某地區女性生殖道念珠菌感染的病原學調查

董 晶，楊 虹，吳 波

(北京大學深圳醫院:1.檢驗科；2.皮膚科，廣東深圳 518036)

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·論 著·

某地區女性生殖道念珠菌感染的病原學調查

董 晶1，楊 虹1，吳 波2△

(北京大學深圳醫院:1.檢驗科；2.皮膚科，廣東深圳 518036)

目的 探討該地區女性生殖道念珠菌(VVC)感染的病原學分析。方法 對2013年5月至2014年4月該院體檢女性的陰道分泌物標本進行KOH懸滴法檢測，復診時進行真菌培養檢查的標本，使用沙保羅培養基分離菌株并鑒定菌種，將分離的白色念珠菌做藥物敏感試驗。結果 15 199例標本共檢出真菌陽性標本926例。不同年齡組間和不同季節間比較，差異均有統計學意義(χ2=45.714，P<0.001；χ2=13.784，P=0.003)，老年組患者和冬季陽性率較低。286例真菌標本培養出念珠菌197例，其中白色念珠菌78.17%(154/197)，光滑念珠菌10.15%(20/197)，熱帶念珠菌6.09%(12/197)，近平滑念珠菌3.05%(6/197)，克柔念珠菌2.03%(4/197)，釀酒酵母菌0.51%(1/197)。白色念珠菌對制霉菌素敏感率為100.0%，5-氟胞嘧啶敏感率94.2%，氟康唑敏感率94.8%，咪康唑敏感率75.3%，酮康唑敏感率85.1%，伊曲康唑敏感率77.9%。結論 生殖道念珠菌感染主要是育齡女性，且菌種分布差異無統計學意義。

念珠菌； 外陰陰道念珠菌病； 藥敏試驗

為了解該地區女性生殖道念珠菌(VVC)感染情況，現對該院體檢女性生殖道分泌物進行KOH懸滴法鏡檢，體檢后1周內來復診的患者，對其分泌物標本中的念珠菌進行菌種鑒定，并對白色念珠菌進行藥物敏感試驗,以探討VCC感染狀況，為臨床治療提供實驗室數據。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年5月至2014年4月該院體檢女性的陰道分泌物標本15 199例，年齡18～72歲，平均年齡(33.4±12.6)歲。

1.2 標本采集及鏡檢 采用一次性無菌陰道窺器暴露宮頸，無菌棉拭子蘸取后穹窿分泌物置于1 mL無菌生理鹽水試管中，將標本均勻涂于玻片上，加1～2滴10%KOH溶液，于顯微鏡下檢查真菌孢子或假菌絲。

1.3 培養與鑒定 通過該院醫學檢驗網絡系統，調查體檢后1周內來門診就診的體檢者臨床資料，臨床醫師要求真菌培養檢查者，使用無菌棉拭子蘸取其后穹窿分泌物接種于沙保羅培養基，30 ℃恒溫箱培養24～72 h，觀察菌落生長情況，可疑菌落革蘭染色鏡檢，陽性標本挑取生長良好的菌落轉種于科瑪嘉顯色培養基，35 ℃恒溫箱培養24～48 h。綠色為白色假絲酵母菌，藍色為熱帶念珠菌，應用法國梅里埃公司生產的API-20C AUX酵母樣真菌鑒定反應試劑條鑒定,嚴格按照操作說明書并判讀鑒定結果。

1.4 藥敏試驗 挑取經沙保羅培養基次代培養的新鮮白色念珠菌菌落置于無菌生理鹽水中制備成0.5麥氏單位的菌懸液，再用生理鹽水對倍稀釋后以無菌棉簽蘸取菌懸液均勻涂布于真菌藥敏平板培養基(廣州迪景微生物科技有限公司)，室溫靜置3～5 min，用無菌鑷子將Rosco紙片貼于培養基表面，保持紙片間間距大于24 mm。將培養基放入35 ℃恒溫箱培養18～24 h后測量抑菌環直徑，根據制造商說明書判定并記錄藥敏結果。

