免疫比濁法檢測肌紅蛋白的性能驗證及臨床應(yīng)用評估*

劉行超，曾桂芬，農(nóng) 妍，譚秋培，胡松林，羅厚龍

(中國人民解放軍第一八一醫(yī)院檢驗科，廣西桂林 541002)

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·論 著·

免疫比濁法檢測肌紅蛋白的性能驗證及臨床應(yīng)用評估*

劉行超，曾桂芬，農(nóng) 妍，譚秋培，胡松林，羅厚龍△

(中國人民解放軍第一八一醫(yī)院檢驗科，廣西桂林 541002)

目的 對免疫比濁法檢測肌紅蛋白(Mb)的檢測性能進(jìn)行評價，并對Mb的臨床應(yīng)用進(jìn)行評估。方法 檢測150例健康人(健康對照組)血清Mb水平，建立參考值范圍，評估免疫比濁法檢測Mb的準(zhǔn)確度、精密度、線性。對80例急性冠脈綜合征(ACS)患者按心電圖結(jié)果分組后，比較ACS組血清Mb濃度與健康對照組是否存在差異。對于存在差異的ACS患者，進(jìn)一步收集疾病對照組，通過繪制ROC曲線，評價Mb與其他心肌標(biāo)志物的診斷性能。結(jié)果 健康人血清Mb參考范圍為<70.22 mg/L(男)、<52.22 mg/L(女)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.39，P<0.05)。2個水平質(zhì)控檢測結(jié)果為100.31、295.50 mg/L，均在廠商允許偏差范圍內(nèi)，批內(nèi)、批間變異系數(shù)(CV)均在5%以內(nèi)，0～800 mg/L范圍內(nèi)線性良好。ACS組、非ACS組、健康對照組的Mb水平分別為(285.28±314.63)、(76.24±40.77)、(44.96±12.62)mg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Mb在ACS組中的ROC曲線下面積(AUC)為0.878。在ACS組中，Mb的診斷敏感度為80.0%，優(yōu)于肌鈣蛋白I(cTnI)的43.7%和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的57.5%。結(jié)論 免疫比濁法檢測Mb的檢測性能符合要求。

肌紅蛋白； 肌鈣蛋白I； 臨床性能驗證； 心肌標(biāo)志物

急性冠脈綜合征(ACS)是以冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂或糜爛，繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成為病理基礎(chǔ)的一組臨床綜合征[1]。ACS是嚴(yán)重危害人體健康的疾病，其發(fā)病率和病死率增長迅速，由此越來越受到醫(yī)學(xué)界的重視[2-3]。肌紅蛋白(Mb)是一種低分子的含血紅素的蛋白質(zhì)，廣泛存在于心肌和骨骼肌中，是急性心肌梗死后最早檢出的標(biāo)志物之一[4-5]。血清Mb的檢測能輔助診斷急性心肌梗死，推測心梗面積和判斷溶栓治療法成功與否，輔助診斷心肌再梗死[6]。目前Mb的檢測方法有膠體金法、放射免疫方法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、化學(xué)發(fā)光和酶聯(lián)熒光分析法[7]。本研究旨在對免疫比濁法檢測Mb的檢測性能進(jìn)行評價，并對Mb的臨床應(yīng)用進(jìn)行評估。

1 資料與方法

1.1 一般資料 ACS組：收集2014年1～7月本院確診ACS患者80例，其中男58例，女22例，年齡19～92歲。非ACS組：為同期本院住院除ACS外其他冠狀動脈病變患者50例；要求臨床已明確排除ACS可能，且年齡、性別分布與ACS組相仿。健康對照組：為同期本院健康管理中心健康查體者，其中男100例，女50例，年齡23～70歲，年齡、性別與ACS組相匹配。所有對象均排除腦血管病、肝腎疾病、周圍血管病、痛風(fēng)、糖尿病，且無急、慢性感染，手術(shù)，創(chuàng)傷及惡性腫瘤病史。

1.2 標(biāo)本采集 使用生化專用真空采血管，采集所有研究對象靜脈血4～5 mL，置室溫自然凝集，4 000 r/mim離心10 min后立即檢測。批間試驗使用的混合標(biāo)本-20 ℃保存，解凍后放置于2～8 ℃冰箱中，并在24 h內(nèi)用于分析檢測。

1.3 儀器與試劑 血清Mb、肌鈣蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)檢測采用日本Hitachi7180生化分析儀及北京九強(qiáng)公司Mb檢測試劑盒、cTnI檢測試劑盒和CK-MB型檢測試劑盒。

