趨化因子受體CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中的表達及與臨床預后的相關性

張春俠,王 妍,章來長,張曉元,趙胤銘

(空軍航空醫(yī)學研究所附屬醫(yī)院,北京 100089)

趨化因子受體CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中的表達及與臨床預后的相關性

張春俠,王 妍,章來長,張曉元,趙胤銘

(空軍航空醫(yī)學研究所附屬醫(yī)院,北京 100089)

目的 研究趨化因子受體CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中的表達及與臨床預后的相關性。方法 選取58例三陰性乳腺癌患者及58例乳腺增生患者，采用免疫組化技術檢測標本中CCR4和CCR7的表達情況，并分析其與患者的臨床病理之間的關系。結果 三陰性乳腺癌患者中CCR4和CCR7高表達均顯著多于乳腺增生患者(P均<0.05)，且CCR4和CCR7兩者的表達呈顯著正相關(r=0.614，P<0.05)。CCR4表達陽性者總生存率顯著低于CCR4蛋白表達陰性者(P<0.05)。CCR7表達陽性者總生存率低于CCR7蛋白表達陰性者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，CCR4的表達與腫瘤分期、腋窩淋巴結轉移、遠處轉移有關(P<0.05),CCR7的表達與腋窩淋巴結轉移、淋巴結轉移個數有關(P<0.05)。CCR4與CCR7高表達患者內臟轉移與骨轉移率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論 趨化因子受體CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中呈現高表達，兩者呈負相關關系，可應用于臨床診治三陰性乳腺癌患者和判斷預后。

CCR4；CCR7；三陰性乳腺癌

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，已成為威脅婦女健康的主要疾病[1]。根據基因學技術乳腺癌可分為正常乳腺樣型、Her-2過表達型、基底樣癌、管腔型和管腔型B 5個亞型，三陰性乳腺癌是指雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體均陰性的一種特殊類型乳腺癌，其分化程度低，惡性程度高，復發(fā)轉移常見，預后差，內分泌治療效果欠佳，無有效的靶向治療藥物[2-3]。研究發(fā)現，乳腺癌細胞株CCR4可加強對CCL17的趨化反應，增強微血管密度并促進肺轉移；CCR7的表達和臨床分期及乳腺癌腋窩淋巴結轉移相關[4]。所以，研究趨化因子受體CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中的表達及與臨床預后顯得非常重要。

1 臨床資料

1.1一般資料 按知情同意原則選取2008年6月—2009年12月于我院就診的經病理檢查確診為三陰性乳腺癌患者的乳腺癌組織標本58例，患者在就診前均未行放化療治療，均無合并遠處臟器轉移的原發(fā)性乳腺癌，年齡36～78(57.1±11.2)歲。腫瘤TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期38例，Ⅲ期11例；乳頭狀癌2例，導管癌50例，分泌性癌2例，小葉癌1例，特殊類型癌3例。另取同期乳腺增生患者的正常乳腺組織標本58例，患者年齡31～48(41.2±7.2)歲。

1.2免疫組化方法 取下標本后石蠟包埋連續(xù)性切片，切片厚2.5 μm，常規(guī)脫蠟、水化。恒溫65 ℃烤箱過夜，堿性修復組織抗原，自然冷卻至室溫。用PBS洗滌之后，滴加3%過氧化氫，室溫孵育10 min。以PBS液充分浸洗后，滴加一抗，在室溫下孵育1 h。然后以PBS液充分浸洗后，滴加試劑1，室溫孵育10 min，PBS液充分浸洗后，滴加試劑2，室溫孵育10 min，PBS液充分浸洗。HE染色，滴加顯色劑，顯色5 min，脫水、透明、封片保存。抗體及免疫組化試劑盒購于北京中杉金橋生物技術公司。

1.3觀察項目 在400倍光鏡下讀片交觀察記錄結果，每份切片取10個高倍鏡視野采取雙人雙盲計數，記錄切片中CCR4和CCR7蛋白陽性表達及其染色強度。兩者蛋白陽性表達判定位置為癌細胞或正常腺上皮細胞胞質。按染色強度分4等級： 0分為無色，1分為淡黃色，2分為黃色，3分為棕黃色；再按陽性細胞所占的百分比評分： 0分為陽性細胞 <5%，1分為5%～<25%，2分為25%～<50%，3分為50%～<75%，4分為≥75%。低表達為染色強度與陽性細胞百分比的分值乘積<6分，高表達為≥6分。隨訪時間從手術當天算起截止時間為2013年12月31日，手術當天至第1次轉移或復發(fā)的時間為無病生存時間，手術當天至患者隨訪截止或死亡的時間為總生存時間。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件進行數據錄入及數據分析。2組及多組計數資料表達差異、臨床病理特征及轉移情況的比較采用卡方檢驗或Fisher精確檢驗，CCR4和CCR7的相關性采用Spearman相關分析，生存率的比較采用log-rank檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.12組CCR4和CCR7表達情況 CCR4主要定位于乳腺癌組織細胞質中，有部分細胞核著色，呈棕黃色細顆粒狀。三陰性乳腺癌組織中，有20例呈現CCR4高表達，有25例呈現CCR7高表達，CCR4、CCR7主要定位于乳腺癌組織細胞質中，呈棕黃色細顆粒狀。三陰性乳腺癌組織CCR4、CCR7表達與正常乳腺組織比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組CCR4和CCR7表達情況 例