1.5 統計學處理 所有數據均采用SPSS 17.0統計軟件進行分析，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同年齡組標本真菌陽性率比較 15 199例標本中926例檢出真菌孢子或假菌絲，陽性率6.09%。中年組與老年組陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=45.714，P<0.001)，但青年組與中年組陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.033，P=0.855)，老年組陽性率明顯下降。見表1。

表1 3組患者真菌感染結果比較

2.2 不同季節真菌陽性率結果比較 根據平均氣溫劃分春夏秋冬4季(2～4月為春季，5～9月為夏季，10～11月為秋季，12～1月為冬季)。按季節對真菌陽性標本進行統計分析，結果顯示，春夏秋3個季節比較，差異無統計學意義(χ2=5.683，P=0.058)，冬季與春夏秋3個季節比較，差異有統計學意義(χ2=13.784，P=0.003)。見表2。

表2 不同季節真菌陽性率結果比較

表3 197株念珠菌菌種鑒定結果比較(n)

2.3 念珠菌的檢出及鑒定結果 分離培養出念珠菌197株，陽性標本中未發現多種念珠菌感染。白色念珠菌154例(78.17%)，光滑念珠菌20株(10.15%)，熱帶念珠菌12株(6.09%)，近平滑念珠菌6株(3.05%)，克柔念珠菌4株(2.03%)，釀酒酵母菌1株(0.51%)。真菌陽性組與陰性組比較，差異無統計學意義(χ2=7.569，P=0.182)。見表3。

2.4 白色念珠菌藥敏試驗結果 藥敏試驗提示白色念珠菌對臨床常用的幾種抗真菌藥物有較好的敏感性，制霉菌素敏感率為100.0%，5-氟胞嘧啶94.2%，氟康唑94.8%，咪康唑75.3%，酮康唑85.1%，伊曲康唑77.9%。見表4。

表4 154株白色念珠菌藥敏試驗結果比較[n(%)]

3 討 論

念珠菌廣泛存在于自然界，至少75%的女性在一生中都發生過生殖道念珠菌感染[1]。以往臨床根據患者有無臨床癥狀將女性念珠菌生殖道感染按念珠菌性陰道炎或念珠菌攜帶者分類，近年來這種分類及命名方式已被外陰陰道念珠菌病(VVC)所取代[2]。念珠菌的逆行性感染導致妊娠女性發生胎膜早破、早產、新生兒鵝口瘡、產褥感染。有研究表明,感染念珠菌的女性進行檢查和治療,能夠減少早產兒和新生兒念珠菌感染的發生[3-4]。由于生殖道內雌激素及糖原水平上升，有60%～90%的帶菌孕婦會發展成有癥狀的VVC，故研究普通人群念珠菌攜帶者具有一定意義。但婦科門診一般為典型癥狀的陰道炎患者，念珠菌攜帶者比例相對較低。對體檢人群標本的實驗統計結果應更符合普通人群念珠菌感染的統計學資料。本研究對15 199例體檢人群標本進行實驗統計，顯微鏡檢出率為6.09%，與陳春偉[5]報道的11.82%，丁勝利等[6]的15.24%均有差異，可能與取樣人群及實驗操作的差異有關。本組收集門診就診真菌培養資料，將標本分成陽性、陰性2組進行比較，差異無統計學意義(P=0.182)，菌種分布與其他研究類似，以白色念珠菌為主[7-8]。隨著抗真菌藥物的廣泛應用，白色念珠菌耐藥率有增多趨勢[9]。本研究對白色念珠菌進行藥敏試驗，顯示其對制霉菌素、5-氟胞嘧啶、氟康唑敏感性較高，均為94.0%以上，對咪康唑、伊曲康唑、酮康唑敏感率稍低，分別為75.3%、77.9%、85.1%。本實驗結果都明顯高于黎小東等[8]的研究，可能與標本來源有關。Rathod等[10]分析大量關于VVC文獻后認為，不少文獻缺乏足夠的實驗數據，而是引用“經驗性”的數據，VVC的調查應建立在對足量樣本科學性的實驗統計基礎上。本組實驗使用了較多樣本進行數據統計，但由于體檢者在院停留時間短，取材少，未進行真菌培養；對于門診患者就診成本及時間考慮，臨床醫師也只會對部分癥狀患者進行真菌培養檢查，不是所有確診或疑似VVC都會進行真菌培養鑒定，所以目前獲得的實驗數據還不足以令人滿意。下一步的研究將考慮規范及優化實驗流程以獲取更多且可信的數據。