1.4 檢測性能評價

1.4.1 參考范圍建立 統(tǒng)計150例健康人血清Mb檢測結(jié)果。應(yīng)用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢測，采用正態(tài)分布法的單側(cè)95%參考值范圍，即<1.64s建立參考范圍。

1.4.2 準(zhǔn)確度與重復(fù)性驗證 準(zhǔn)確度驗證采用廠商配套質(zhì)控(2個水平)；重復(fù)性驗證采用4個水平的混合標(biāo)本(S1、S2、S3、S4)分別重復(fù)檢測20次，計算批內(nèi)均值與變異系數(shù)(CV)；將4個水平的混合標(biāo)本分別每日檢測2個批次，每批次各檢測2次，連續(xù)檢測20 d，計算批間均值與CV。

1.4.3 線性范圍驗證 使用濃度為800 mg/L的高值標(biāo)本，按1∶5、2∶5、3∶5、4∶5及原倍的順序手工稀釋成160、320、480、640、800 mg/L的系列濃度，按濃度由低至高檢測2次，計算平均值。并以實測均值為Y，理論值為X，使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件擬合一次(Y=aX+b)、二次(Y=aX2+bX+c)、三次(Y=aX3+bX2+cX+d)多項式方程，評價是否呈線性。

1.5 臨床性能評價 比較ACS組Mb水平與健康對照組之間的差異。如存在差異則收集相應(yīng)的疾病對照組即非ACS組50例，并將Mb與臨床常用的心肌標(biāo)志物CK-MB、cTnI進(jìn)行比較。將非ACS組與健康對照組合并作為ACS陰性組，繪制ROC曲線，比較Mb和相應(yīng)特異性標(biāo)志物的曲線下面積(AUC)，同時通過自建參考范圍上限作為切點(其他心肌標(biāo)志物切點：CK-MB為24 U/L，cTnI為1.68 μg/L)，比較Mb及其他標(biāo)志物在ACS中的敏感度和特異度。評價Mb在ACS中的診斷價值。

2 結(jié) 果

2.1 檢測性能評價

2.1.1 參考范圍建立 150例健康人血清Mb水平為(44.96±12.62)mg/L，按性別分組后，男性為(47.52±13.84)mg/L，女性為(39.84±7.55)mg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.39，P<0.05)。按<1.64s分別建立男性、女性的參考范圍，分別為<70.22 mg/L、<52.22 mg/L。

2.1.2 準(zhǔn)確度與精密度驗證 2個水平質(zhì)控檢測結(jié)果分別為100.31、295.50 mg/L，均在廠商允許偏差范圍內(nèi)[水平1為(100.0±15.0)mg/L；水平2為(299.0±30.0)mg/L]。4個水平標(biāo)本(S1、S2、S3、S4)Mb的批內(nèi)CV分別為1.35%、0.86%、0.97%、0.96%，批間CV分別為4.46%、3.65%、3.98%、4.26%，證明該試劑檢測Mb的精密度良好。

2.1.3 線性范圍驗證 一次多項式擬合方程Y=1.011X-4.9，r2=0.999。二次多項式系數(shù)a的P值為0.365(P>0.05)；三次多項式系數(shù)a的P值為0.562(P>0.05)，b的P值為0.596(P>0.05)。說明曲線在0～800 mg/L范圍內(nèi)呈線性。

2.2 臨床性能驗證

2.2.1 各組血清Mb水平比較 ACS組、非ACS組、健康對照組血清Mb水平分別為(285.28±314.63)、(76.24±40.77)、(44.96±12.62)mg/L，ACS組Mb水平明顯高于非ACS組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2.2 Mb在ACS中的診斷性能 將非ACS組與健康對照組合并作為陰性對照組，分別繪制Mb、cTnI、CK-MB的ROC曲線。對不同標(biāo)志物的ROC曲線AUC進(jìn)行比較，Mb的AUC為0.878，高于cTnI的0.749(P<0.05)，與CK-MB(0.821)基本相同(P>0.05)。Mb在診斷切點(自建參考范圍上限男70.22 mg/L、女52.22 mg/L)的敏感度為80.0%，高于cTnI的43.7%及CK-MB的57.5%，特異度為81.5%，低于cTnI的97.5%和CK-MB的97.0%。在ACS組中選取cTnI檢測結(jié)果正常的患者，繪制Mb在上述患者中的ROC曲線，結(jié)果在cTnI正常的ACS患者中，Mb的AUC為0.619，進(jìn)一步說明Mb可作為cTnI的補充指標(biāo)用于ACS的早期診斷。

