COX-2蛋白和VEGF-C蛋白在胃癌和非胃癌黏膜病變組織中的表達及臨床意義

陳美霓，郭 浩，郭 巍，郝 琴，趙菊梅，魏曉麗，王愛紅，龐秋霞

(1.延安大學醫學院實驗中心，陜西 延安 716000；2.延安大學醫學院附屬醫院，陜西 延安 716000)

COX-2蛋白和VEGF-C蛋白在胃癌和非胃癌黏膜病變組織中的表達及臨床意義

陳美霓1，郭 浩2，郭 巍2，郝 琴1，趙菊梅1，魏曉麗1，王愛紅1，龐秋霞1

(1.延安大學醫學院實驗中心，陜西 延安 716000；2.延安大學醫學院附屬醫院，陜西 延安 716000)

目的 研究環氧合酶-2(COX-2)蛋白和血管內皮生長因子C(VEGF-C)蛋白在胃癌組織和非胃癌黏膜病變組織中的表達及其臨床意義。方法應用免疫組織化學S-P法檢測45例胃癌標本、107例非胃癌黏膜病變組織及23例胃癌手術癌旁正常黏膜組織中COX-2蛋白、VEGF-C蛋白的陽性表達情況，應用SPSS16.0統計軟件進行數據整理分析。結果①胃癌組織中COX-2蛋白、VEGF-C蛋白表達程度明顯高于非胃癌黏膜病變組織及正常胃黏膜組織(P＜0.05)；②胃癌組織中COX-2蛋白、VEGF-C蛋白表達程度與淋巴結轉移和臨床分期相關(P＜0.05)；③COX-2蛋白與VEGF-C蛋白在胃癌組織中的表達呈正相關(P＜0.05)。結論COX-2蛋白與VEGF-C蛋白在胃癌前病變發展為胃癌的過程中起著重要作用。COX-2蛋白、VEGF-C蛋白在胃癌的進展及淋巴的轉移過程中密不可分，COX-2蛋白、VEGF-C蛋白之間共同作用促進胃癌的淋巴轉移。

環氧合酶-2；血管內皮生長因子C；胃癌；免疫組化

研究顯示，全球胃癌的發生率和死亡率雖有平穩降低的趨勢，但在世界范圍內每年新病例的絕對數量是增加的。而我國的胃癌發病率和死亡率排名世界前20位[1]。本文對不同胃黏膜病變采用免疫組織化學S-P染色法檢測其中環氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)蛋白和血管內皮生長因子C(Vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)蛋白的表達，并探討COX-2蛋白、VEGF-C蛋白在胃癌及其他非胃癌黏膜病變表達的差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年1月至2009年12月延安大學附屬醫院病理科胃癌根治術胃癌標本45例，其中男性26例，女性19例；按照Gleason病理分級：高-中分化30例、低分化15例；有淋巴轉移32例，無淋巴轉移13例；按照UICC的TNM分期，Ⅰ+Ⅱ期有29例，Ⅲ+Ⅳ期有16例。非胃癌黏膜病變組包括慢性淺表性胃炎28例、慢性萎縮性胃炎25例、輕度不典型增生23例和重-中度不典型增生31例。23例正常胃黏膜組織標本為胃癌手術癌旁正常黏膜組織。

1.2 試劑及檢測方法 濃縮型兔抗人COX-2及VEGF-C即用型多克隆抗體均購于北京中杉生物科技有限公司；DAB底物顯色劑和S-P試劑盒購于武漢博士德生物科技有限公司。采用免疫組織化學S-P法，染色步驟嚴格按試劑盒說明書進行。抗原修復采用枸櫞酸鈉緩沖液高壓熱修復。兔抗人COX-2與VEGF-C多克隆抗體工作濃度均為1:100稀釋，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定 COX-2蛋白、VEGF-C蛋白主要分布在細胞漿內，以出現棕黃色顆粒為陽性表達，以試劑公司提供的陽性切片為陽性對照。判定實驗結果采用半定量積分法，反應陽性的細胞百分數等級評分，陽性細胞百分比＜10%為0分；10%～25%為1分；25%～50%為2分；50%～75%為3分；及>75%為4分。陽性細胞的染色強度等級評分，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分以及深棕色為3分。陽性細胞百分比評分與染色強度評分的乘積為最終評分，≤3分判為陰性，>3分為陽性。

