鴨傳染性漿膜炎的研究進展

陳民香張培晏

(1.四川省廣元市動物疫病預防控制中心,四川廣元 625017; 2.四川省廣元市昭化區動物疫病預防控制中心,四川廣元 625021)

鴨傳染性漿膜炎的研究進展

陳民香1張培晏2

(1.四川省廣元市動物疫病預防控制中心,四川廣元 625017; 2.四川省廣元市昭化區動物疫病預防控制中心,四川廣元 625021)

鴨傳染性漿膜炎是危害養鴨業的主要傳染病之一,本病可給肉鴨養殖戶造成嚴重的經濟損失。本文對該病研究成果,包括流行情況、病原菌血清型、鴨疫里默氏桿菌生物學特性、疫苗及免疫方面作一綜述。

鴨疫里默氏桿菌;血清型;診斷;防治

鴨傳染性漿膜炎是由鴨疫里默氏桿菌引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病。本病呈急性或慢性敗血癥過程，主要癥狀有以纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎。1～8周齡鴨敏感，惡劣的環境是促發感染的直接因素。發病率為5～90%，病死率高達80%，慢性耐過鴨主要表現神經性癥狀，導致殘鴨和僵鴨。本病對鵝、火雞等也造成很大的危害[1-2]。

1 流行情況

鄺榮祿等在1975年首次提出我國發生此病，并在1981年確診了本病在廣東地區盛行。郭玉璞等1982年首次報道了在北京郊區鴨場于198O～1981年間曾發生本病，并分離出病原菌。隨后在北京、上海、四川、內蒙古、遼寧等 29個省市自治區有此病發生[3]，可見RA已在我國養鴨地區廣泛流行。本病主要感染鴨，但也可感染雞、火雞、鵝、雉雞、鵪鶉，主要通過污染的飼料、飲水、飛沫、塵土等經呼吸道、消化道和刺破的足部皮膚及蚊蟲叮咬等途徑感染而發病。其主要發病日齡為1～8周齡，最多見發病是2～3周齡，但據汪銘書所述RA對鴨的致病日齡范圍有擴大的趨勢，發病鴨群最小的只有5日齡，大的可達90日齡[4]?；疾▲喅：喜⒏腥厩莼魜y、大腸桿菌病、禽副傷寒和鴨病毒性肝炎等。本病無明顯的季節性，但較多見于春夏季。

2 病原菌血清型

迄今，國際上已確認RA共有21種血清型[5]。在不同的國家和地區，引起鴨疫里氏桿菌病流行的RA血清型不盡相同。我國自l982年郭玉璞等在北京確定血清1型RA的存在后，全國各地相繼有本病的報道，直到1987年仍然認為我國僅有血清1型鴨疫里氏桿菌存在，但近年來從北京、上海、四川等省，由張大柄等，程安春等分離鑒定出的血清型有1、2、3、4、6、8、10、11、13、14、15、17、22、23、24、25[6]等16個血清型，汪銘書等先后在全國28和25個?。ㄊ?、自治區）分離到血清3型和血清5型RA。因此我國至少有17個血清型，并且還有許多未知血清型的存在，目前主要以1、2、6、10型多見。

3 診斷

3.1 臨床特征及病理變化

自然感染發病的鴨臨診表現為倦怠、縮頸、不食或少食，眼鼻有分泌物，淡綠色腹瀉，不愿走動或掉群，運動失調，頻死前出現神經癥狀；頭頸震顫，角弓反張，不久抽搐而死，病程一般為1～3d，幸存者生長緩慢。日齡較大的鴨多呈亞急性或慢性經過，病程達1周或1周以上，病鴨表現除上述癥狀外，時有出現頭頸外斜，遇有驚擾時不斷鳴叫，頸部彎轉90°左右，轉圈或倒退運動。最明顯的眼觀病變是纖維素性滲出物，可波及全身漿膜面，及心包膜，肝臟表面以及氣囊，即構成典型的纖維素性心包炎、肝周炎及氣囊炎。

