鴨傳染性漿膜炎的研究進(jìn)展

陳民香張培晏

(1.四川省廣元市動物疫病預(yù)防控制中心,四川廣元 625017; 2.四川省廣元市昭化區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,四川廣元 625021)

鴨傳染性漿膜炎的研究進(jìn)展

陳民香1張培晏2

(1.四川省廣元市動物疫病預(yù)防控制中心,四川廣元 625017; 2.四川省廣元市昭化區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,四川廣元 625021)

鴨傳染性漿膜炎是危害養(yǎng)鴨業(yè)的主要傳染病之一,本病可給肉鴨養(yǎng)殖戶造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文對該病研究成果,包括流行情況、病原菌血清型、鴨疫里默氏桿菌生物學(xué)特性、疫苗及免疫方面作一綜述。

鴨疫里默氏桿菌;血清型;診斷;防治

鴨傳染性漿膜炎是由鴨疫里默氏桿菌引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病。本病呈急性或慢性敗血癥過程，主要癥狀有以纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎。1～8周齡鴨敏感，惡劣的環(huán)境是促發(fā)感染的直接因素。發(fā)病率為5～90%，病死率高達(dá)80%，慢性耐過鴨主要表現(xiàn)神經(jīng)性癥狀，導(dǎo)致殘鴨和僵鴨。本病對鵝、火雞等也造成很大的危害[1-2]。

1 流行情況

鄺榮祿等在1975年首次提出我國發(fā)生此病，并在1981年確診了本病在廣東地區(qū)盛行。郭玉璞等1982年首次報道了在北京郊區(qū)鴨場于198O～1981年間曾發(fā)生本病，并分離出病原菌。隨后在北京、上海、四川、內(nèi)蒙古、遼寧等 29個省市自治區(qū)有此病發(fā)生[3]，可見RA已在我國養(yǎng)鴨地區(qū)廣泛流行。本病主要感染鴨，但也可感染雞、火雞、鵝、雉雞、鵪鶉，主要通過污染的飼料、飲水、飛沫、塵土等經(jīng)呼吸道、消化道和刺破的足部皮膚及蚊蟲叮咬等途徑感染而發(fā)病。其主要發(fā)病日齡為1～8周齡，最多見發(fā)病是2～3周齡，但據(jù)汪銘書所述RA對鴨的致病日齡范圍有擴(kuò)大的趨勢，發(fā)病鴨群最小的只有5日齡，大的可達(dá)90日齡[4]。患病鴨常合并感染禽霍亂、大腸桿菌病、禽副傷寒和鴨病毒性肝炎等。本病無明顯的季節(jié)性，但較多見于春夏季。

2 病原菌血清型

迄今，國際上已確認(rèn)RA共有21種血清型[5]。在不同的國家和地區(qū)，引起鴨疫里氏桿菌病流行的RA血清型不盡相同。我國自l982年郭玉璞等在北京確定血清1型RA的存在后，全國各地相繼有本病的報道，直到1987年仍然認(rèn)為我國僅有血清1型鴨疫里氏桿菌存在，但近年來從北京、上海、四川等省，由張大柄等，程安春等分離鑒定出的血清型有1、2、3、4、6、8、10、11、13、14、15、17、22、23、24、25[6]等16個血清型，汪銘書等先后在全國28和25個省（市、自治區(qū)）分離到血清3型和血清5型RA。因此我國至少有17個血清型，并且還有許多未知血清型的存在，目前主要以1、2、6、10型多見。

3 診斷

3.1 臨床特征及病理變化

自然感染發(fā)病的鴨臨診表現(xiàn)為倦怠、縮頸、不食或少食，眼鼻有分泌物，淡綠色腹瀉，不愿走動或掉群，運(yùn)動失調(diào)，頻死前出現(xiàn)神經(jīng)癥狀；頭頸震顫，角弓反張，不久抽搐而死，病程一般為1～3d，幸存者生長緩慢。日齡較大的鴨多呈亞急性或慢性經(jīng)過，病程達(dá)1周或1周以上，病鴨表現(xiàn)除上述癥狀外，時有出現(xiàn)頭頸外斜，遇有驚擾時不斷鳴叫，頸部彎轉(zhuǎn)90°左右，轉(zhuǎn)圈或倒退運(yùn)動。最明顯的眼觀病變是纖維素性滲出物，可波及全身漿膜面，及心包膜，肝臟表面以及氣囊，即構(gòu)成典型的纖維素性心包炎、肝周炎及氣囊炎。