2.2不同CCR4和CCR7表達三陰性乳腺癌患者生存狀況比較 CCR4表達陽性者無病生存時間為12個月，陰性者30個月，2者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；CCR4表達陽性者總生存時間為26個月，陰性者50個月，2者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CCR7表達陽性者無病生存時間為15個月，陰性者29個月，2者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；CCR7表達陽性者總生存時間為35個月，陰性者50個月，2者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.3CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中的表達相關性 乳腺癌組織中CCR4表達陽性的CCR7 表達陽性率(85.0%，17/20)高于在乳腺癌組織 CCR4 表達陰性的CCR7的表達陽性率(21.1%，8/38)。在三陰性乳腺癌組織中，CCR4和CCR7的表達呈顯著正相關，相關系數r=0.614(P<0.001)。見表2。

表2 CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中的表達相關性 例

注：r=-0.717,P<0.001。

2.4三陰性乳腺癌組織中CCR4與CCR7表達與臨床病理特征的關系 CCR4的表達與腫瘤分期、腋窩淋巴結轉移、遠處轉移有關，CCR7的表達與腋窩淋巴結轉移、淋巴結轉移個數有關，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。見表3。

表3 CCR4與CCRT表達與乳腺癌患者臨床病理指標的關系 例

2.5三陰性乳腺癌組織中CCR4與CCR7表達與遠處轉移的關系 本組發(fā)生腫瘤復發(fā)或轉移30例，其中肝轉移5例，肺轉移10 例，骨轉移6 例，腦轉移10例，胸壁轉移共3例，遠處、縱隔淋巴結轉移4例；2個或者2個以上器官轉移5例，因腫瘤而死亡患者21例。CCR4與CCR7高表達患者內臟轉移率分別為35%(7/20)和32%(8/25)，骨轉移率分別為15%(3/20)和12%(3/25)。經過Fisher檢驗，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討 論

乳腺癌是威脅女性生命健康的最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，在婦女僅次于子宮癌，已成為威脅婦女健康的主要病因[5-7]。其主要治療方法包括放化療、手術治療、靶向治療及激素治療等。三陰性乳腺癌是惡性程度高、分化程度低的一種高危類型，由于靶向治療及內分泌治療療效效果不明顯，患者預后差，已被臨床熱門關注[8-10]。趨化因子作為促炎細胞因子，是能使細胞發(fā)生趨化作用的細胞因子總稱，可參與細胞生長、分化、凋亡、損傷、腫瘤生長轉移等多種病理和生理的過程。CCR4是CC趨化因子受體CCR家族中的一員，主要表達于多種淋巴細胞。Li等[11]研究表明，CCR4在乳腺癌中呈高表達且CCR4的高表達與肺、骨等的轉移相關。CCR7的配體有2個，包括CCL19和CCL21，主要在淋巴結中特異性高表達，生理狀況下CCR7及其配體介導淋巴細胞向淋巴結遷移與歸巢[12]。Mashino等[13]研究發(fā)現，CCR7在大約2/3的胃癌組織呈高表達，且CCR7的高表達與胃癌淋巴結轉移密切相關，因此筆者推斷CCR7在乳腺癌發(fā)病中可能也參與了乳腺癌細胞淋巴結轉移的過程。

本研究結果顯示，CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中均呈現高表達，差異有統(tǒng)計學意義。CCR4及CCR7表達陽性者總生存率明顯低于表達陰性者。乳腺癌組織中CCR4表達陽性患者CCR7表達陽性率明顯高于表達陰性者；在三陰性乳腺癌組織中，CCR4和CCR7的表達呈正相關關系。CCR4的表達與腫瘤分期、腋窩淋巴結轉移、遠處轉移有關，CCR7的表達與腋窩淋巴結轉移、淋巴結轉移個數有關，差異均有統(tǒng)計學意義。即使內臟轉移患者比骨轉移患者多，但差異無統(tǒng)計學意義，這有待進一步研究及臨床驗證。

作為小分子分泌性細胞因子趨化因子，跟特異性受體聯(lián)合，共同導致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移[14-15]。CC族趨化因子受體CCR4 和 CCR7，能否作為抗腫瘤轉移治療的新靶點、與其他細胞因子之間的相互作用、有無淋巴道、信號通路的發(fā)生傳導、器官特異性轉移及機制等問題有待進一步研究。在不久的將來，隨著對趨化因子及其受體網絡的研究不斷深入，相信基于趨化因子-受體軸的特異性三陰性乳腺癌治療新途徑將有望被發(fā)現。

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