本組各年齡段患者，18～35歲真菌陽性率最高(6.56%)，其次是36～50歲(6.47%)，50歲以上感染率明顯減少(2.21%)。考慮為青年組及中年組處于婚育期，雌激素分泌、性生活、生育均為高峰，而老年女性處于絕經期，雌激素水平明顯下降。該地區靠近熱帶，夏季月份較北方長，夏秋交界不明顯，冬季陽性率較夏秋兩季低，可能與冬季氣溫較低有關。春季陽性率較夏秋兩季，差異無統計學意義(P>0.05)。

國外研究表明，很多患者只是通過臨床癥狀或既往病史被診斷為VVC，并無實驗室依據。由于不同病因引起的陰道炎癥狀相似，所以這種診斷的可靠性值得懷疑，而不同病因的陰道炎治療方法有所不同，故實驗室的診斷數據非常必要[2]。KOH懸滴法是一種快速、有效的實驗方法，但本組鏡下檢出率為6.09%，相對于普通人群(20%～30%)的感染率[11]，明顯偏低，相當部分的感染標本鏡下未被檢出，并且197例癥狀典型的標本中，也有99例標本通過KOH懸滴法鏡檢并未發現真菌孢子或菌絲。故本組認為，真菌培養配合KOH懸滴法鏡檢能降低念珠菌檢測的假陰性率，對VVC的診斷具有臨床意義，尤其對于真菌鏡檢陰性但有VVC癥狀的患者，真菌培養及鑒定是有必要的。

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Pathogeny research of vulvovaginal candidiasis from women with physical examination in Shenzhen*

DONGJing1,YANGHong1,WUBo2△

(1.DepartmentofLaborartory；2.DepartmentofDermatologis,ShenzhenHospital,PekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518036,China)

Objective To investigate the pathogenic information of genital candida infections in women lived in Shenzhen.Methods KOH smear was used to examine vaginal secretions from women with physical examination in PKU Shenzhen hospital from May 2013 to April 2014.When these women subsequent went to our hospital for secretion fungal culture,Sabouraud medium was used to isolate candida strains,which would be identified by using CHROMagar chromogenic medium and API-20C AUX (bioMerieux France).Drug sensitivity tests were made for isolated Candida albicans.Results Total 926 fungal postive samples were detected by microscopic examination from 15 199 samples.There was significant difference in fungal postive rates among different age groups (χ2=45.714,P<0.001) or different seasons (χ2=13.784,P=0.003).the postive rates of the old group were lower.For seasons,lower rate was found in winter.Total 197 strains of candida species were isolated from 286 samples,of which C.albicans was the most frequently species(78.17%,154/197),followed by C.glabrata(10.15%,20/197),C.tropicalis(6.09%,12/197),C.Parapsilosis (3.05%,6/197),C.krusei (2.03%,4/197),Saccharomyces cerevisiae (0.51%,1/197).All the isolates of Candida albicans were susceptible to nystatin．94.2% to 5-flurocytosine,94.8% to fluconazole,75.3% to miconazole,85.1%to ketoconazole，and 77.9% to itraconazole.Conclusion Genital Candida infections mainly occur in women of childbearing age.As for candida species composition,there is no statistical significance between the group of fungal postive samples and the group of negative samples by microscopic examination from.

Candida; vulvovaginal candidiasis; susceptibility test

廣東省深圳市科技計劃資助項目(201202007)。

董晶，男，本科，主管技師，主要從事臨床醫學檢驗研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.12.017

A

1672-9455(2015)12-1702-03

2014-12-25

2015-02-15)