抗磷脂酶A2受體抗體檢測(cè)在特發(fā)性膜性腎病診斷中的意義

符克英，蔡俊宏，符生苗，韓葉光，王 茹，張 培

(海南省人民醫(yī)院腎病研究室，海南 海口 570311)

抗磷脂酶A2受體抗體檢測(cè)在特發(fā)性膜性腎病診斷中的意義

符克英，蔡俊宏，符生苗，韓葉光，王 茹，張 培

(海南省人民醫(yī)院腎病研究室，海南 海口 570311)

目的 探討血液中抗磷脂酶A2受體抗體(anti-PLA2R)在特發(fā)性膜性腎病診斷中的意義。方法應(yīng)用間接免疫熒光方法檢測(cè)特發(fā)性膜性腎病患者血液中的anti-PLA2R，以繼發(fā)性膜性腎病患者及健康獻(xiàn)血員作為對(duì)照，分析其與腎活檢組織中病理診斷的相關(guān)性。結(jié)果間接免疫熒光方法檢測(cè)血液中的anti-PLA2R敏感性為76.7%、特異性為96.7%。繼發(fā)性膜性腎病組僅檢出1例陽(yáng)性，正常組未檢出陽(yáng)性。血液anti-PLA2R與病理診斷的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性符合率為97.9%，陰性符合率為80.8%，總符合率為87.5%，Kappa一致性檢驗(yàn)，Kappa=0.752，P＜0.01。結(jié)論間接免疫熒光方法檢測(cè)血液中的anti-PLA2R可成為體外診斷特發(fā)性膜性腎病的特異性指標(biāo)。

抗磷脂酶A2受體抗體；特發(fā)性膜性腎病；間接免疫熒光

特發(fā)性膜性腎病(IMN)是臨床常見(jiàn)的以大量蛋白尿或腎病綜合征為主要表現(xiàn)的原發(fā)性腎小球疾病[1，2]，伴血栓和心血管并發(fā)癥，以及慢性腎功能衰竭風(fēng)險(xiǎn)。其典型的病理學(xué)特征是腎小球上皮下和基底膜內(nèi)免疫復(fù)合物沉積，伴節(jié)段性或球性硬化；免疫病理檢查可見(jiàn)IgG和C3沿基底膜細(xì)顆粒狀沉積；電鏡下可見(jiàn)電子致密物在基底膜的不同部位沉積。在2009年自身抗原磷脂酶A2受體(PLA2R)被鑒定以前，IMN的診斷主要通過(guò)腎臟穿刺、組織學(xué)檢查或電鏡檢查[1]。但是僅依靠組織病理學(xué)檢查并不能完全與其他原因引起的膜性腎病加以區(qū)別，故我們擬通過(guò)檢測(cè)血液中抗磷脂酶A2受體抗體(anti-PLA2R)與腎活檢病理診斷的相關(guān)性，探討其在IMN診斷和鑒別診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來(lái)源于2007年4月至2014年5月本院90例腎活檢組織標(biāo)本(石蠟常溫保存)，其中IMN 60例，狼瘡性腎炎20例，乙肝相關(guān)性腎炎10例，相應(yīng)血液樣本90例；以健康獻(xiàn)血員血液樣本30例作為對(duì)照(血液樣本-80℃保存)。對(duì)腎活檢組織行HE、PAS、PASM、Masson染色，免疫熒光檢查及電鏡檢查，觀察其病理改變。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：IMN依據(jù)腎臟病理光鏡、電鏡、免疫熒光診斷結(jié)合臨床診斷納入，排除其他可能引起膜性腎病的疾病。

1.2 研究分組 根據(jù)病理診斷將60例IMN設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，將狼瘡性腎炎和乙肝相關(guān)性腎炎30例設(shè)為繼發(fā)性膜性腎病組，健康獻(xiàn)血員30例為正常對(duì)照組。

