件對高三酰甘油血癥的界定，可用于后續試驗。

2.2 過濾前后紅細胞滲透脆性 紅細胞鹽水滲透脆性曲線，見圖1。過濾前重度組、中度組MCF在第4～5管之間(NaCl濃度為6.0～6.5 g/L)；輕度組、正常組MCF在第5～6管之間(NaCl濃度為5.5～6.0 g/L)。過濾后輕度組、正常組在第5～6管(NaCl濃度為5.5～6.0 g/L)，較過濾前未見明顯改變，重度組、中度組MCF在第3～4管之間(NaCl濃度為6.5～7.0 g/L)紅細胞滲透脆性較過濾前明顯增加。

注：A為過濾前，B為過濾后。

圖1 紅細胞滲透曲線

2.3 紅細胞儲存期間質量變化

2.3.1 K+、Na+濃度 紅細胞儲存期K+濃度見表3。重度組、中度組K+濃度較正常組明顯增高(P<0.05)，輕度組與正常組相比無明顯變化(P>0.05)。儲存期 Na+濃度見表4，重度組、中度組、輕度組與正常組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。在整個儲存期間，K+濃度隨保存時間的延長，呈上升趨勢，而Na+濃度則呈下降趨勢。

2.3.2 pH值 在整個儲存期，pH值隨保存時間的延長而降低，但重度組、中度組、輕度組與正常組比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表5。

表3 紅細胞儲存期間K+濃度

注：*P<0.05，與正常組比較。

2.3.3 游離血紅蛋白濃度變化 儲存期紅細胞游離血紅蛋白濃度，見表6。各組游離血紅蛋白濃度隨保存時間的延長而上升，重度組、中度組與正常組比較，明顯增高(P<0.05)，輕度組與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表4 紅細胞儲存期間Na+濃度

表5 紅細胞儲存期間pH值

表6 紅細胞儲存期間游離血紅蛋白濃度

注：*P<0.05，與正常組比較。

3 討 論

隨著非溶血性輸血反應日益受到重視，臨床廣泛應用濾除白細胞的懸浮紅細胞。在濾除白細胞的過程中，濾器對脂肪血中紅細胞的影響，以及紅細胞在儲存期的質量，均有待考證。因此，本研究初步探討了由脂肪血制備而成的濾除白細胞的懸浮紅細胞的質量變化，從而為制訂合理、有效的降低脂肪血報廢率的方法提供實驗依據。

目前，血站成分制備人員主要根據肉眼觀察血漿外觀渾濁程度來判斷是否為脂血。已知血漿中TG濃度越高，血漿外觀越渾濁。因此本研究以TG作為篩選脂血的主要指標。為了探討過濾過程是否對紅細胞膜產生影響，首先檢測了紅細胞滲透脆性。紅細胞滲透脆性反映了紅細胞在低滲條件下的抵抗力，常作為紅細胞膜損傷的指標之一。在脂血過濾后，中、重度組脂血紅細胞滲透脆性明顯增加，而輕度組、正常組紅細胞滲透脆性未見明顯變化，提示中、重度組脂血在通過微孔濾膜時，紅細胞膜易受到損傷。這與文獻報道的高濃度TG對紅細胞剛性影響較大的結論相一致[6-7]。另外，王現偉等[8]在高脂血癥大鼠動物模型的研究中同樣也發現了大鼠紅細胞在通過微孔膜時，紅細胞膜受到嚴重損傷。深入研究其機制發現，高濃度TG能夠破壞紅細胞骨架完整性，降低紅細胞骨架蛋白F-actin，從而破壞紅細胞結構基礎，使紅細胞變形能力降低，導致紅細胞在通過微孔膜時受到擠壓損傷。因此，中、重度脂肪血在制備濾除白細胞的懸浮紅細胞過程中，紅細胞質量受到影響。通過研究紅細胞儲存期質量變化發現，中、重度組紅細胞K+濃度雖然在保存第0天與輕度組、正常組差異無統計學意義(P>0.05)，但是從保存第7天至保存第35天，均明顯高于輕度組和正常組(P<0.05)，這可能是由于中、重度組紅細胞膜受到損傷后，細胞內K+外溢程度高于輕度組、正常組所致。檢測其游離血紅蛋白濃度發現，在保存第0天中、重度組游離血紅蛋白濃度已經明顯高于輕度組、正常組(P<0.05)，且隨著保存時間的延長，升高趨勢越明顯，尤其是在保存末期(第28～35天)出現了急劇升高，提示中、重度組紅細胞溶血較輕度組、正常組嚴重。此外，肉眼觀察各組紅細胞上清液，在保存第0天，輕度組、正常組上清液無色透明，而中、重度組上清液呈微紅色；至保存第35天，輕度組、正常組上清液僅呈微紅色，而中、重度組上清液呈明顯紅色且微渾。這進一步揭示在保存期間中、重度組紅細胞壽命較輕度組、正常組大為縮短。在整個儲存期間Na+濃度、pH值各組均呈現下降的趨勢，但各組間無明顯差異，與呂秋霜等[9]在對全血、懸浮紅細胞保存過程質量研究中所觀察到的結果一致。