3.2 實驗室診斷

3.2.1 分離與生物學特性鑒定

郭予強等（1983）報道，最易分離到RA的組織是病鴨的腦和心血，其次是氣囊、骨髓、肺、肝、脾的滲出物等。從病料中初次分離RA需要用加鮮血的瓊脂平板，厭氧培養。傳代后的RA在TSA上培養24h形成圓形凸起、透明、呈露珠樣，直徑為0.5～1.5mm的小菌落，用斜射光觀察發出綠色光，而鴨大腸桿菌菌落為2～5mm，RA菌落為2～3mm，培養物均為灰白色；進一步接種麥康凱平板，里默氏桿菌不生長，鴨大腸桿菌呈紅色菌落，鴨沙門氏菌呈白色菌落。因此，綜合IS的臨床癥狀、病理變化、分離菌株培養特性、菌體形態及生化特性等可以鑒定出RA分離株。測定血清型常用平板凝集反應和瓊脂擴散試驗。

3.2.2 間接血凝試驗

運用瓊脂擴散制備抗原，通過與致敏式二醛化的綿羊紅血球發生凝集反應的程度來檢測血清中鴨疫里默氏桿菌抗體的水平。

3.2.3 間接免疫熒光抗體試驗

朱琪等建立了間接免疫熒光抗體試驗對RA進行特異性檢測，從而與鴨大腸桿菌病、鴨霍亂等進行區分鑒別，該技術具有簡便、快速、敏感和特異性強等特點，對發病小鴨的檢測結果表明，鴨腦組織、鼻竇及肝臟等細菌檢出率較高。

3.2.4 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

張鶴曉（1998）[7]、胡清海（2001）分別以1型鴨疫里氏桿菌全菌體、脂多糖（LPS）作為包被抗原，應用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）建立了特異性檢測鴨疫里氏桿菌I型抗體的方法。此法是目前檢測鴨疫里氏桿菌抗體的一種敏感方法。

3.2.5 間接免疫酶組織化學法

劉維平等（2004）和孟瓊華等（2004）分別以鴨、鵝源血清1型鴨疫里氏桿菌作為抗原免疫兔制備兔抗鴨疫里氏桿菌的IgG，建立檢測雛鴨、雛鵝感染RA的間接免疫酶組織化學法，可用于雛鴨、雛鵝RA人工感染和臨床感染的診斷、檢測及RA抗原定位和致病機理的研究。

3.2.6 鴨疫里默氏桿菌的分子生物學診斷

PCR方法具有準確、快速、簡便之優點。胡清海等（2002）以RA的OmpA基因序列設計了一對擴增產物長度為809bp的特異性引物，應用PCR技術可準確地鑒別RA。汪銘書等（2004）利用隨機擴增多態性DNA（RAPD）技術，在RA與大腸桿菌、沙門氏菌中篩選出可區別于RA的8條隨機引物和可作為分子標記鑒別1、2、4和5型的RA的8條隨機引物?？勺鳛镽A的分子診斷。

4 疫苗及免疫

4.1 滅活苗

包括無佐劑滅活苗和含佐劑滅活苗。高福等用RA I型北京株制備了鴨疫里默氏桿菌滅活苗經對7日齡雛鴨皮下注射1.0ml（含菌 3×109CFU/ml），保護率在86.67～100%[8]。高福等在研制RA福爾馬林滅活苗的基礎上，制得了礦物油佐劑滅活苗，最低保護率為75%，免疫后一周已表現出很強的免疫力，但注射部位有微弱的不吸收硬結。蘇小運等研制的鋁膠滅活苗一免后7～10d保護率為50%，二免20d后保護率為75%，不僅易于注射且注射部位無不良反應，對肉的品質沒有多大影響，但保護力出現較慢。蔡家運等研制的RA蜂膠疫苗一免后15d保護率為80%，二免后10d保護率為100%，而且蜂膠的制備方法較鋁膠苗簡單，使用方便，易吸收，對肉鴨的肉質無不良影響。胡清海等，以1，2，1O型RA分離型為菌種，研制RA三價油乳劑滅活疫苗，對6日齡雛鴨皮下接種0.4ml/只，免疫后攻毒，第14d保護率為91.7%～100%，35d保護率為66.6%～83.5%，田間試驗結果表明，雛鴨5～7日齡免疫后至上市保護率可達95%～100%。

