海南地區人乳頭瘤病毒感染情況與亞型分析

張繼業，李曉娟，徐衛華，符生苗

(海南省人民醫院中心實驗室，海南 海口 570311)

海南地區人乳頭瘤病毒感染情況與亞型分析

張繼業，李曉娟，徐衛華，符生苗

(海南省人民醫院中心實驗室，海南 海口 570311)

目的 了解常見21種人乳頭瘤病毒(HPV)在海南地區的亞型分布、多重感染和不同年齡感染情況。方法使用PCR體外擴增和膜雜交法對2013年1～12月來我院就診的10 764例女性進行HPV分型檢查。結果10 764例樣本中陽性率為19.38%，多重感染率為4.96%，25歲以下陽性率最高，各亞型檢出率最高依次為52型、16型和58型，未檢出43型。結論海南地區主要HPV感染亞型為52型、16型和58型，HPV感染有低齡化趨勢。

人乳頭瘤病毒；基因分型；宮頸癌；多重感染

人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一種嗜上皮性的雙股環形無包膜DNA病毒，目前已經發現超過200多種，其中超過35種能夠感染人類生殖系統[1]。低危型的HPV主要引起起尖銳濕疣等良性病變，而高危型HPV的持續感染則是引發宮頸上皮內瘤變以及宮頸癌的主要病原學因素[2-3]，幾乎絕大多數子宮頸鱗狀細胞癌的患者都可以檢測到高危型HPV的感染[4]。由于不同HPV亞型在不同地區以及不同人群的分布有所區別[5]，因此本研究針對海南地區各年齡段10 764例女性進行常見21種HPV亞型檢測，以確定海南地區HPV感染的常見類型，為HPV的防治和后續研究打下基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究所有標本來自海南省人民醫院中心實驗室2013年1～12月自愿接受HPV分型檢查的女性患者共10 764例，其中年齡最小14歲，最大87歲。將受試對象分為＜25歲組、26～35歲組、36～45歲組、46～55歲組、56～65歲組以及＞65歲組。

1.2 儀器和試劑 分子雜交儀(潮州凱普生物化學有限公司)，PCR擴增儀(Applied biosystems)，細胞裂解液(分離法)(潮州凱普生物化學有限公司)， HPV分型檢測試劑盒(潮州凱普生物化學有限公司)，其他分析純試劑。

1.3 樣本采集 行常規婦科檢查，以窺陰器暴露宮頸后用拭子擦拭干凈子宮頸口分泌物，拭子置于宮頸口內2～3 cm，順時針旋轉5圈，獲頸管脫落細胞并存于裝有細胞保存液的洗脫管中。做好標本相應標識后4℃保存并在24 h內送檢。

1.4 樣本檢測 將宮頸脫落細胞保存液充分震蕩混勻，取500μl保存液以12 000 r/min離心5 min后棄上清液，按照細胞裂解液(分離法)試劑盒說明書操作提取樣本DNA。隨后按照HPV分型檢測試劑盒說明書進行PCR擴增以及21種HPV基因亞型的檢測。21種亞型包括高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68型，低危型6、11、42、43、44、CP8304型，其他型53型。每次實驗均設有陰性和陽性對照。

1.5 結果判讀 膜條上共24個方格，依次排列質控點與21種不同的HPV型別。首先檢查膜條質控點是否有藍色圓點出現，有則表示實驗成功。隨后檢查其他方格是否藍色圓點出現，相應方格中出現藍色圓點則判定對于對應HPV亞型為陽性。

1.6 數據統計 用軟件Excel 2007建立數據庫并對所檢測的21種HPV亞型在不同年齡段中的感染情況進行統計描述。

2 結果

2.1 HPV感染的年齡分布 10 764例樣本中陽性率為19.38%，其中＜25歲組陽性率最高，達28.80%，其次為56～65歲和＞65歲組，陽性率分別為24.32%和22.76%。在不同類型HPV感染中高危型檢出率最高，為10.82%，而且在各年齡段中也是以高危型感染為主。多重感染檢出率為4.96%，但＜25歲組和＞65歲組檢出率高，分別達10.95%和9.76%。低危型染檢出率相對較低，但在＜25歲組中感染較多，檢出率為4.33%，其他型感染相對較少，見表1。

2.2 HPV感染的亞型分布 在10 764例樣本中共檢出HPV感染2 811例次，其中除44型未檢出外，其余20種均有檢出。其中52型、16型以及58型檢出率最高，分別為16.86%、13.66%和11.21%。在單一感染的患者中，除了52型、16型以及58型以外，CP8304型和53型的也較為常見。在534例多重感染的病例中最多檢出6種不同亞型HPV同時感染。在雙重感染和三重感染中52型和58型的檢出率最高。但在四重感染中檢出率最高的為16型，此外58型、CP8304型和53型也較為常見。而五重和六重感染不同亞型的HPV檢出規律不明顯，見表2。

表1 HPV感染的年齡分布[例(%)]

表2 HPV感染的亞型分布(例，n=2811)

3 討論

高危型HPV的持續感染是宮頸上皮內瘤變以及宮頸癌的重要病原學因素[2-3]，流行病學調查顯示高危型HPV感染誘發宮頸癌的概率為1%，同時93%的宮頸癌組織中能夠檢出HPV感染[3]，因此HPV的檢測是預防和治療宮頸癌的必須內容。

