三七乳香合劑鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究

李光民 儲(chǔ)金秀 韓淑英

中藥材三七具有散瘀止血，消腫定痛之功效。乳香有調(diào)氣活血、舒筋止痛、消腫、生肌之功能［1－4］。三七乳香合劑(SQRXC)是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，結(jié)合臨床應(yīng)用效果和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究進(jìn)展，針對(duì)創(chuàng)傷性骨折早期的主要臨床癥狀而擬定的治療創(chuàng)傷后軟組織腫脹、疼痛的中藥復(fù)方制劑。本研究對(duì)SQRXC的鎮(zhèn)痛抗炎作用進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，旨在為其臨床開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，雌雄兼有，體重(200±25)g，二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。昆明小鼠，(20±2)g，雌雄兼有，二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。合格證號(hào):SCXK＜京＞2002-0006。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 千分尺、MP-2000A型電子天平(上海第二天平儀器廠生產(chǎn))、RB-200智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司生產(chǎn))、9 mm直徑打孔器等。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥品 SQRXC，由三七和乳香兩味中藥按質(zhì)量比例加8倍量的水，煎煮3次，合并濾液，80～90℃水浴上攪拌，濃縮成膏狀，放厚玻璃板上，80℃烤箱中干燥，將干燥物碾成細(xì)粉，通過(guò)60目篩。實(shí)驗(yàn)時(shí)按需要配制成不同濃度。跌打丸，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠生產(chǎn)(批號(hào):40127597)。角叉菜膠，遼寧省藥物研究所生產(chǎn)(批號(hào):980916)。其他藥品和試劑有冰醋酸、二甲苯、0.9%氯化鈉溶液等。

1.4 方法

1.4.1 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn):(熱板法)［5－7］取(18 ～22)g 雌性昆明小白鼠80只，22℃室溫適應(yīng)2 h后進(jìn)行痛閾篩選。將小鼠放在溫度為(55.0±0.5)℃的熱板儀上，記錄小鼠自投入熱板儀至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間作為小鼠的痛閾值，測(cè)定2次(間隔30 min)，取均值作為給藥前痛閾值。2次中有1次痛閾值＜5 s或＞30 s者均剔除。挑選出的合格小鼠50只，隨機(jī)分為5組:①空白對(duì)照組，灌胃0.9%氯化鈉溶液，容量為0.1 ml·10－1·g－1體重;②陽(yáng)性對(duì)照藥組，灌胃跌打丸，容量為0.1 ml·10－1·g－1體重，給藥量為1.0 g/kg，相當(dāng)于人臨床擬用量的10倍(人按60 kg);③SQRXC低劑量組，灌胃SQRXC，容量為0.1 ml·10－1·g－1體重，給藥量為 50 mg/kg，相當(dāng)于含生藥量 0.5 g/kg，相當(dāng)于人臨床擬用量的 5倍;④SQRXC中 劑 量 組，灌 胃 SQRXC，容 量 為0.1 m·10－1·g－1體重，給藥量為100 mg/kg，相當(dāng)于含生藥量1.0 g/kg，相當(dāng)于人臨床擬用量的10倍;⑤SQRXC高 劑 量 組，灌 胃 SQRXC，容 量 為0.1 ml·10－1·g－1體重，給藥量為 200 mg/kg，相當(dāng)于含生藥量2.0 g/kg，相當(dāng)于人臨床擬用量的20倍。每組10只小鼠。采用以上給藥途徑和給藥劑量分別給藥2次，間隔 2 h，于末次給藥后 30、60、90、120 min，同前法各再測(cè)定一次痛閾值。

1.4.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)(扭體法)［5－7］:取小鼠50 只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組(同上)。按上述給藥劑量和給藥途徑給藥1次/d，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥后30 min，各組小鼠腹腔注射6 g/L冰醋酸0.2 ml/只，觀察20 min內(nèi)小鼠扭體出現(xiàn)的潛伏期、扭體反應(yīng)動(dòng)物數(shù)及扭體次數(shù)，并計(jì)算鎮(zhèn)痛百分率。鎮(zhèn)痛百分率(%)=(空白對(duì)照組小鼠扭體次數(shù)－給藥組小鼠扭體次數(shù))/空白對(duì)照組小鼠扭體次數(shù)×100%。