4.2 弱毒活苗

Sandhu等針對美國主要流行株中1，2，5型占95%的特點，研制了三價疫苗，經飲水或氣霧免疫1日齡雛鴨，實驗室和野外試驗均表明效果良好[9]。對雛鴨安全，無副作用，且不受抗菌藥物的影響。

4.3 亞單位菌苗

林世棠等利用鴨疫里氏桿菌亞單位成分每只0.5mL經皮下或腿肌接種7日齡雛鴨，一周后攻毒，有較好的保護力，保護指數為81.5～lO0%。呂敏娜等從RA細胞壁提取一種可溶性莢膜抗原，具有良好的免疫原性，制成的RA莢膜多糖苗免疫雛鴨，產生堅強的保護力[10]。

4.4 鴨疫里氏桿菌和大腸桿菌二聯苗

蘇敬良等進行了鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌二聯苗的研究：I型鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌O2二聯鋁膠苗，經皮下注射10日齡雛鴨，免疫10d后，用同源強毒攻擊，均有很高的保護率[11]。劉永德等將大腸桿菌O78與鴨疫里氏桿菌滅活菌液混合，加入鹽酸左旋咪唑制成疫苗I，培養感染鴨疫里氏桿菌鴨胚，取尿囊液和胚體，搗碎滅活后與大腸桿菌O78滅活液混合，加入鹽酸左旋咪唑制成疫苗II。經實驗室和野外免疫試驗，證明具有很好的預防效果。

5 結語

目前，本病呈全球性流行，是造成養鴨業經濟損失的最主要傳染病之一，其血清型之多，各血清無交叉免疫原型，地域分布之廣加之用藥治療易產生耐藥性，使得對該病的防制工作相當繁重。當前各國獸醫工作者均在加緊對RA分子生物學、免疫原性等方面的研究，試圖研發出有效的防制疫苗，建立有效、快速的血清學監測體系，以保障養鴨業的持續健康發展。

[1] Heifer.D.L. et a1.Pasteurella anatipestifer infection in gesse[J]. Avian.Dis，1973，（17）：868-870.

[2] Sandhu.D.H. Pasteurella anatipestifer infection in turkeys[J].Avian Dis，1977，（21）：712-715.

[3] 謝永平.我國鴨疫里默氏菌病研究進展[J].貴州畜牧獸醫，2001，（3）：10-11.

[4] 汪銘書.血清8型鴨疫里氏桿菌在我國的發現及其病原特性研究[J].中國預防獸醫學報，2003，（1）：47-52.

[5] 郭玉璞.我國對鴨傳染性漿膜炎研究概況[J].中國獸醫雜志，1997，（12）：37-38.

[6] 張大柄，郭玉璞.鴨里氏桿菌的血清型[J].中國獸醫雜志，1998，24（6）：44-46.

[7] 張鶴曉，郭玉璞.鴨疫里氏桿菌研究進展[J].中國獸醫雜志，1998，（3）：183-186.

[8] 高福.小鴨傳染性漿膜炎疫苗的研究[J].中國獸醫雜志，1993，（8）：46-48.

[9] SANDHUTS，LEISTERML.Serotypes of Pasteurella anatipestifer isolates from poultry in different countri[J].Avi.Pathol，1991，（20）：233-239.

[10] 呂敏娜.鴨傳染性漿膜炎莢膜多糖苗研究初報[J].廣東畜牧獸醫科技，1999，（3）：16-18.

[11] 郭玉蹼.我國對鴨傳染性漿膜炎研究概況[J].中國獸醫雜志，1997，（12）：37-38.