1.3 方法 應(yīng)用間接免疫熒光方法檢測(cè)血液中的anti-PLA2R水平，采用包被有未轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染PLA2R的EU90細(xì)胞為檢測(cè)基質(zhì)，試劑盒購(gòu)自德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司。比較分析其與腎活檢組織病理診斷的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，比對(duì)資料進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受試者anti-PLA2R水平比較 IMN組陽(yáng)性46例，占76.7%，繼發(fā)性膜性腎病組陽(yáng)性1例，占3.3%，正常對(duì)照組均為陰性，陽(yáng)性樣本均可見(jiàn)anti-PLA2R與基質(zhì)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞反應(yīng)引起特異性胞漿熒光。本研究中，間接免疫熒光方法用于IMN檢測(cè)的敏感性為76.7%、特異性為96.7%。

2.2 血液anti-PLA2R水平與腎活檢組織病理診斷比較 血液anti-PLA2R與腎活檢組織病理診斷結(jié)果的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩種方法比較χ2檢驗(yàn)值為70.825，P＜0.01，其陽(yáng)性符合率為97.9%，陰性符合率為80.8%，總符合率達(dá)87.5%；對(duì)比分析Kappa一致性檢驗(yàn)的結(jié)果，Kappa=0.752，P＜0.01，見(jiàn)表1。

表1 血液anti-PLA2R與腎活檢組織中病理診斷結(jié)果的相關(guān)性

3 討論

磷脂酶A2受體(PLA2R)屬于Ⅰ型跨細(xì)胞膜受體，是哺乳動(dòng)物甘露糖受體家族4個(gè)成員之一。PLA2R的N端是1個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域，與之相鄰的是1個(gè)纖連蛋白Ⅱ(Fibronectin typeⅡ)結(jié)構(gòu)域以及8個(gè)串聯(lián)的C型植物凝集素樣結(jié)構(gòu)域(C-type lectin-like domain，CTLD)，位于胞漿內(nèi)的C端含有與內(nèi)吞裝置相互作用的結(jié)構(gòu)，可能與將細(xì)胞外的配體分子轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)有關(guān)。PLA2R主要分為兩型(M型與N型)，已經(jīng)確認(rèn)M型PLA2R是自身抗體的主要靶抗原[3-5]。PLA2R主要在腎小球足細(xì)胞呈高表達(dá)，并與IgG4共定位于IMN患者腎小球的免疫復(fù)合物沉積中，IMN患者中anti-PLA2R主要為IgG4亞型，這是腎小球沉積物中的主要免疫球蛋白亞類，從IMN患者沉積物中洗脫的IgG可識(shí)別PLA2R，因此PLA2R是導(dǎo)致IMN的一個(gè)主要抗原，檢測(cè)循環(huán)血液中的anti-PLA2R對(duì)于診斷和監(jiān)測(cè)IMN病情活動(dòng)很可能具有重要作用[3，6]。在IMN患者中，血液中的anti-PLA2R與PLA2R構(gòu)象依賴表位結(jié)合，兩者形成原位免疫復(fù)合物沉積在腎小球基底膜，引起足細(xì)胞的損傷、腎小球基底膜的增厚以及通透性的改變[1]。IgG4是anti-PLA2R中最主要的抗體亞型，這與繼發(fā)性膜性腎病(狼瘡性膜性腎病或惡性腫瘤相關(guān)膜性腎病等)不同，后者抗體以IgG2、IgG3為主要亞型。有研究表明，anti-PLA2R滴度與IMN疾病活動(dòng)度有關(guān)，也可以作為評(píng)價(jià)治療效果的一項(xiàng)指標(biāo)[2-5]。