1.4.3 抗炎實(shí)驗(yàn)(二甲苯致小鼠耳腫脹)［6，7］:取體重17～22 g小鼠50只，雌雄兼有，隨機(jī)分為5組(同上)，每組10只。按上述給藥劑量和給藥途徑給藥1次/d，連續(xù)給藥3 d，末次給藥后30 min，所有小鼠右耳涂二甲苯0.05 ml/只，左耳作對(duì)照。2 h后小鼠脫臼處死，用直徑9 mm打孔器在左右耳相同部位打下圓耳片，稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。腫脹抑制率(%)=(空白對(duì)照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/空白對(duì)照組平均腫脹度×100%。

1.4.4 抗炎實(shí)驗(yàn)(角叉菜膠致大鼠足腫脹)［6，7］:取體重175～225 g大鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組(同上)，每組10只。上述各組大鼠，每天灌胃1次，連續(xù)3 d，末次給藥后60 min，用千分尺測(cè)量左后肢踝關(guān)節(jié)下(腳掌)厚度。然后把配制好的角叉菜膠(10 g/L)0.1 ml注入足掌，于 5、30、60、120、240、360 min 后分別測(cè)量腳掌厚度。腫脹度 =致炎后足掌厚度－致炎前足掌厚度，腫脹抑制率=(空白對(duì)照組足掌平均腫脹度－給藥組足掌平均腫脹度)/空白對(duì)照組足掌平均腫脹度×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用Graphad instat.tm統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SQRXC對(duì)熱板所致小鼠疼痛的影響 SQRXC對(duì)小鼠熱刺激所致的疼痛具有明顯抑制作用，可提高痛閾值，有明顯劑量依賴性。鎮(zhèn)痛作用出現(xiàn)的時(shí)間較陽(yáng)性對(duì)照組晚，但維持時(shí)間較陽(yáng)性對(duì)照組長(zhǎng)。中、高劑量組在給藥后60 min時(shí)作用即具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，90 min達(dá)高峰，到180 min但仍有明顯鎮(zhèn)痛作用。見(jiàn)圖1。

圖1 SQRXC對(duì)熱板所致小鼠疼痛的影響(n=10，±s)

2.2 SQRXC對(duì)醋酸所致小鼠腹痛的影響 中、高劑量的SQRXC能明顯延長(zhǎng)疼痛潛伏期，減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，與空白對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或＜0.01)，與陽(yáng)性對(duì)照組相近。見(jiàn)表1。

表1 SQRXC對(duì)醋酸所致小鼠腹痛的影響n=10，±s

表1 SQRXC對(duì)醋酸所致小鼠腹痛的影響n=10，±s

注:與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.05，#P ＜0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△P ＜0.05

組別 劑量(mg/kg)潛伏期(min) 扭體次數(shù) 鎮(zhèn)痛百分率(%)空白對(duì)照組 －5.5 ±1.8 92 ±24 －陽(yáng)性對(duì)照組 1 000 8.8 ±2.4* 48 ±12# 47.8 SQRXC低劑量組 50 7.4±2.0 78±21△ 15.2 SQRXC 中劑量組 100 8.7 ±2.1* 62 ±17# 32.6 SQRXC高劑量組 200 8.7±2.2# 50±16#45.7

2.3 SQRXC對(duì)角叉菜膠致大鼠足掌腫脹厚度影響 SQRXC中、高劑量組均能明顯抑制足掌腫脹程度(厚度)，作用可持續(xù)達(dá)6 h，尤其在1～4 h，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與陽(yáng)性對(duì)照組作用比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 SQRXC對(duì)角叉菜膠致大鼠足掌腫脹厚度影響(千分尺法) n=10，%

2.4 SQRXC對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 SQRXC對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹有明顯抑制作用，隨著劑量的增加，其抑制率也明顯升高，尤其是中、高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表3。