研究表明，至少50%的婦女在一生中會感染HPV，但HPV在不同地區的感染率也有所區別。文獻報道稱HPV全球感染率約10%，亞洲感染率為8%[4]，而國內文獻報道的HPV檢出率根據地區不同，檢出率有明顯差異，其中廣東[5]、廣西[6]、貴州[7]等地的文獻報道HPV檢出率在24%左右，而重慶的檢出率報道稱為17.3%[8]，南京為10.79%[9]，其他地區檢出率一般在20%以上[10-11]。引起這種差異的原因除了本身地域差異外，還可能與各地衛生條件以及當地人群對HPV的認知程度不同有關，此外由于國內還沒有規模性的普查數據，各地報道在檢測樣本總量、檢測方法等方面有所不同，因此各地HPV檢出率差異較大。但本研究通過檢測10 764例女性患者標本，HPV陽性檢出率為19.38%，較全國報道水平略低。

除地域因素外，HPV的感染也和年齡密切關系[12]。文獻報道稱HPV感染的年齡近似為“U”型分布[13]，即青年、老年感染率高，而中年感染率相對低。在本研究中，HPV感染的年齡分布趨勢和文獻報道一致，感染的主要年齡段集中在25歲以下人群和56～65歲的人群，檢出率分別為28.8%和24.32%。而36～55歲的人群檢出率則相對較低。引起這種現象的原因應該和患者的身體狀況和衛生習慣有密切關系。一般來說，青年女性免疫力較好，HPV感染后大多為一過性感染，文獻報道稱年輕婦女感染HPV后有60%至70%的患者能夠在一年內消失，而兩年內感染清除率為90%[14]。而隨著年齡增大，HPV感染率開始上升，這可能是由于女性身體免疫力以及激素水平發生變化導致[15]，此外婦女更年期后生活習慣也有改變，因此容易引起持續感染。而25歲以下女性，雖然免疫力較好，但是健康意識相對淡泊，對個人性行為和個人衛生習慣缺乏認識，導致低年齡段女性對HPV暴露可能性大，卻又對早期癥狀不重視，使得HPV在25歲以下女性中HPV檢出率和多重感染率均最高。除此之外，低年齡段女性還可能有酗酒、抽煙[16-17]以及多性伴侶等的不良行為[18]，也增高了HPV的暴露幾率。

目前，我國還缺乏規模性的HPV普查數據，雖然國外HPV感染以16型和18型為主，但我國地域廣闊，不同地域間的HPV感染有所不同。其中江西HPV檢出最多亞型依次為16型、58型和33型[19]，北京地區的報道常見亞型為16型、58型和52型[20]，浙江地區則是16型、52型、58型檢出率高[21]，此外在重慶地區檢出率較高的亞型是16型、43型和58型[8]，可見我國16型感染較為常見，其次58型的檢出率也高。而在本研究中發現海南地區HPV高危型檢出率高，依次為52型，其次為16型和58型，分別占檢出總數的16.86%、13.66%和11.21%，此外CP8304型、53型、18型和68型的檢出率也較高，均在5%以上，但在樣本中未檢出43型。說明海南地區HPV感染和國內其他地區有一定差異，這種差異除了與各地民族、流動人口的生活習慣和衛生習慣有關外，可能還與海南地理位置和本地自然條件有關，但目前HPV特定亞型對自然環境相關性的報道并不多[22]。

對HPV感染目前缺少標準化的治療方案，主要是進行抗病毒治療，因此針對HPV仍然是以預防為主。目前國際上已有二聯(16型/18型)和四聯(16型/18型/6型/11型)的HPV疫苗上市，但涉及海南常見的52型、58型尚未有相關疫苗上市。同時，HPV疫苗上市時間較短，因此其作用還有待驗證，所以目前對HVP的預防還是應通過良好的生活衛生習慣、定期檢查以及出現感染癥狀后盡早就醫、治療。通過本次研究，我們發現25歲以下的女性感染HPV的幾率較中、老年女性更高，同時多重感染幾率也高。這一結果表明海南HPV感染也有低齡化趨勢，提示在關注中、老年女性HPV感染的同時，也還需要在低年齡段女性中開展HPV的宣教和篩查，從而更有效降低宮頸癌的發生率。

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Prevalence and genotyping of human papillomavirus infection in females in Hainan province.

ZHANG Ji-ye,LI Xiao-juan,XU Wei-hua,FU Sheng-miao.Central Laboratory,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311, Hainan,CHINA

Objective To investigate the genotypes distribution of 21 common human papillomavirus(HPV) in Hainan province,rate of multiple infections and infection rates among different age groups.MethodsA total of 10 764 samples from females in Hainan were tested for 21 DNA types of HPV by PCR and film chip blot.ResultsThe HPV positive rate was 19.38%.The multiple infection rate was 4.96%,and there was relatively high infection rate among females under 25 years old.Out of the 21 subtypes of HPV,HPV-52 was the most common subtype detected, followed by subtypes HPV-16 and HPV-58.HPV-43 was not detected.ConclusionThe most prevalent HPV subtypes are HPV-52,HPV-16 and HPV-58 in Hainan province,and the highest rate of HPV infection is found in females under 25 years old.

Human papillomavirus;Genotype;Cervical cancer;Multiple infection

R730.261

A

1003—6350（2015）10—1460—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0520

2014-10-22)

符生苗。E-mail：smfu2000@126.com