3 討 論

Mb是一種新的心肌損傷的生化標(biāo)志物，在急性心肌損傷時它可以迅速從心肌細(xì)胞釋放到血液中，使血液中的Mb濃度迅速升高，12 h內(nèi)達(dá)到高峰，24 h后由腎臟清除。有研究表明，在胸痛發(fā)作的0.5～2.0 h血漿中的Mb開始升高，并可持續(xù)5～12 h。因此它是一個反映心肌損傷的早期診斷指標(biāo)，并且這個指標(biāo)的陰性結(jié)果特別有助于排除心肌梗死，其陰性預(yù)測值可達(dá)100%[8-9]。

本研究對免疫比濁法檢測Mb試劑盒的檢測性能驗證結(jié)果表明，其準(zhǔn)確性、精密度、線性均符合檢測要求。通過檢測150例健康人血清Mb水平建立參考值范圍：<70.22 mg/L(男)、<52.22 mg/L(女)，女性低于男性。ACS組血清Mb水平與非ACS組和健康對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示Mb對ACS患者的早期診斷具有一定的參考價值。通過比較ROC曲線可以綜合分析標(biāo)志物的診斷價值，本研究中Mb的AUC為0.878，優(yōu)于cTnI與CK-MB(AUC分別為0.749、0.821)，且在ACS組中，Mb在診斷切點時的診斷敏感度也優(yōu)于cTnI與CK-MB，但特異度略低于cTnI與CK-MB。

為進(jìn)一步比較Mb與cTnI在ACS診斷中的價值，對cTnI檢測正常的ACS患者繪制ROC曲線，Mb的AUC為0.619，說明Mb在ACS患者發(fā)病早期血清cTnI水平還較低時已具有一定的診斷能力。所以Mb可以在ACS早期診斷中作為cTnI及CK-MB的補充，提高整體診斷性能。以往的研究表明Mb是一種非特異性的心肌損傷標(biāo)志物，在多種疾病中均有升高[10-12]，這一點使得Mb在ACS中的應(yīng)用受到限制。因此，應(yīng)用Mb對ACS進(jìn)行早期診斷時，應(yīng)聯(lián)合檢測cTnI與CK-MB，起到優(yōu)勢互補的作用，以達(dá)到更高的靈敏度與特異度，提高ACS的綜合診斷性能，盡量減少漏診和誤診。

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Evaluation of serum myoglobin detection kit using immune turbidimetry and investigate the clinical diagnosis value of myoglobin*

LIUXing-chao,ZENGGui-fen,NONGYan,TANQiu-pei,HUSong-lin,LUOHou-long△

(DepartmentofClinicalLaboratory,the181stHospitalofPLA,Guilin,Guangxi541002,China)

Objective To evaluate the performance of serum myoglobin detection kit using immune turbidimetry and investigate the clinical diagnosis value of myoglobin.Methods 150 healthy adults were enrolled in this case control study to establish serum myoglobin (Mb) reference value.The analytical performance (accuracy,precision,linearity) of serum Mb detection kit using immune turbidimetry was assessed.Eighty patients were classified into different acute coronary syndrome groups according to their electrocardiographic examination.Serum Mb level of ACS group was compared with that of normal control group.In ACS group with statistical difference,benign disease groups were further collected.Receiver operating characteristic (ROC) curve and area under curve (AUC) were used to evaluate the diagnostic value of Mb compared with other cardiac markers.Results The reference interval of Mb was <70.22 mg/L (males) and <52.22 mg/L (females) respectively,which had statistically significant difference(t=4.39，P<0.05).The detection result of 2 level controls was 100.31 and 295.50 mg/L respectively,which were both within the acceptable limits.The within-lot and between-lot variations of four level samples were both below 5%.There was a good linear correlation between theoretical value and actual detection result in range of 0-800 mg/L.The serum level of Mb was (285.28±314.63),(76.24±40.77) and (44.96±12.62) mg/L in ACS group,non-ACS group and normal control group respectively,which had statistically significant difference(P<0.05).The AUC of Mb was 0.878 in ACS group.In ACS group,the sensitivity of Mb was higher than that of cTnI and CK-MB (80.0%,43.7% and 57.5%).Conclusion Experimental results show that serum myoglobin detection kit using immune turbidimetry has good performance in the precision and linearity.

myoglobin; cardiac troponin I; clinical performance verification; cardiac markers

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)資助項目(2011AA02A111)。

劉行超，男，副主任技師，碩士，主要從事臨床生化及微生物耐藥性研究。△

，E-mail：luohoulong297@126.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.003

A

1672-9455(2015)07-0883-02

2014-10-20

2015-01-05)