出血大鼠血清IL-17, IL-23的表達及意義①

畢 勝，李 冬， 王李鳴，趙巖巖，田嘉瑩，李培育

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

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出血大鼠血清IL-17, IL-23的表達及意義①

畢 勝，李 冬， 王李鳴，趙巖巖，田嘉瑩，李培育

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的: 以腦出血大鼠為研究對象，探討血清IL-17, IL-23的表達及意義。方法: 將90只大鼠隨機分成三組：對照組(A組)，假手術組(B組)，出血組(C組)，每組30只。分別設6h，24h，3d，7d，14d五個時間點。用酶聯免疫吸附法(ELISA) 檢測大鼠血清中白細胞介素17( IL-17)、白細胞介素23( IL-23) 的表達。結果: 對照組與假手術組IL-17，IL-23的表達在各時間點均無統計學差異(P>0.05)。出血組與對照組、假手術組相比、同一時間點IL-17，IL-23的表達均具有統計學差異(P<0.05)。出血組內各時間點IL-17，IL-23的表達相比，均具有統計學差異(P<0.05)。IL-17，IL-23的表達在腦出血后7d高于出血其他時間點，具有統計學差異(P<0.05)。結論: 腦出血大鼠發病 6h后, 外周血中IL-17，IL-23 的表達增加;IL-17，IL-23 的表達在腦出血后7d高于6h，24h，3d，14d。IL-17，IL-23 參與腦出血后的炎癥反應。

腦出血；IL-17；IL-23

腦出血是一種常見的中樞神經系統疾病，在我國具有發病率高，預后差的特點。腦出血發病機制復雜，多種機制參與其發病過程[1,2]，近年來人們研究發現炎癥反應在其發病機制中占有重要地位。Th17細胞是不同于Th1細胞，Th2細胞的另一類CD4+輔助性T細胞亞群，Th17細胞可產生多種致炎性細胞因子，主要產生IL-17。IL-23 可以通過介導STAT3 的磷酸化過程促進IL-17 的分泌[3]。我們選用大鼠制作腦出血模型，探討腦出血后外周血血清中IL-17，IL-23的表達及意義。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

由吉林大學動物實驗中心提供的清潔級SD大鼠，雄性，年齡均為12±2周，共90只，體重220-260克，采用多層層流架飼養，20-25℃ 恒溫飼養。動物分組：大鼠隨機分成三組：對照組(A組)，假手術組(B組)，出血組(C組)，每組30只。出血組(C組)動物模型的制備：參考Hua[4]的方法，Wistar大鼠經10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于立體定位儀上，于前囟前0.2mm中線右旁開3.5mm處用牙科鉆鉆一直徑為1mm的小孔，由心臟抽取血液100μL，微量進樣器沿鉆孔進針，進針深度5.5mm(即尾狀核位置)，以13μL/min的速度勻速注射自體不凝血約50μL，留針10min后緩慢移出針頭。以大鼠腦切片中有明顯的圓形、卵圓形或不規則的血腫存在，無血液針道反流、無蛛網膜下腔出血、無血腫破入腦室者為模型成功標準，術后昏迷不醒或死亡者剔除。模型成功的判定：采用Longa法評分[5]，無神經功能缺損為0分，出血后對側肢體不能伸直為1 分，出現轉圈為2 分，行走時身體向偏癱側傾倒為3 分，意識消失，完全不能行走為4 分，大于2分認為模型成功。對照組(A組)實驗大鼠模型建立方法同出血組，但只是完成刺入動作，不注入血液。假手術組(B組)：步驟同腦出血造模，蒼白球注入生理鹽水。分別設6h，24h，3d，7d，14d五個時間點。

1.2 血清IL-17，IL-23的測定

各組于各時間點抽取左股動脈血靜置0.5h，以3000r/min離心10min，吸取上層血清，用0.5μL離心管分裝放置-70℃深低溫冰箱備用， 用大鼠IL-17酶聯免疫分析試劑盒、大鼠IL-23酶聯免疫分析試劑盒進行酶聯免疫實驗, 用美國BIO-RAD伯樂酶標儀(型號550)在450nm處檢測OD值。

1.3 統計學處理

采用SPSS13.0統計軟件進行統計學分析，各項數值以均數±標準差(x[TX-]±s)表示，組間比較用單因素方差分析(ANOVA)，P<0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 大鼠血清中IL-17的表達

對照組與假手術組IL-17的表達在各時間點均無統計學差異(P>0.05)。出血組與對照組、假手術組相比、同一時間點IL-17的表達均具有統計學差異(P<0.05)。出血組內各時間點IL-17的表達相比，均具有統計學差異(P<0.05)。IL-17的表達在腦出血后7d高于出血其他時間點，具有統計學差異(P<0.05)。

2.2 大鼠血清中IL-23的表達

對照組與假手術組IL-23的表達在各時間點均無統計學差異(P>0.05)。出血組與對照組、假手術組相比、同一時間點IL-23的表達均具有統計學差異(P<0.05)。出血組內各時間點IL-23的表達相比，均具有統計學差異(P<0.05)。IL-23的表達在腦出血后7d高于出血其他時間點，具有統計學差異(P<0.05)。

