不同試劑參數下CA-1500血凝儀檢測血漿D-二聚體結果的可比性研究

徐正良，李亞山，李德璇，劉光彩，沈 乾

(云南省第三人民醫院/大理學院昆明附屬醫院檢驗科，昆明 650031)

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·論 著·

不同試劑參數下CA-1500血凝儀檢測血漿D-二聚體結果的可比性研究

徐正良，李亞山，李德璇△，劉光彩，沈 乾

(云南省第三人民醫院/大理學院昆明附屬醫院檢驗科，昆明 650031)

目的 比較不同試劑參數下CA-1500血凝儀檢測血漿D-二聚體(DD)結果的可比性。方法 依據美國臨床實驗室標準化委員會(CLSI)頒布的EP9-A2文件，在CA-1500血凝儀上修改DD-Innovance試劑參數，比較修改參數前后的血漿DD檢測值，評價二者的可比性。結果 以參數修改前所測DD結果為X，參數修改后所測DD結果為Y，對結果進行回歸分析，所得方程為Y=0.959 7X+0.046 5，r=0.998，修改參數前后的DD檢測結果具有可比性。結論 在保證儀器檢測質量的前提下，可以通過調整檢測系統的檢測參數，縮減試劑用量，節約分析成本。

D-二聚體； 定量檢測； 試劑參數

血漿D-二聚體(DD)是纖維蛋白原經凝血酶降解為纖維蛋白單體，然后經活化因子交聯后，再經纖溶酶水解所產生的一種特異性降解產物，是一個特異性的纖溶過程標記物。采用血漿DD定量測定對深靜脈血栓和肺栓塞的排除，彌散性血管內凝血(DIC)的診斷和溶栓療效監測是一個很好的評價指標，但是目前常用的檢測試劑為原裝進口的DD-Innovance試劑，價格比較昂貴，限制了該項目在云南地區的開展。本文從節約試劑成本的角度出發，按照美國臨床實驗室標準化委員會(CLSI)EP9-A2文件的要求[1]，比較DD-Innovance試劑參數修改前后的血漿DD檢測結果，以探索是否可以在保證儀器檢測結果的前提下，通過調整檢測系統的檢測參數，減少試劑用量，實現節約試劑成本的目的。

1 資料與方法

1.1 一般資料 每日收集本院住院患者枸櫞酸鈉抗凝(1∶9)血標本8份，連續收集5 d共40例，其中男24例，女16例，平均56.7歲。標本要求抗凝比例符合要求(標本量不少于2.7 mL或多于3.3 mL),盡量避免標本溶血、脂血和黃疸。標本采集后盡快離心，并在4 h內測試完畢[2]。

1.2 儀器與試劑 儀器為日本希森美康生產的CA-1500血凝儀。血漿DD檢測試劑為德國西門子醫療診斷公司生產的DD-Innovance試劑，包括：乳膠試劑4.0 mL×6瓶/盒；稀釋液5.0 mL×6瓶/盒；緩沖液5.0 mL×6瓶/盒；封閉液2.6 mL×6瓶/盒。質控物和校準品均為檢測試劑原裝配套。

1.3 方法

1.3.1 試驗前的準備 為保證結果的準確性和可重復性，要求室溫在18～24 ℃[2]，濕度低于80%。試驗前對CA-1500血凝儀進行日常維護保養。

1.3.2 未修改參數前血漿DD定量檢測 按照試劑說明書設置DD檢測的各項試劑參數：乳膠試劑56 μL，稀釋液32 μL，緩沖液60 μL，封閉液24 μL，標本用量16 μL。設置好試劑及標本用量參數后，按照要求進行定標和質控，然后選取8份不同DD濃度水平的患者血漿按照CA-1500血凝儀操作流程分別按1～8和8～1的順序各測定1次。按照上述操作持續檢測5 d，共測試40例標本。如果按照上述試劑說明書的用量操作則理論上每盒試劑可以做426次測試。

1.3.3 修改參數后血漿DD定量檢測 在CA-1500血凝儀上把各試劑用量設為:乳膠試劑48 μL，稀釋液27 μL，緩沖液53 μL，封閉液21 μL，標本用量為14 μL。設置完試劑及標本用量后，按照1.3.2標本處理要求同樣測試上述40例標本。如果按照修改參數后的試劑用量操作則理論上每盒試劑可以做500次測試。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件對數據進行處理，以參數修改前所測結果為X，參數修改后所測結果為Y進行相關性分析和回歸分析，r≥0.975或r2≥0.95則認為Y的取值范圍合適，相關性較好，數據滿足臨床要求，則說明Y值是可接受的。另外采用配對t檢驗分析截距a與0是否存在統計學差異，如無統計學意義差異，且斜率b在1±0.05范圍內，則說明在某一定濃度范圍內二者是呈線性關系的。

