膀胱尿路上皮癌患者尿液中EGFR mRNA的表達及意義

陳思，麥惠洪

(惠州市中心人民醫院，廣東惠州516000)

膀胱尿路上皮癌患者尿液中EGFR mRNA的表達及意義

陳思，麥惠洪

(惠州市中心人民醫院，廣東惠州516000)

目的 探討表皮生長因子受體(EGFR)mRNA在膀胱尿路上皮癌(BUC)患者尿液中的表達及意義。方法 選擇60例BUC患者(BUC組)和15例健康志愿者(對照組)，采用RT-PCR技術檢測兩組尿液EGFR mRNA的表達，比較不同病理分期BUC患者EGFR mRNA表達的差異。結果 BUC組EGFR mRNA陽性表達率為70.0%，對照組無陽性表達，兩組比較有統計學差異(P<0.05)。BUC組中，非肌層浸潤性患者EGFR陽性表達率為60.0%，肌層浸潤性患者EGFR陽性表達率為100%，兩組比較有統計學差異(P<0.05)。結論 EGFR mRNA在BUC中的過度表達與腫瘤的發生發展有關，其可作為預測腫瘤臨床病理學分期的參考指標。

膀胱腫瘤；表皮生長因子受體；病理分期

膀胱尿路上皮癌(BUC)占膀胱癌的90%以上[1]。尿脫落細胞學及膀胱鏡檢查是膀胱癌診斷的金標準，但前者敏感性較低，且易受血尿、感染等因素影響，特異性稍低；后者為有創檢查，且對不典型增生、原位癌的識別仍存在困難[2，3]。研究顯示，腫瘤標志物表皮生長因子受體(EGFR)在膀胱癌患者的血液和腫瘤組織中過度表達，可作為膀胱癌診斷、檢測及評價療效的指標[4～6]。本研究應用RT-PCR技術檢測BUC患者尿液中EGFR mRNA的表達，探討檢測尿液EGFR mRNA用于BUC診斷和病理分期的可能性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2013年1月～2014年6月收治的BUC患者60例(BUC組)，男39例、女21例，年齡41～87歲、平均56歲。均經病理檢查證實，其中非肌層浸潤性膀胱癌45例，肌層浸潤性膀胱癌15例。另取15例健康志愿者作為對照組，男7例、女8例，年齡38～68歲、平均47.5歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 檢測方法 采集受試者新鮮中段尿液1.0 mL置于EP管，離心棄上清，于沉淀物中再次加入1.0 mL尿液，離心棄上清，重復3次，以保證得到足量樣品，在最終沉淀中加入1 mL生理鹽水混勻，離心棄上清，生理鹽水洗滌，在沉淀中加入1 mL RNA提取液，混勻后移入新的EP管內。離心管中先倒入0.3 mL淋巴細胞分離液，自然沉淀15 min后，低速離心5 min，吸取白細胞層于離心管中，生理鹽水洗滌，加入1 mL Trizol充分混勻。加入氯仿分層，異丙醇沉淀，75%乙醇洗滌，提取總RNA。cDNA合成與PCR擴增參考文獻[7]方法。PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，紫外燈下照相。觀察到168 bp產物帶則證明逆轉錄模板有效，441 bp處出現產物帶圖像則判定EGFR表達陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件，計數資料用百分比表示，組間比較用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組尿液EGFR mRNA表達情況比較 BUC組EGFR陽性表達42例，陽性率70.0%；對照組未見EGFR陽性表達。兩組比較有統計學差異(P<0.05)。

2.2 不同病理分期BUC患者尿液EGFR mRNA表達情況比較 BUC組非肌層浸潤性患者45例，EGFR陽性表達27例，陽性率60.0%；肌層浸潤性患者15例，EGFR陽性表達15例，陽性率100%。二者比較有統計學差異(P<0.05)。

3 討論

腫瘤的發生、復發、轉移具有十分復雜的生理機制，其中基因變異尤其是原癌基因變異發揮重要作用[8]。EGFR是一種由原癌基因編碼的酪氨酸激酶受體，在生理狀態下不表達或有限表達，當編碼該受體的原癌基因發生突變時，可導致多余的表皮生長因子受體產生，增強細胞信號的傳導，該受體的激活能導致細胞生長、增殖、遷移，導致腫瘤的發生和轉移[9]。

EGFR是由c-erbB-1基因生成的一跨膜糖蛋白，定位于細胞膜，分子量約170 kD。EGFR在多種細胞甚至胎盤中均有表達，具有酪氨酸激酶活性，參與細胞增殖和分化的調控。目前有關EGFR與膀胱癌的關系研究結論較一致，認為EGFR表達與膀胱癌的發生和分級均有關系。顧勇[10]發現，EGFR在膀胱癌患者黏膜中陽性表達率為56.5%，在正常膀胱黏膜中無陽性表達，兩組比較有統計學差異(P<0.01)，其中EGFR的陽性表達率隨著膀胱癌病理分級和臨床分期的增高而增高。費夏瑋等[11]研究顯示，膀胱移行細胞癌組織中，EGFR的表達率與腫瘤臨床分期顯著相關(P<0.05)，EGFR的陽性表達強度隨著腫瘤分期的升高而增強(P<0.05)，認為EGFR的過度表達對膀胱移行上皮癌的發生發展起協同作用。包卿兵等[12]發現，EGFR在膀胱癌組織過度表達率為64%，在正常膀胱組織中無表達。癌組織中EGFR過度表達在不同的臨床病理特征之間有統計學差異(P<0.05)，復發腫瘤中EGFR過度表達明顯高于不復發(P<0.05)，它們之間存在相關性(P<0.05)；李應龍等[7]收集62例膀胱移行細胞癌(TCC)患者和25例健康人外周靜脈血及癌組織標本，采用RT-PCR方法檢測EGFR mRNA表達，結果顯示膀胱TCC組織中EGFR mRNA的平均陽性率為72.6%，在Tis-1、T2、T3、T4期膀胱TCC組織中EGFR mRNA的陽性率分別為57.1%、62.5%、85.7%、100%，在Tis-1、T2、T3、T4期膀胱TCC患者外周血中EGFR mRNA的陽性率分別為14.3%、25.0%、78.6%、90.9%，在組織和外周血中低分期(Tis-1、T2)與高分期(T3、T4)膀胱TCC表達EGFR mRNA陽性率有統計學差異(P<0.01)。而健康人外周靜脈血中均未發現EGFR mRNA表達。因此認為，膀胱TCC組織及外周血中EGFR mRNA表達陽性率與腫瘤分期、是否轉移有關。然而上述研究的對象均為癌癥患者的腫瘤組織和(或)外周血，本研究對BUC患者的尿液進行檢測，無創、操作更簡單、受檢者的接受度更高。結果顯示，EGFR在正常人群尿液中呈陰性，在膀胱癌中的陽性表達率為70.0%，隨膀胱癌病理分級的增高而增高。與上述文獻結果基本一致。另一方面，本研究運用RT-PCR技術在分子水平探討了EGFR與膀胱癌發生發展的相關性，得出EGFR過度表達與膀胱癌的發生發展呈正相關的結論。

綜上所述，EGFR mRNA在膀胱尿路上皮癌中的過度表達與膀胱癌的發生發展有關，與腫瘤的浸潤深度分化狀態關系十分密切，其水平高低可作為預測腫瘤臨床病理學分期的參考指標。關于EGFR在膀胱癌的發生發展中的地位和機制仍需進一步研究。

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惠州市科技計劃項目(20140802)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.013

R737.14

B

1002-266X(2015)01-0035-02

2014-08-22)