3.2 實驗室診斷

3.2.1 分離與生物學(xué)特性鑒定

郭予強(qiáng)等（1983）報道，最易分離到RA的組織是病鴨的腦和心血，其次是氣囊、骨髓、肺、肝、脾的滲出物等。從病料中初次分離RA需要用加鮮血的瓊脂平板，厭氧培養(yǎng)。傳代后的RA在TSA上培養(yǎng)24h形成圓形凸起、透明、呈露珠樣，直徑為0.5～1.5mm的小菌落，用斜射光觀察發(fā)出綠色光，而鴨大腸桿菌菌落為2～5mm，RA菌落為2～3mm，培養(yǎng)物均為灰白色；進(jìn)一步接種麥康凱平板，里默氏桿菌不生長，鴨大腸桿菌呈紅色菌落，鴨沙門氏菌呈白色菌落。因此，綜合IS的臨床癥狀、病理變化、分離菌株培養(yǎng)特性、菌體形態(tài)及生化特性等可以鑒定出RA分離株。測定血清型常用平板凝集反應(yīng)和瓊脂擴(kuò)散試驗。

3.2.2 間接血凝試驗

運(yùn)用瓊脂擴(kuò)散制備抗原，通過與致敏式二醛化的綿羊紅血球發(fā)生凝集反應(yīng)的程度來檢測血清中鴨疫里默氏桿菌抗體的水平。

3.2.3 間接免疫熒光抗體試驗

朱琪等建立了間接免疫熒光抗體試驗對RA進(jìn)行特異性檢測，從而與鴨大腸桿菌病、鴨霍亂等進(jìn)行區(qū)分鑒別，該技術(shù)具有簡便、快速、敏感和特異性強(qiáng)等特點，對發(fā)病小鴨的檢測結(jié)果表明，鴨腦組織、鼻竇及肝臟等細(xì)菌檢出率較高。

3.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

張鶴曉（1998）[7]、胡清海（2001）分別以1型鴨疫里氏桿菌全菌體、脂多糖（LPS）作為包被抗原，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）建立了特異性檢測鴨疫里氏桿菌I型抗體的方法。此法是目前檢測鴨疫里氏桿菌抗體的一種敏感方法。

3.2.5 間接免疫酶組織化學(xué)法

劉維平等（2004）和孟瓊?cè)A等（2004）分別以鴨、鵝源血清1型鴨疫里氏桿菌作為抗原免疫兔制備兔抗鴨疫里氏桿菌的IgG，建立檢測雛鴨、雛鵝感染RA的間接免疫酶組織化學(xué)法，可用于雛鴨、雛鵝RA人工感染和臨床感染的診斷、檢測及RA抗原定位和致病機(jī)理的研究。

3.2.6 鴨疫里默氏桿菌的分子生物學(xué)診斷

PCR方法具有準(zhǔn)確、快速、簡便之優(yōu)點。胡清海等（2002）以RA的OmpA基因序列設(shè)計了一對擴(kuò)增產(chǎn)物長度為809bp的特異性引物，應(yīng)用PCR技術(shù)可準(zhǔn)確地鑒別RA。汪銘書等（2004）利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）技術(shù)，在RA與大腸桿菌、沙門氏菌中篩選出可區(qū)別于RA的8條隨機(jī)引物和可作為分子標(biāo)記鑒別1、2、4和5型的RA的8條隨機(jī)引物。可作為RA的分子診斷。

4 疫苗及免疫

4.1 滅活苗

包括無佐劑滅活苗和含佐劑滅活苗。高福等用RA I型北京株制備了鴨疫里默氏桿菌滅活苗經(jīng)對7日齡雛鴨皮下注射1.0ml（含菌 3×109CFU/ml），保護(hù)率在86.67～100%[8]。高福等在研制RA福爾馬林滅活苗的基礎(chǔ)上，制得了礦物油佐劑滅活苗，最低保護(hù)率為75%，免疫后一周已表現(xiàn)出很強(qiáng)的免疫力，但注射部位有微弱的不吸收硬結(jié)。蘇小運(yùn)等研制的鋁膠滅活苗一免后7～10d保護(hù)率為50%，二免20d后保護(hù)率為75%，不僅易于注射且注射部位無不良反應(yīng)，對肉的品質(zhì)沒有多大影響，但保護(hù)力出現(xiàn)較慢。蔡家運(yùn)等研制的RA蜂膠疫苗一免后15d保護(hù)率為80%，二免后10d保護(hù)率為100%，而且蜂膠的制備方法較鋁膠苗簡單，使用方便，易吸收，對肉鴨的肉質(zhì)無不良影響。胡清海等，以1，2，1O型RA分離型為菌種，研制RA三價油乳劑滅活疫苗，對6日齡雛鴨皮下接種0.4ml/只，免疫后攻毒，第14d保護(hù)率為91.7%～100%，35d保護(hù)率為66.6%～83.5%，田間試驗結(jié)果表明，雛鴨5～7日齡免疫后至上市保護(hù)率可達(dá)95%～100%。