2 結 果

以參數修改前所測DD結果為X，參數修改后所測結果為Y，回歸方程為：Y=0.959 7X+0.046 5，r=0.998，見圖1。r>0.975，截距a=0.046 5，經配對t檢驗，截距a與0差異無統計學意義(t=0.149，P>0.05)，斜率b=0.959 7，在1±0.05范圍內。說明在線性范圍0～10 mg/L內，修改試劑參數前后，CA-1500血凝儀檢測DD的結果具有可比性。

圖1 修改參數前后DD檢測結果的相關性

3 討 論

早在1972年Gaffney首先提出了DD檢測。1983年Rylatt等首先報道了用單克隆抗體DD-386/22檢測DD。20世紀90年代，酶聯免疫吸附試驗、乳膠增強型免疫分析法等開始逐步應用于DD檢測。直到20世紀90年代末，免疫比濁法在血凝儀上才實現了自動化，從而實現了快速、單樣本、定量、高敏感性的DD檢測。但目前尚無統一的DD檢測國際標準，不同廠家生產的檢測試劑所含的單克隆抗體不同，所檢測的DD片段也不同。目前市售的DD檢測試劑涉及20多種單克隆抗體，檢測方法有30多種，尚無統一的國際標準品[5]。由于不同品牌檢測試劑中的單克隆抗體是針對不同相對分子質量的纖維蛋白降解片段制備的，因此不同試劑間DD檢測結果差異顯著，可比性較低。本實驗室所用的試劑為DD-Innovance試劑，儀器為CA-1500血凝分析儀，本研究中的試劑參數僅限用于CA-1500血凝分析儀上設置的DD線性范圍內(0～10 mg/L)使用，對于超出線性范圍時，兩種參數下DD檢測結果是否具有相關性，還有待進一步驗證。

[1]CLSI.EP9-A2 Method comparison and bias estimation using patient samples;Approved guideline[S].Wayne,PA:CLSI,2002.

[2]彭明婷,李臣賓.出凝血檢驗衛生行業標準與質量改進[J].檢驗醫學,2015,30(4):308-310.

[3]徐正良,李德璇,劉光彩,等.用SysmexCA-7000 血凝儀測量血漿 D-二聚體全量法與減量法的比較[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(3):344-346.

[4]Haas FJLM,Schutgens REG,Biesma DH.An age-adapted approach for the use of D-dimers in the exclusion of deep venous thrombosis[J].Am J Hematol,2009,84(8):488-491.

[5]門劍龍,任靜.D-二聚體臨床應用及標準化分析進展[J].中華檢驗醫學雜志,2010,33(8):793-797.

Study on comparability of results of Sysmex CA-1500 coagulation analyzer for detecting plasma D-dimer with different reagent parameters

XUZheng-liang,LIYa-shan,LIDe-xuan△,LIUGuang-cai,SHENQian

(DepartmentofClinicalLaboratory,YunnanProvincialThirdPeople′sHospital/AffiliatedKunmingHospitalofDaliUniversity,Kunming,Yunnan650031,China)

Objective To compare the comparability of the Sysmex CA-1500 coagulation analyzer for detecting plasma D-dimer(DD) under different reagent parameters.Methods According to the EP9-A2 file issued by CLSI,the DD-Innovance reagent parameters were modified in the Sysmex CA-1500 blood coagulation analyzer.The detection values were compared between before and after modification for evaluating their comparability.Results With the DD detection results before the parameter modification asXand which after the parameter modification asY,the detection results were performed the regression analysis,the obtained equation wasY=0.959 7X+0.046 5,r=0.998,showing that the DD detection results had the comparability between before and after the parameter modification.Conclusion Under the premise of ensuring the instrument detection quality,adjusting the detection parameter of the detection system can reduce the reagent consumption and save the analytical costs.

D-dimer; quantitative detection; reagent parameters

徐正良，男，本科，主管技師，主要從事臨床檢驗研究。

△通訊作者，E-mail:147347278@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.019

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1672-9455(2015)19-2861-02

2015-03-20

2015-06-25)