2009年Beck等采用Western印跡法在37例IMN患者血液中的26例檢出了M型PLA2R，認(rèn)為anti-PLA2R對(duì)于診斷和監(jiān)測(cè)IMN病情活動(dòng)很可能具有重要作用[3，6]。Qin等[7]報(bào)道認(rèn)為anti-PLA2R對(duì)于IMN具有很高的特異性，其血液中抗體的滴度可用于判斷患者的療效和預(yù)后。周廣宇等[8]報(bào)道認(rèn)為anti-PLA2R可能是IMN的特異性抗體和致病性抗體。有學(xué)者[9-10]研究認(rèn)為anti-PLA2R水平可作為IMN病情活動(dòng)和治療效果的監(jiān)測(cè)工具。根據(jù)國(guó)外報(bào)道，免疫組織化學(xué)法可以用來(lái)檢測(cè)anti-PLA2R[3]，而以轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為檢測(cè)基質(zhì)的間接免疫熒光法是血液學(xué)篩查anti-PLA2R的一種便捷可靠的方法，適于anti-PLA2R的定性與定量分析[3，11-13]。

本研究結(jié)果顯示，應(yīng)用包被有未轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染PLA2R的EU90細(xì)胞為檢測(cè)基質(zhì)，間接免疫熒光法檢測(cè)患者血液中的anti-PLA2R，敏感性為76.7%、特異性為96.7%；與腎活檢組織病理診斷比較分析的一致性非常好，且繼發(fā)性膜性腎病組30例中僅1例陽(yáng)性，健康獻(xiàn)血員血液樣本30例中無(wú)陽(yáng)性結(jié)果。在本次研究中，有14例臨床確診IMN患者間接免疫熒光法結(jié)果為陰性，可能與以下幾點(diǎn)有關(guān)：(1)IMN患者體內(nèi)可能存在除了PLA2R受體以外的自身抗體靶抗原；(2)在樣本采集時(shí)，IMN患者正處于病情緩解階段或治療過(guò)程中，病理性免疫活動(dòng)處于低水平狀態(tài)，自身抗體的滴度降低；(3)由于轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)靶抗原的表達(dá)水平和構(gòu)象的影響，造成檢測(cè)anti-PLA2R的誤差。

綜上所述，我們認(rèn)為應(yīng)用包被有未轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染PLA2R的EU90細(xì)胞為檢測(cè)基質(zhì)，間接免疫熒光法檢測(cè)患者血液中的anti-PLA2R可作為體外診斷IMN的特異性指標(biāo)，有利于和繼發(fā)性膜性腎病的鑒別診斷。

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Significance of anti-phospholipase A2 receptor antibody in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy.

FU Ke-ying,CAI Jun-hong,FU Sheng-miao,HAN Ye-guang,WANG Ru,ZHANG Pei.Division of Nephrology Research,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo discuss the significance of anti-phospholipase A2 receptor antibody(anti-PLA2R) in diagnosing idiopathic membranous nephropathy.MethodsAnti-PLA2R in the blood was detected by indirect immunofluorescence in the patients with idiopathic membranous nephropathy(IMN group),and then compared with those in the patients with secondary membranous nephropathy(secondary membranous nephropathy group)and healthy blood donors(healthy control group).The relationship between anti-PLA2R and pathological diagnosis of renal tissue was analyzed.ResultsFor detection of anti-PLA2R in blood by indirect immunofluorescence,the sensibility was 76.7%and the specificity was 96.7%.Only one case was positive in the secondary membranous nephropathy group, and none was positive in the healthy control group.Correlation analysis between anti-PLA2R and pathological diagnosis showed a positive coincidence rate of 97.9%,negative coincidence rate of 80.8%,total coincidence rate of 87.5%, and the Kappa of consistency test of 0.752,P＜0.01.ConclusionAnti-PLA2R in blood detected by indirect immunofluorescence could be used as the specific indicator for diagnosing idiopathic membranous nephropathyin vitro.

Anti-phospholipase A2 receptor antibody(anti-PLA2R);Idiopathic membranous nephropathy (IMN);Indirect immunofluorescence

R692

A

1003—6350（2015）11—1626—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.11.0581

2014-12-15)

海南省衛(wèi)生廳立項(xiàng)課題（編號(hào)：瓊衛(wèi)2012 PT-16）

蔡俊宏。E-mail：cjh7506@163.com