1.4 統計學方法 應用SPSS16.0統計軟件進行數據整理分析，組間計數資料比較采用χ2檢驗；COX-2蛋白與VEGF-C蛋白之間相關性采用Spearman等級相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 COX-2蛋白、VEGF-C蛋白在胃癌、非胃癌和正常胃黏膜組織中的表達 COX-2蛋白在45例胃癌組織中的陽性表達率為29例(64.4%)，COX-2蛋白在胃癌中的表達率顯著高于正常胃黏膜、慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎及輕度不典型增生組織，差異均有統計學意義(P＜0.05)；VEGF-C蛋白在45例胃癌組織中的陽性表達率為26例(57.7%)，VEGF-C蛋白在胃癌中的表達率顯著高于正常胃黏膜、慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、輕度不典型增生及重-中度不典型增生組織，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1和圖1。

表1 COX-2蛋白、VEGF-C蛋白在胃癌、非胃癌和正常胃黏膜組織中的表達[例(%)]

圖1 COX-2蛋白、VEGF-C蛋白在胃癌中的陽性表達(SP，400×)

2.2 COX-2蛋白、VEGF-C蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系 胃癌組織中COX-2蛋白、VEGF-C蛋白表達程度與淋巴結轉移和臨床分期相關(P＜0.05)，胃癌組織中COX-2蛋白與VEGF-C蛋白的表達程度與年齡、性別、部位、分化程度、漿膜侵犯及遠處臟器轉移均無相關(P>0.05)，見表2。

表2 胃癌COX-2蛋白、VEGF-C蛋白的表達與臨床病理特征的關系[例(%)]

2.3 胃癌中COX-2蛋白表達與VEGF-C蛋白表達的關系 45例胃癌組織中，COX-2蛋白與VEGF-C蛋白同時表達陽性者20例，同時表達陰性者9例，兩組比較差異有統計學意義(χ2=4.185，P＜0.05)。COX-2蛋白表達與VEGF-C蛋白表達之間進行Spearman等級相關分析，兩者之間存在正相關關系(rs=0.630，P＜0.05)。

3 討 論

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，在我國女性和男性腫瘤相關死因中胃癌分別占到第2位和第3位[2]。研究發現胃癌的發生、發展是一個多因素、多基因、多步驟的過程。在胃癌演變過程中，其有效方式為：炎細胞浸潤到慢性淺表性胃炎，再到慢性萎縮胃炎，再發展到腸化生，再進一步發展為不典型增生，最后到胃癌病變[3]。學者發現胃癌較高的死亡率與早期發生侵襲、轉移相關，而胃癌轉移的重要途徑之一是淋巴結轉移。因此胃癌淋巴結轉移機制的研究在外科淋巴結清掃時判斷范圍、評估預后具有重要的意義[4]。

COX-2蛋白為可誘導型限速酶，在正常組織中的含量極少，但當炎癥反應發生過程中可被迅速誘導使COX-2蛋白升高形成過量PGs，致使紅腫、發熱和疼痛等現象的發生。有研究發現[5]，COX-2蛋白在子宮癌前病變組織中的表達率明顯高于正常子宮內膜，并低于子宮內膜癌，COX蛋白表達從正常組織到癌前病變到癌變的過程中為進行性升高。本實驗發現，COX-2蛋白在不同胃疾病里的表達率不同，COX-2蛋白在胃癌組中表達率最高，不典型增生組次之，萎縮化生性病變與慢性淺表性胃炎表達較少，正常胃黏膜組織表達最少，其中不典型增生組中隨著增生病變程度的加重COX-2蛋白表達也隨之增加，與COX-2蛋白在子宮癌前病變中的表達結果一致。本文結果提示COX-2蛋白在癌前病變中有重要作用，認為COX-2蛋白在胃癌的發生的早期階段有密切的聯系。

研究證實，COX-2蛋白在乳腺癌[6]、結腸癌[7]等組織中高表達，COX-2蛋白在促進腫瘤的作用機制有以下幾方面[8]：(1)COX-2蛋白過度表達可誘導細胞惡性轉化參與腫瘤的發生；(2)通過調節蛋白Bax/bcl-2通路，抑制腫瘤細胞凋亡；(3)誘導VEGF因子表達上調，促進腫瘤血管生成；(4)上調MMP-9蛋白等促進腫瘤細胞侵襲性；(5)對機體抗腫瘤免疫的抑制。本實驗結果顯示，胃癌組織中COX-2蛋白表達程度與淋巴結轉移、臨床分期有相關(P＜0.05)，與年齡、性別、部位、分化程度、漿膜侵犯及遠處臟器轉移均無相關(P> 0.05)，提示COX-2蛋白表達的上調可能促進胃癌淋巴管的生成和轉移播散，與胃癌的侵襲有關。

