電化學發光免疫分析法檢測低值HBsAg與乙肝五項檢測結果比較

蔡 丹,陳建明,李慧梁,田 佳

(湖南省湘潭市中心醫院輸血科 411100)

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·臨床研究·

電化學發光免疫分析法檢測低值HBsAg與乙肝五項檢測結果比較

蔡 丹,陳建明,李慧梁,田 佳

(湖南省湘潭市中心醫院輸血科 411100)

目的 比較電化學發光免疫分析法(ECLIA)檢測低值乙肝表面抗原(HBsAg)與酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法乙肝五項[HBsAg、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(HBeAb)、乙肝核心抗體(HBcAb)]的檢測結果，為臨床和科研提供一定的科學依據。方法 根據ECLIA檢測HBsAg的結果，將207例患者分為3組：A組，HBsAg為>0.05～5.00 IU/mL；B組，HBsAg為>0.20～0.50 IU/mL；C組，HBsAg為0.05～0.20 IU/mL。采用ELISA法對3組進行HBsAg檢測，對C組進行乙肝五項檢測及6個月追蹤HBsAg檢測，對測定結果進行比較分析。結果 A、B、C組ECLIA法和ELISA法測定HBsAg的陽性符合率分別為100.00%、98.08%、30.43%，C組顯著低于A、B組，差異有統計學意義(P<0.05)。對C組中ELISA法檢測HBsAg為陰性，HBeAb、HBcAb同時陽性或HBcAb單項陽性的患者，進行6個月追蹤檢測，HBsAg陽性符合率提高至45.65%。結論 ECLIA法檢測低值HBsAg的靈敏度明顯高于ELISA法，能有效提高檢測的準確性。

電化學發光免疫分析； 酶聯免疫吸附試驗； 乙肝五項

乙型肝炎病毒(HBV)感染是危害人類健康最嚴重的問題之一。全球超過1/3的人口曾感染過HBV，其中超過3.6億人轉化為慢性感染[1]；每年約有62萬人死于HBV感染引起的急性重型肝炎、肝硬化和肝癌，此外還新增感染450萬人，其中1/4發展為肝病[2]。我國是HBV感染的高發流行地區，流行病學調查顯示人群中乙肝表面抗原(HBsAg)陽性攜帶者為7.18%[3]。乙型肝炎是目前流行最廣泛、危害最嚴重的病毒性肝炎之一，而HBsAg是HBV感染最主要的病原標志和直接證據之一[4]。有資料顯示，低水平HBsAg攜帶者在人群中占有一定比例，正常人群HBsAg水平在5 IU/mL以下者占2.34%[5]。乙型肝炎血清學特征復雜多變，HBV感染者會在不同時期出現不同的血清標志物，且不同時期的血清標志物濃度不一，因此選擇高靈敏度的檢測方法，對乙型肝炎的臨床診斷、治療、療效觀察及預防都有著重要的意義。目前我國大部分醫療機構正在由酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測向電化學發光免疫分析(ECLIA)技術發展，本文對ECLIA檢測低值HBsAg的結果與ELISA法檢測乙肝五項[HBsAg、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(HBeAb)、乙肝核心抗體(HBcAb)]的結果進行了比較，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2011年11月至2013年11月本院輸血前和手術前ECLIA檢測血HBsAg(結果為0.05～0.50 IU/mL)的患者為研究對象，共207例，其中男111例，女96例，年齡22～81歲，平均46.5歲。

1.2 儀器與試劑 ARCHITECT i2000sr化學發光免疫檢測系統由美國雅培提供，試劑盒臨界值為0.05 IU/mL，ELISA法試劑盒由上海科華生物有限公司提供，試劑盒臨界值為0.105 IU/mL，酶標儀為芬蘭雷勃MK3型，洗板機為芬蘭雷勃4MK2型。

1.3 方法 ECLIA法和ELISA法均嚴格按照說明書操作。根據ECLIA法檢測HBsAg的結果，將患者分為3組：A組，HBsAg為>0.50～5.00 IU/mL，63例；B組，HBsAg為>0.20～0.50 IU/mL，52例；C組，HBsAg為0.05～0.20 IU/mL，92例，其中ELISA法陰性者64例(HBeAb、HBcAb同時陽性36例，HBcAb單項陽性28例)。觀察A、B、C組中，ECLIA法和ELISA法檢測HBsAg的陽性符合率。對C組中ELISA法陰性的64例患者追蹤3個月，3個月后再次分別采用ECLIA法檢測HBsAg，ELISA法檢測乙肝五項，如3個月后ELISA法檢測結果為陽性，則不再追蹤，對于ELISA法檢測結果仍為陰性的患者，再連續追蹤3個月，方法同上，觀察其HBsAg陽性符合率是否提高。