表1 大鼠血清中IL-17的表達

在同一時間點與對照組相比較*P<0.05；與假手術組相比較#P<0.05；出血組內，與6h相比較@P<0.05；與24h相比較&P<0.05；與3d相比較▲P<0.05；與7d相比較+P<0.05。

表2 大鼠血清中IL-23的表達 (x[TX-]±s, n=6,pg/mL)

在同一時間點與對照組相比較*P<0.05；與假手術組相比較#P<0.05；出血組內，與6h相比較@P<0.05；與24h相比較&P<0.05；與3d相比較▲P<0.05；與7d相比較+P<0.05；

3 討論

腦出血發病機制復雜，近年來研究人員發現炎癥反應參與腦出血的發病過程。已有研究證腦組織缺血缺氧后，多種細胞動員，分泌多種細胞因子，細胞因子通過血液循環進入病變部位，參與腦出血的發病過程。Wang等[6]在對腦梗死模型的研究中發現IL-17及其受體IL-17R表達增加，提示通過IL-17/IL-17R通路參與腦缺血缺氧后的損傷。本實驗研究證實，腦出血實驗組血清中IL-17的水平在發病6h后增加，提示IL-17參與人腦出血后的病理過程及炎癥反應。

腦出血發病6h，出血組大鼠血清IL-17的水平與對照組、假手術組相比具有統計學差異。提示在腦出血早期，IL-17即發揮重要作用。腦出血發病24h，3d，7d逐漸升高，提示IL-17在腦出血發病中持續發揮重要作用。已有研究證實，腦出血6h后，血腫周圍組織即發生炎癥反應，且逐漸加重，約3～7d達到水腫高峰期。IL-17的水平在6h至7d的持續升高，這一趨勢與腦出血后的組織病理變化表現出高度一致性，進一步證實其在腦出血發病中的重要作用。7d后IL-17水平雖下降，但仍高于對照組。提示IL-17除參與炎癥反應外，還可能與血腫吸收等病理生理過程相關。

記憶性細胞被IL-23激活后可促進IL-17，IL-6，IFN-γ等多種細胞因子的分泌[7]。IL-23 具有趨化作用，能夠趨化多種細胞到病變部位，發揮促炎作用[8]。已有研究證實，IL-23 與腦組織缺血缺氧后的早期損傷有關[9]。

本實驗研究證實，腦出血實驗組中大鼠血清IL-23的水平在在發病6h后增加，高于對照組及假手術組，提示腦出血IL-23參與腦出血后的炎癥反應。大鼠血清IL-23的水平的變化趨勢與IL-17變化趨勢一致。提示IL-23可能通過刺激靶細胞產生IL-17等相關細胞因子，促進腦出血后炎癥反應的發生。本研究提示IL-17、IL-23作為重要的致炎因子，在腦出血發病后的炎癥反應中發揮重要作用，本研究提示可以通過調控IL-23、IL-17的表達，達到減輕腦出血后炎癥反應的作用。

[1]楊慧,侯麗淳,王復新. 大鼠腦出血周邊組織VEGF表達及Ang-1對其變化的影響[J].黑龍江醫藥科學.2012.35(1):67-68

[2]王復新,張潔,王辰,等. 尼莫地平對早期腦出血大鼠AQP4mRNA、MMP-9mRNA表達的影響[J].黑龍江醫藥科學. 2012.35(4):1-2

[3]ParhamC,ChiricaM,TimansJ,etal.AreceptorforheterodimericcytokineIL-23iscomposedofIL-12Rbetalandanovelcytokinereceptorsubunit,IL-23R[J].JImmunol, 2002, 168(11): 5699-5708

[4]HuaY,SchallertT,KeepRF,etal.Behavioraltestsafterintracerebralhemorrhageintherat[J].Stroke,2002,33(10):2478-2484

[5]LongaEZ,WeinsteinPR,CarlsonS,etal.Reversiblemiddlecerebralarteryocclusionwithoutcraniotomyinrats[J].Stroke,1989;20(1):84-91

[6]WangDD,ZhaoYF,WangGY.IL-17potentiatesneuronalinjuryinducedbyoxygen-glucosedeprivationandaffectsneuronalIL-17receptorexpression[J] .JNeuroimmunol,2009,212 (1-2):17-25

[7]ParhamC，ChiricaM，TimansJ.AreceptorforheterodimericcytokineIL-23iscomposedofIL-12Rbetalandanovelcytokinereceptorsubunit，IL-23R[J].JImmunol，2002;168 (11):5699-5708

[8]ShichitaT，KonoedaF，YoshimuraA.RoleofTlymphocytesinischemicbraininjury[J].RinshoShinkeiqaku，2010;50( 11) :878-880

[9]ShichitaT，SuqiyamaY，OoboshiH.Pivotalroleofcerebralinterleukin-17-producinggammadeltaTcellsinthedelayedphaseofischemicbraininjury[J].NatMed，2009;15( 8) :946-950

1.佳木斯大學校級青年基金項目，編號： Sq 2013-022；2. 黑龍江省衛生廳項目，編號：2013235。

畢勝(1981～)女，黑龍江佳木斯人，博士 講師 。

李培育(1980～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主治醫師。E-mail: 21570384@qq.com。

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