進口紅葡萄酒中致病微生物的分離與鑒定分析

蘇遠科，呂斐，王志宏，羅曉

龍口出入境檢驗檢疫局，山東煙臺 265700

隨著經濟社會發展和消費能力的提高，葡萄酒的消費日益增長[1-2]。我國是葡萄酒消費大國，也是葡萄酒進口大國。葡萄酒進口數量的增加要求食品監督管理部門在科學管理、服務企業的基礎上要提高檢驗檢測水平，保證進口葡萄酒的質量安全。該研究對進口紅葡萄酒中致病菌分析，為葡萄酒進口監管提供參考[2]。

1 資料與方法

1.1 材料與試劑

樣品來源與本單位抽檢的近5年進口的來自6個地區的120批紅葡萄酒，酒精濃度為12.5%；培養基及生化鑒定試劑均來自北京陸橋生物技術有限公司；全自動微生物鑒定系統購自生物梅里埃公司。其余試劑為市售分析純。

1.2 樣品菌落總數檢測

菌落總數檢測參照GB4789.2-2010標準進行檢測，計數平板選擇菌落數為30-300cfu平板，菌落數計數依據兩個平板總數取平均數作為樣品菌落總數。

1.3 病原菌分離及鑒定

將樣品接種至營養肉湯培養基中36℃增菌24 h，并將增菌也劃線接種至選擇培養基，觀察菌落形態并進行革蘭氏染色；將疑似菌落接種至血平板上于36℃培養24 h分離單菌落，進行全自動細菌鑒定系統進行致病菌的鑒定與分型。

2 結果

2.1 不同地區進口葡萄酒菌落總數檢測情況

該文發現不同地區進口葡萄酒的菌落總數存在較大的差異，且120批進口葡萄酒中有3批菌落數超標，占2.5%，見表1。

2.2 單核細胞增生李斯特菌鑒定分析

該文發現單核細胞增生李斯特菌在血平板上呈現灰白色菌落，菌落較小，且具有β-溶血環；在改良的McBride瓊脂和酵母浸膏胰酪大豆瓊脂平板上接受45°光照射后呈現灰色菌落；革蘭氏染色鏡檢發現菌體為革蘭氏陽性短桿菌，呈球狀，無芽孢。菌體經全自動微生物鑒定系統鑒定后為單核細胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）。

表1 不同地區進口葡萄酒菌落總數檢測情況

2.3 尿放線桿菌生化鑒定分析

該文發現在尿放線菌主要生長在瓊脂平板中下層，在BP平板上菌落形態較大，呈黑色，在血瓊脂平板上生長，但不具有溶血圈，革蘭氏染色鏡檢發現菌體為革蘭氏陰性桿菌，經全自動微生物鑒定系統鑒定為尿放線桿菌（Actinobacillus ureae）。

3 討論

現代社會人們生活水平的提高促進了葡萄酒消費的增長，且進口葡萄酒的銷量也逐年升高。微生物項目是進口食品質量控制的關鍵指標。因此，為保證進口葡萄酒的質量必須加強該領域的檢測和監管。該研究對在進口紅葡萄酒中致病菌分析時發現6個地區的120批進口葡萄酒中菌落總數超標有3批，占2.5%，且從不合格樣品中檢出單核細胞增生李斯特菌和尿放線菌等致病菌。因此，不同地區進口葡萄酒微生物差別較大，要加強監管。

單核細胞增生李斯特菌在自然界中廣泛存在，能夠耐受較大的滲透壓，是食品中常見的致病菌之一[3-4]。單核細胞增生李斯特菌為細胞內寄生菌，能夠引起患者呼吸急促、嘔吐、昏迷或出血性皮疹、自然流產甚至死亡。在對2007—2011年甘肅省即食食品中單核細胞增生李斯特菌監測分析的研究中發現即食食品中單核細胞增生李斯特菌污染嚴重，檢出率為1.98%[5]。在對昆明市西山區食品中單核細胞增生李斯特菌的污染狀況調查時也發現食品中及食品加工工具上該細菌污染較為嚴重，存在引起公共衛生問題的安全風險，要加強食品安全監管[6]。在對南京地區食品中單核細胞增生李斯特菌分離鑒定時也發現單核細胞增生李斯特菌是也引起食物中毒的重大的安全隱患，且該地區中單核心包增生李斯特菌的檢出率高達16.9%。該文中也發現葡萄酒單核細胞增生李斯特菌的檢出率為1.67%，且葡萄酒中分離的單核細胞增生李斯特菌在血平板上呈現灰白色菌落，菌落較小，且具有β-溶血環。

尿放線桿菌也是食品中常見的致病菌，以往的報道中發現葡萄酒中也檢出尿放線桿菌。頓玉慧等發現依據GB4789.2檢測從菌落總數超標的萊莎麗莊園進口的葡萄酒中檢出尿放線桿菌和鶉雞腸球菌[8]。同時，作者經過多次增菌和分離培養，也從法國進口的菌落總數超標的葡萄酒中分離獲得一株尿放線桿菌[9]。該文中也從進口葡萄酒中分離得到一株尿放線桿菌，占0.83%。因此，要加強進口葡萄酒中尿放線桿菌的檢測。

因此，不同地區進口葡萄酒微生物菌落總數差別較大，且可能檢測出致病菌。為控制進口葡萄酒的質量，要加強該領域的監管力度。

[1]韋旭陽.中國進口葡萄酒市場價格主要影響因素研究[D].西北農林科技大學,2012.

[2]胡竹韻,王星晨,陶永勝,等.中國進口紅葡萄酒香氣特征與價格之間的關聯分析[J].食品科學，2015，5(8)：25-29.

[3]張超，陳國薇，楊玉萍，等.活性氧調節單核細胞增生李斯特菌菌膜形成[J].食品科學，2013，6(23)：189-193.

[4]石磊，王文燕，閆鶴.豬肉中單核細胞增生李斯特菌的分離與耐藥性研究[J].現代食品科技，2013，22(12)：2826-2829，2908.

[5]胡曉寧，蘇誠玉，權玉玲.2007-2011年甘肅省即食食品中單核細胞增生李斯特菌監測分析[J].疾病預防控制通報,2013,6(3):50-52.

[6]彭俊，楊淞，王玨，等.昆明市西山區食品中單核細胞增生李斯特菌的污染狀況調查[J].中國食品衛生雜志,2014,7(1):74-76.

[7]葉艷華，江曉，王煒，等.南京地區食品中單核細胞增生李斯特菌分離鑒定[J].中國臨床研究,2011,16(12):1146-1147.

[8]頓玉慧，徐建設，吳海，等.進口葡萄酒中檢出鶉雞腸球菌和尿放線桿菌的報告[J].中國國境衛生檢疫雜志,2007,9(6):376-378.

[9]頓玉慧，鄭啟偉，徐建設，等.從進口葡萄酒中分離出尿放線桿菌[J].中國食品衛生雜志，2008，16(4)：322-324.