人組織激肽釋放酶6在腫瘤的表達及其預期診斷價值

李 偉，李 霞，陳英劍，胡成進

人類緩激肽釋放酶基因家族（human kallikrein，KLKs）是絲氨酸蛋白酶的一個亞家族，由15個成員組成（KLK1－KLK15），編碼相應的 KLK1－KLK15 蛋白，具有胰蛋白酶或糜蛋白酶活性。KLK6編碼KLK6蛋白，存在于血清、哺乳婦女的乳汁、妊娠羊水和男性精液等多種體液中，在卵巢癌、胃癌、乳腺癌、結直腸癌等惡性腫瘤中異常表達，是KLKs中重要的腫瘤標志物之一。為了為診斷和預后提供參考，本文對其相關問題做一綜述。

1 KLKs基因特點

KLKs共同定位于染色體19q13．4，串聯排列，緊密連接，互不干擾，結構高度相似。KLKs有以下共同特征：外顯子數量和長度相似、內含子區域高度保守、翻譯起點和終點保守，30%～80%的序列同源。KLK基因在類固醇激素的轉錄調節下產生一條細胞內單鏈無活性多肽，包括一段氨基端信號肽、一段前肽和催化結構域，信號肽和前肽的裂解后激活，產生分泌的成熟絲氨酸蛋白酶［1］。

2 KLK6基因特點、表達調節和生物學功能

KLK6原稱為絲氨酸蛋白水解酶9，全長約11．0 kb，位于KLK5和KLK7之間，由7個外顯子和6個內含子組成，前兩個外顯子不翻譯，其余五個外顯子組成催化三聯體位點，內含子排列遵循Ⅰ－Ⅱ－Ⅰ－0模式。

KLK6表達的調節取決于DNA，mRNA和蛋白水平的調節，但也依賴于組織特異微環境的相互作用。這些因素和類固醇激素的調節、復制數量的改變、miRNAs、酶抑制劑等共同影響KLK6的表達，導致KLK6表達異常。在惡性腫瘤中，常見的基因組的不穩定性也可能導致基因含量的變化，影響KLK6的表達。

KLK6參與體內許多的生化過程，包括參與牙齒的發育，神經可塑性的維持，皮膚角質層的形成，腫瘤的發生、發展，參與級聯信號，激活信號轉導途徑，參與血管的生成和炎癥反應。KLK6在不同的癌癥和疾病中，RNA或蛋白質過度表達或者表達不足，是一種潛在的臨床生物標志物［2］。

3 KLK6在腫瘤的表達和應用價值

3．1 卵巢癌 Hoffman等用免疫熒光法研究發現30%的卵巢癌患者KLK6為陽性，晚期、漿液性、行滿意減滅術（殘留灶＞1 cm）的卵巢癌患者，KLK6水平升高。單因素分析顯示KLK6陽性的卵巢癌患者似乎更容易疾病惡化和死亡。多因素分析：KLK6是卵巢癌一個獨立的預后不良的指標［3］。Dimandis等用免疫分析法測定了146例原發性卵巢癌患者的KLK6濃度，當診斷特異度為90%和95%時，血清KLK6診斷的敏感度分別為52%和47%［4］。Sherbini等用ELISA方法檢測27例卵巢癌患者血清，KLK6特異性和敏感性分別為 56．8%和 64%［5］。總之，越來越多的證據表明KLK6參與腫瘤的生長和發展，并作為篩選、診斷、預測和預測的一個有用的腫瘤標志物。