4.2 弱毒活苗

Sandhu等針對美國主要流行株中1，2，5型占95%的特點，研制了三價疫苗，經(jīng)飲水或氣霧免疫1日齡雛鴨，實驗室和野外試驗均表明效果良好[9]。對雛鴨安全，無副作用，且不受抗菌藥物的影響。

4.3 亞單位菌苗

林世棠等利用鴨疫里氏桿菌亞單位成分每只0.5mL經(jīng)皮下或腿肌接種7日齡雛鴨，一周后攻毒，有較好的保護(hù)力，保護(hù)指數(shù)為81.5～lO0%。呂敏娜等從RA細(xì)胞壁提取一種可溶性莢膜抗原，具有良好的免疫原性，制成的RA莢膜多糖苗免疫雛鴨，產(chǎn)生堅強(qiáng)的保護(hù)力[10]。

4.4 鴨疫里氏桿菌和大腸桿菌二聯(lián)苗

蘇敬良等進(jìn)行了鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌二聯(lián)苗的研究：I型鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌O2二聯(lián)鋁膠苗，經(jīng)皮下注射10日齡雛鴨，免疫10d后，用同源強(qiáng)毒攻擊，均有很高的保護(hù)率[11]。劉永德等將大腸桿菌O78與鴨疫里氏桿菌滅活菌液混合，加入鹽酸左旋咪唑制成疫苗I，培養(yǎng)感染鴨疫里氏桿菌鴨胚，取尿囊液和胚體，搗碎滅活后與大腸桿菌O78滅活液混合，加入鹽酸左旋咪唑制成疫苗II。經(jīng)實驗室和野外免疫試驗，證明具有很好的預(yù)防效果。

5 結(jié)語

目前，本病呈全球性流行，是造成養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟(jì)損失的最主要傳染病之一，其血清型之多，各血清無交叉免疫原型，地域分布之廣加之用藥治療易產(chǎn)生耐藥性，使得對該病的防制工作相當(dāng)繁重。當(dāng)前各國獸醫(yī)工作者均在加緊對RA分子生物學(xué)、免疫原性等方面的研究，試圖研發(fā)出有效的防制疫苗，建立有效、快速的血清學(xué)監(jiān)測體系，以保障養(yǎng)鴨業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。

[1] Heifer.D.L. et a1.Pasteurella anatipestifer infection in gesse[J]. Avian.Dis，1973，（17）：868-870.

[2] Sandhu.D.H. Pasteurella anatipestifer infection in turkeys[J].Avian Dis，1977，（21）：712-715.

[3] 謝永平.我國鴨疫里默氏菌病研究進(jìn)展[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2001，（3）：10-11.

[4] 汪銘書.血清8型鴨疫里氏桿菌在我國的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2003，（1）：47-52.

[5] 郭玉璞.我國對鴨傳染性漿膜炎研究概況[J].中國獸醫(yī)雜志，1997，（12）：37-38.

[6] 張大柄，郭玉璞.鴨里氏桿菌的血清型[J].中國獸醫(yī)雜志，1998，24（6）：44-46.

[7] 張鶴曉，郭玉璞.鴨疫里氏桿菌研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)雜志，1998，（3）：183-186.

[8] 高福.小鴨傳染性漿膜炎疫苗的研究[J].中國獸醫(yī)雜志，1993，（8）：46-48.

[9] SANDHUTS，LEISTERML.Serotypes of Pasteurella anatipestifer isolates from poultry in different countri[J].Avi.Pathol，1991，（20）：233-239.

[10] 呂敏娜.鴨傳染性漿膜炎莢膜多糖苗研究初報[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，1999，（3）：16-18.

[11] 郭玉蹼.我國對鴨傳染性漿膜炎研究概況[J].中國獸醫(yī)雜志，1997，（12）：37-38.