VEGF-C蛋白是VEGF家族中促淋巴管生成因子，與受體VEGFR3蛋白結合，可通過CRB2/ERX1/2與PI3K/AKT等途徑誘導內皮細胞增殖、遷移，并調節血管滲透性共同促進腫瘤淋巴管生成和淋巴結轉移[9-10]。研究發現VEGF-C蛋白在宮頸鱗狀細胞癌中表達水平明顯高于宮頸上皮內瘤變和宮頸正常鱗狀上皮[11]，認為VEGF-C蛋白與宮頸癌的發生有一定的關系。本實驗發現VEGF-C蛋白在胃癌組中表達率最高，不典型增生組中隨著增生病變程度的加重VEGF-C蛋白表達也隨之增加，但在慢性淺表性胃炎、萎縮化生性病變和正常胃黏膜中無表達，提示VEGF-C蛋白過表達可能與胃癌發生的早期階段有一定關系。研究證實，VEGF-C蛋白在乳腺癌[12]、結腸癌[13]、食管癌[14]、甲狀腺乳頭狀癌[15]等多種腫瘤中表達，并在腫瘤侵襲、轉移中起著重要作用。本實驗結果顯示，胃癌組織中VEGF-C蛋白表達程度與淋巴結轉移、臨床分期有相關(P＜0.05)，與年齡、性別、部位、分化程度、漿膜侵犯及遠處臟器轉移均無相關(P> 0.05)，提示VEGF-C蛋白表達的上調可能促進胃癌淋巴管的生成并促進胃癌的發生、發展、侵潤和轉移。

近年研究表明，COX-2蛋白在VEGF-C蛋白轉錄水平通路中是一個關鍵的上游調控基因[16]。COX-2蛋白催化產物前列腺素2(PE2)與前列腺素受體(EP1)的結合產物，使HER-2/Neu受體磷酸化增強，并介導MAPK/P38通路激活NF-KB，使VEGF-C蛋白上調[17]。有學者還發現，COX-2蛋白通過前列腺素受體EP1、EP4發揮作用來對VEGF-C蛋白的調節，EP1、EP4的下游調節分子可能與絲氨酸蛋白激酶(Src kinase)有關[18]。本研究結果顯示，COX-2蛋白、VEGF-C蛋白在胃癌中的表達呈正相關(rs=0.630，P＜0.05)，提示在胃癌發展中VEGF-C蛋白與COX-2蛋白獨立而又協同作用于腫瘤細胞。

綜上所述，COX-2蛋白和VEGF-C蛋白與胃癌的發生、發展、預后都有密切的聯系，其共同促進胃癌的發生、發展和淋巴轉移，因此，兩者聯合檢測可作為臨床判斷腫瘤的侵襲性及轉移潛能的參考指標，對評價胃癌病變病情、判斷預后有重要意義。

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Expression and significance of COX-2 and VEGF-C protein in gastric carcinoma and non-gastric mucosal lesion tissues.

CHEN Mei-ni1,GUO Hao2,GUO Wei2,HAO Qin1,ZHAO Ju-mei1,WEI Xiao-li1,WANG Ai-hong1, PANG Qiu-xia1.1.Medical Experiment Center,Medical College of Yan'an University,Yan'an 716000,Shaanxi,CHINA; 2.The Affiliated Hospital of Medical College of Yan'an University,Yan'an 716000,Shaanxi,CHINA

Objective To study the expression and significance of cyclooxygenase-2(COX-2)and vascular endothelial growth factor-C(VEGF-C)in gastric carcinoma and non-gastric mucosal lesion tissues.MethodsImmunohistochemical SP was performed to detect the expression of COX-2 protein and VEGF-C protein in 45 cases of gastric carcinoma,107 cases of non-gastric mucosal lesion tissues,and 23 cases of peficancerous normal mucosal tissues. Statistical analysis was performed using SPSS16.0 software.Results①The expression of VEGF-C and COX-2 in gastric carcinoma tissues was significantly higher than that in non-gastric mucosal lesion tissues and peficancerous normal mucosal tissues(P＜0.05);②The expression of COX-2 and VEGF-C in gastric carcinoma tissues was correlated with lymphatic metastasis and clinical staging(P＜0.05);③The expression of COX-2 was found to be positive correlated with the VEGF-C in gastric carcinoma tissues(P＜0.05).ConclusionThe COX-2 and VEGF-C protein play an important role in the development from precancerous lesions to cancer.The COX-2 protein and VEGF-C protein are closely related to the gastric cancer progression and lymphatic metastasis.The interaction between the COX-2 protein and VEGF-C protein promote lymphatic metastasis of gastric cancer.

Cyclooxygenase-2;Vascular endothelial growth factor-C;Gastric carcinoma;Immunohistochemical

R735.2

A

1003—6350（2015）18—2671—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.18.0972

2015-01-12)

延安市科學技術研究發展計劃項目（編號：2013-KW15）;陜西省高水平大學建設轉向資金項目（編號：2013SXTS02）;延安市腫瘤防治重點實驗室資助項目（編號：2014-78）

郭巍。E-mail:15756560@qq.com