3．2 胃癌 Hisashi等用實時RT－PCR檢測了胃癌患者KLK6的表達，發現胃癌組織KLK6表達明顯升高，并與淋巴轉移顯著相關，且KLK6表達升高的胃癌患者的生存率較差。另外，他們建立了一個利用小干擾RNA介導的基因沉默的KLK6穩定抑制胃癌細胞株，發現KLK6基因沉默的小干擾RNA與模擬轉染的細胞相比有效地抑制細胞增殖、S期的細胞比例和侵襲性。所以，KLK6在胃癌組織的明顯過度表達狀態可以作為一個有力的預后診斷標志物，同時也表明KLK6可以作為胃癌治療的新靶點［6］。Jin等用 PT－PCR方法檢測 KLK6 mRNA發現，胃惡性腫瘤組織KLK6的轉錄水平大約是周圍正常組織的8倍，KLK6 mRNA的表達增高，是正常組織的 3．6倍；用 Western blotting檢測 KLK6，發現惡性腫瘤組織中表現高表達；用ELISA方法檢測胃癌患者血清KLK6，其表達是正常人的1．75倍。因此推斷KLK6有可能成為胃癌診斷的生物學指標［7］。3．3 乳腺癌 最初，Pampalakis等用半定量 RTPCR方法發現KLK6在正常和乳腺癌細胞系中差異表達，用ELISA方法檢測乳腺癌細胞培養上清液中KLK6蛋白濃度，發現KLK6在乳腺癌細胞中表達升高［8］。國內學者用免疫組化和RT－PCR的方法檢測88例原發性乳腺癌患者組織KLK6蛋白和mRNA的表達，表明KLK6在原發性乳腺癌中陽性表達率為78．4%，并與腫瘤組織的臨床病理學特征相關；發生淋巴結轉移及ER陽性的乳腺癌組織中KLK6蛋白的陽性表達率顯著低于未轉移組及ER陰性組。KLK6 mRNA在原發性乳腺癌組織中的表達水平明顯高于正常乳腺組織；但有淋巴結轉移的癌組織中，KLK6 mRNA的表達水平明顯低于未轉移組［9］。因此，KLK6蛋白及其mRNA的異常表達，可能與原發性乳腺癌的發生、浸潤、轉移有關，可能成為原發性乳腺癌臨床診斷的標志物。

3．4 結直腸癌 Kim等用RT－PCR、免疫組化分析表明KLK6 mRNA在結腸癌組織中顯著上調；KLK6在結腸腺癌明顯表達而在正常腸黏膜或癌前病變不典型增生不表達；患者血清中KLK6與非癌細胞相比分泌增加。通過臨床病理與免疫組化分析143例結腸癌患者KLK6的表達，表明KLK6表達與Dukes分期相關，KLK6表達升高與短的生存期和無復發生存期明顯相關。因為，KLK6是結腸癌預后不良的指標，可以作為結腸癌的潛在標志物和治療靶點［10］。有研究指出用實時定量RT－PCR檢測結直腸癌KLK6表達，顯示KLK6在結直腸癌中過度表達，且KLK6表達陽性率為58．2%，KLK6表達與腫瘤分級、淋巴結轉移和腫瘤TNM分期呈正相關。單因素分析顯示KLK6表達與無疾病生存期（DFS）和整體生存期 （OS）顯著相關；多因素分析顯示KLK6表達陽性的DFS和OS明顯縮短，并且KLK6是一個獨立的預后不良的預測因素；K－M生存曲線表明KLK6陽性的結直腸癌患者DFS和OS顯著降低［11］。總之，KLK6是結直腸癌疾病的一個獨立預后不良的標志物。

3．5 肺癌 有研究指出用免疫過氧化物酶標記法研究KLK6在肺腺癌、鱗狀細胞癌、小細胞癌和類癌腫瘤的表達，未發現KLK6在腺癌細胞細胞質表達，而在鱗狀細胞癌、小細胞癌和類癌中，大多數惡性腫瘤細胞被免疫標記［12］。有研究指出用RT－PCR技術研究KLK6在肺癌的表達，表明KLK6存在于正常的肺組織和非小細胞肺癌的肺組織，不存在非小細胞肺癌細胞系中，且KLK6 mRNA在肺癌組織中過度表達，KLK6高濃度與較低的生存率相關，總之，高濃度的KLK6在非小細胞肺癌中是腫瘤增殖指標和獨立預后因素［13］。

3．6 子宮漿液性乳頭狀癌 有研究指出分別用RT－PCR和ELISA檢測子宮漿液性乳頭狀癌KLK6的表達水平和KLK6的分泌情況，表明KLK6在子宮漿液性乳頭狀癌高度表達并在血清和血漿中被釋放，可能作為子宮漿液性乳頭狀癌的復發早期診斷和治療反應的一種新型標志物［14］。

3．7 腦膠質瘤 Jasmine等用免疫過氧化物酶標記法發現KLK6在神經膠質細胞標記陽性，神經膠質細胞細胞核標記強陽性；脈絡叢上皮細胞也顯示細胞質和細胞核標記染色［12］。Kristen等研究發現在腦膠質母細胞瘤KLK6高表達可能促進腫瘤細胞對細胞毒性劑的抵抗，并且是降低患者術后生存率的指標［15］。

綜上所述可知，近年來KLKs在腫瘤中潛在的診斷、監測和預后應用價值備受關注。越來越多的研究表明，腫瘤患者KLK6不論是在mRNA還是在蛋白質水平的異常表達都有潛在的臨床診斷和預后價值。在未來研究中應進一步研究在惡性腫瘤組織和血清中KLK6的表達情況，為腫瘤的早期診斷、治療療效和預后評價提供更好的臨床指標。

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