表3 SQRXC對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響n=10，±s

表3 SQRXC對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響n=10，±s

注:與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.01

組別 劑量(mg/kg)腫脹度(mg)抑制率(%)空白對(duì)照組 －10.2 ±3.2 －陽(yáng)性對(duì)照組 1 000 5.4 ±1.5* 47.1 SQRXC 低劑量組 50 7.6 ±2.1 25.5 SQRXC 中劑量組 100 6.8 ±1.8* 33.3 SQRXC 高劑量組 200 5.0 ±1.5*51.0

3 討論

創(chuàng)傷是日常生活中常見(jiàn)的臨床疾患。如今交通事故頻繁發(fā)生，地震等自然災(zāi)害也時(shí)有發(fā)生，工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大發(fā)展帶來(lái)新器械的出現(xiàn)，創(chuàng)傷性骨折的現(xiàn)象越來(lái)越多，給個(gè)人、家庭和社會(huì)帶來(lái)了極大的負(fù)擔(dān)。創(chuàng)傷的形式可從皮膚的切割傷到大面積燒傷，從單純的軟組織扭傷到復(fù)雜性骨折。組織受傷后，可引起炎性反應(yīng)，常在局部出現(xiàn)疼痛、壓痛、腫脹、瘀血、畸形、活動(dòng)受限及縱向叩擊痛、異常活動(dòng)等。創(chuàng)傷性炎性有利于創(chuàng)傷修復(fù)，但炎癥反應(yīng)強(qiáng)烈或廣泛時(shí)不利于創(chuàng)傷治愈［8］。如傷后腫脹使局部組織內(nèi)張力過(guò)高，可引起血循環(huán)障礙;滲出過(guò)多可使血容量減少。疼痛也是機(jī)體對(duì)傷害性刺激作出的一種防御反應(yīng)，但它會(huì)影響患者的食欲和營(yíng)養(yǎng)攝入、造成恐懼心理、引起性格改變［9］，甚至出現(xiàn)疼痛休克。在這些情況下應(yīng)作相應(yīng)的處理。

縱觀國(guó)內(nèi)外，關(guān)于骨折的治療，各界專家提出了多種治療原則和方法，出現(xiàn)了AO、BO、CO等代表性學(xué)術(shù)思想［10，11］。已有大量文獻(xiàn)報(bào)道，中醫(yī)中藥治療骨折具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)［12－14］。骨折的中藥療法分內(nèi)治和外治［15］。內(nèi)治又分為早、中、后三期辨證施治。骨折分期辨證施治是中醫(yī)治療骨折的特色。在剛受傷時(shí)治血與理氣兼顧，常用攻下逐瘀、行氣活血、清熱涼血等法治療。損傷中期，采用和營(yíng)止痛、接骨續(xù)筋、舒筋活絡(luò)等法治療。損傷后期，常用補(bǔ)氣養(yǎng)血、補(bǔ)益肝腎法。但目前臨床上出現(xiàn)了三期治療、二期治療及一期治療的混亂局面。

從理論上分析，三七和乳香具散瘀止血、調(diào)氣活血之功效，可加快血腫內(nèi)瘀血的吸收。行氣止痛，可提高食欲，提早活動(dòng)，對(duì)骨折的愈合有積極意義［1－4］。單味藥三七和乳香各具一定抗炎和鎮(zhèn)痛等作用。本研究針對(duì)創(chuàng)傷后早期的主要臨床癥狀炎癥、腫脹和疼痛擬出SQRXC中藥復(fù)方，通過(guò)動(dòng)物模型，研究了其鎮(zhèn)痛和抗炎作用。結(jié)果表明，SQRXC可以顯著提高實(shí)驗(yàn)小鼠的熱痛閾(P＜0.05)，明顯降低小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)和扭體反應(yīng)動(dòng)物數(shù)(P＜0.05);SQRXC對(duì)角叉菜膠所致大鼠足腫脹和二甲苯所致小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用(P＜0.05或＜0.01)。研究證實(shí)了SQRXC具有消腫止痛作用，為其臨床開發(fā)應(yīng)用于創(chuàng)傷后早期治療提供了有力的依據(jù)，同時(shí)對(duì)中醫(yī)分期辨證用藥也具有指導(dǎo)作用。今后將進(jìn)一步探討SQRXC鎮(zhèn)痛抗炎作用的分子機(jī)制及藥理活性，充分闡明其藥理作用和機(jī)制。

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