野生和組培苗紅大戟藥材HPLC圖譜初步比較

黃浩　王碩　胡東南

摘 要：為了比較野生苗和組培苗紅大戟藥材的化學成分，以2 年生紅大戟野生和組培植株的根為材料，進行HPLC圖譜初步分析。結果表明，野生苗和組培苗藥材在化學成分的類型、含量上均有明顯差異；種植生境和種苗來源可能是化學成分產生差異的主要原因。

關鍵詞：紅大戟 HPLC 指紋圖譜 化學成分

1 材料與方法

1.1 材料和儀器設備

紅大戟野生藥材采集于廣西寧明縣，生境為山坡灌木林，土質為疏松壤土。組培苗的原始材料亦來自廣西寧明縣，按黃浩等方法[1-3]，經外植體無菌處理、擴繁、生根和移栽后，種植于廣西藥用植物園科研基地，種植地透光率為60 %的松樹林下，土質為疏松壤土。所用于實驗的藥材均為2 年生植株自然干燥的塊根。

美國VARIAN公司210型高效色譜儀，迪馬ODS C18色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5μm），KQ-5200型數控超聲儀 （昆山市超聲儀器有限公司），電子分析天平（CP2250D，Sartorius），甲醇、乙腈為色譜純（美國Fisher公司），水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

流動相為乙腈A-0.1 %磷酸溶液B（梯度變化0～70 min，A 8 %-70 % ），流速0.65 mL/min，檢測波長210 nm，進樣量10 μL，柱溫34℃。

1.2.2 樣品制備

將藥材打成粉，取粉末2.00 g，置于100 mL具磨口塞的錐形瓶中，精密加入80 %的甲醇溶液25.00 mL，搖勻，稱定重量。超聲處理1 h，放冷，再稱定重量，并用甲醇補足減失的重量，搖勻，吸取一定量，以0.45 μm的微孔濾膜過濾備測。

1.2.3 方法學考察

精密度試驗 取組培藥材制備的供試品溶液，連續(xù)進樣5次，結果表明，色譜圖中各色譜峰的相對保留時間的RSD小于1 %；相對峰面積的RSD小于1.5 %，符合指紋圖譜要求，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗 取組培藥材制備的供試品溶液，分別在0、1、2、6、12、24 h進樣測定，結果表明，各主要色譜峰的相對保留時間的RSD小于2 %，相對峰面積的RSD小于1 %，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

重復性試驗 精密稱取組培藥材粉末2.00 g，共6份，照供試品溶液制備方法制備，進樣檢測，結果發(fā)現(xiàn)平行樣品間各色譜峰的相對保留時間的RSD小于1.5 %；相對峰面積的RSD小于1.5 %，表明方法的重復性良好。

2 結果與分析

HPLC圖譜結果見圖1。從紅大戟組培和野生的HPLC圖譜中可看出，組培苗和野生苗藥材間的圖譜存在明顯差別，說明其化學成分存在很大差別。在36.65 min時，組培苗藥材的HPLC圖譜中有一峰面積很大、但在野生藥材HPLC圖譜中并不存在的一種化學成分，即野生植物中不存在此成分。該化學成分是組培過程中少量基因發(fā)生變異造成還是生長過程中生物轉化為其他成分所致，需在下一步進行深入研究。在40～70 min的區(qū)間里，組培苗藥材只有3個特征峰，而野生藥材除了有相似的特征峰外，還有另外8個明顯的特征峰，這些特征峰代表的化學成分可能是在特定的生境中生長，通過生物途徑逐漸轉化而來。從HPLC圖譜中的峰高和峰面積可看出，野生和組培苗藥材的化學成分含量也存在很大的差異。

3 結論

野生苗由種子長出的苗，為有性繁殖，在化學成分上基本能保持與兩個親本相近；組培苗是通過生物技術的方法獲得種苗，屬于無性繁殖，理論上遺傳信息和化學成分原則上應與親本完全相同，也應與親本相同，但測試的結果表現(xiàn)出與野生植株在化學成分類型和含量上均有明顯差異，是否藥材來自不同來源的種苗，抑或是誘導過程中發(fā)生變異，還是不同生境或是用于實驗的塊根生長時間偏短（2 年）導致的差異，需進一步研究。

由此可見，藥用植株的化學成分類型、含量很可能與植物的生境、種苗來源以及種植時間有一定的關系。在人工栽培藥用植物時，應盡量模仿其野生生境，滿足其在生長過程中生理和化學合成的不同需要，使藥材的化學成分、含量與野生藥材相近。試驗結果可為其他藥用植物的人工栽培，特別是通過組織培養(yǎng)育苗的人工栽培提供參考。

參考文獻

[1] 黃浩. 藥用植物紅芽大戟組織培養(yǎng)的研究[D].廣西大學，2006.

[2] 黃浩，韋鵬霄，岑秀芬，等. 紅大戟組培苗移栽試驗[J]. 廣西熱帶農業(yè)，2007（5）： 19-21.

[3] 黃浩，文學，韋瑩，等. 藥用植物紅大戟快速繁殖技術研究[J]. 北方園藝，2011（4）： 196-198.