綜上所述，盡管目前國家標準對濾除白細胞的懸浮紅細胞的各項生化指標尚無明確規定[10]，但是這種生理功能受到影響的紅細胞輸注到患者體內后，勢必會對患者造成一定的影響。因此，對于輕度脂肪血可采用棄其血漿，利用紅細胞，從而達到降低報廢率的目的；而對于中、重度脂肪血應該選擇全血報廢。

[1]金志堅,陳銘娟,姜淑美,等.無償獻血者重度脂肪血調查分析[J].中國輸血雜志,2005,17(5):358-358.

[2]艾新芳,方大治.脂血報廢的原因分析及對策[J].中國衛生質量管理,2006,12(5):64-65.

[3]趙林園,趙樹華,朱琳.一種提高脂肪血臨床利用率的脂肪血分離方法[J].中國輸血雜志,2006,18(5):399.

[4]謝玉萍,曾常愛.吉安市脂肪血報廢的原因分析及利用[J].井岡山醫專學報,2007,13(6):54.

[5]葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.南京：東南大學出版社，2006.

[6]王梅,耿慶信,劉國梁.血清甘油三酯及膽固醇對血液黏度和紅細胞流變性的影響[J].山東醫藥,2005,45(16):43-44.

[7]楊菲,賈芳,許進.2 型糖尿病大鼠血清甘油三酯,紅細胞聚集性動態變化及其相關性[J].山東醫藥,2007,47(5):24-25.

[8]王現偉,胡林,許鋒林,等.激光生物學技術研究高脂血癥大鼠紅細胞變形能力改變及其機制[J].激光生物學報,2007,16(2):148-151.

[9]呂秋霜,任芙蓉,劉長利.4 種紅細胞制劑在保存過程中的質量觀察[J].中國輸血雜志,2008,20(6):506-507.

[10]周靜宇.全血及成分血質量要求(GB18469-2012)實施探討[J].臨床血液學雜志:輸血與檢驗,2013，26(8):572-573.

Qualification of suspended red blood cells producted by lipid blood

LUOZhan-peng1，FANXiao-rong1，DAIBao-jian2，WANGJuan-juan1，OUYANGXiong-yan1△

(1.ChongqingBloodCenter,Chongqing400015,China;2.CentalBloodStationofHechuan,Chongqing401520,China)

Objective To explore the quality change of suspended leukocyte-reduced red blood cells (SLrRBCs) prepared from lipid blood and to provide experimental evidence to develop reasonable and effective methods to reduce the scrappage of lipid blood.Methods SLrRBCs were prepared from light,moderate and severe lipid blood by conventional method,and RBC osmotic fragility was detected before and after filtering.Then the changes of the concentrations of K+,Na+and free Hb and the pH values of different SLrRBCs were analyzed during storage period.Results RBC osmotic fragility of moderate and severe groups were increased,but no change was observed of light and normal groups.The concentrations of K+and free Hb of moderate and sever groups were higher than those of light and normal groups(P<0.05),and there were no difference of the concentration of Na+and the pH value during storage period(P>0.05).Conclusion RBC of light lipid blood could be utilized,but moderate and severe lipid blood should be scrapped.

triacylglycerol； lipid blood； suspended red blood cells

駱展鵬，男，主管檢驗師，碩士，主要從事采供血質量管理與質量控制研究。△

，E-mail：451131040@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.027

A

1672-9455(2015)07-0942-03

2014-09-15

2014-12-19)