2 結 果

A組與B組比較，ECLIA法和ELISA法的陽性符合率差異無統計學意義(P>0.05)，但C組的陽性符合率較A組和B組顯著降低，差異有統計學意義(P<0.05)。對C組中ELISA法檢測HBsAg陰性、HBeAb、HBcAb同時陽性或HBcAb單項陽性的患者，進行6個月追蹤檢測，結果HBsAg陽性符合率提高至45.65%，見表1。

表1 各組ELISA法檢測HBsAg結果比較

注：*表示追蹤6個月后的C組。

3 討 論

目前，HBV感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低值水平狀態存在[6]，一般認為這是由于機體處于感染HBV的早期即窗口期，體內雖有病毒復制但HBsAg編碼呈低水平表達。另外，還有些慢性乙型肝炎患者的病毒S區或X區基因突變也會影響到HBsAg表達，血清中HBsAg處于低值水平和HBsAg陰性的隱匿性乙型肝炎感染(HBcAb陽性)，加之目前的ELISA診斷試劑對不同突變的HBsAg檢測能力不相同，使血清中低值水平HBsAg的乙型肝炎患者易被漏檢。正如馬紅霞等[7]采用ELISA法和ECLIA法檢查血清中HBsAg的結果顯示：ECLIA法和ELISA法檢測HBsAg的陽性率分別為5.82%(519例)和5.06%(451例)。說明ECLIA法檢測HBsAg的敏感性更高。但低值水平HBsAg也可作為HBV感染的標志，0.1 μg/L的HBsAg即有傳染性，因此低值水平HBsAg的檢出率對乙型肝炎的診斷、療效觀察，特別是對于流行病學調查、控制母嬰傳播、保障輸血安全具有重要意義。

本研究中采用的ARCHITECT i2000sr化學發光免疫檢測系統是以順磁性珠作為包被載體，與標本中的相應抗體或抗原結合后，加入吖啶酯作為標記，在特定的磁場區發生沉積，經反復洗滌使抗體與抗體復合物或游離抗原分離，加入激發液與預激發液后，測定其相應的發光強度即可判斷標本的抗原抗體濃度。該方法具有重復性好、靈敏度高、準確性高、無放射性、能快速檢查等優點[8]。本研究結果顯示，對于ECLIA法測定HBsAg值為>0.50～5.00 IU/mL的患者(A組)，ELISA法檢測HBsAg的陽性符合率為100.00%；對于ECLIA法測定HBsAg值為>0.20～0.50 IU/mL的患者(B組)，ELISA法檢測HBsAg的陽性符合率為98.08%；對于ECLIA法測定HBsAg值為0.05～0.20 IU/mL的患者(C組)，ELISA法測定HBsAg的陽性符合率為30.43%，顯著降低，與其他兩組相比差異有統計學意義(P<0.05)。對C組中ELISA法檢測HBsAg陰性、HBeAb、HBcAb同時陽性或HBcAb單項陽性的患者，進行6個月追蹤檢測，結果HBsAg陽性符合率提高至45.65%，說明ELISA法漏檢的有一部分為免疫“窗口期”，隨著HBsAg滴度提高達到ELISA法檢測水平；一部分為HBV的S基因、X基因變異導致HBsAg低水平的表達和隱匿性HBV感染，一直處于HBsAg低值水平，對常規采用ELISA法檢測HBsAg應同時進行乙肝五項檢測很有意義，應綜合乙肝五項結果和臨床癥狀綜合進行分析，特別對HBcAb陽性、HBsAg陰性的患者應有進一步的檢測方法降低漏檢率。有研究證明，HBcAb的檢測有助于降低輸血傳播HBV的感染性，尤其在減少隱匿性HBV感染方面，如美國、加拿大等國家，已將HBcAb作為常規檢測項目，大大提高了輸血安全性[9]。在HBV流行率較高的地區如中國臺灣、日本等，HBV DNA在HBcAb陽性人群中的檢出率則高達4%～24%[10]，說明HBcAb陽性率與HBV感染率有密切關系，本研究結論與之相符。

綜上所述，ECLIA法具有靈敏、特異、精密度高、準確度好、線性范圍寬等優點，并能夠降低HBsAg漏檢率，操作簡單、實用性強，可作為常規檢測。對未開展ECLIA檢測的應關注乙肝五項檢測結果，盡可能減少漏檢率。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.046

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1672-9455(2015)07-0982-02

2014-11-10

2014-12-20)