自體CIK細胞聯合化療二線治療晚期非小細胞肺癌療效觀察

王金爍　謝澤新　李慧杰　關麗云　董佳

自體CIK細胞聯合化療二線治療晚期非小細胞肺癌療效觀察

王金爍謝澤新李慧杰關麗云董佳

【摘要】目的觀察自體細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)聯合培美曲塞二線治療晚期非小細胞肺癌的療效。方法回顧性分析經病理學確診的晚期非小細胞肺癌患者71例，一線化療后復發或進展。隨機分為2組，治療組35例，采用CIK細胞聯合培美曲塞單藥化療。患者每1個化療周期結束后序貫1個周期的自體CIK細胞回輸為1個療程治療，連續2個療程;對照組36例，采用單藥培美曲塞化療，療程為2周期。治療結束后對2組的近期療效、免疫功能、不良反應進行評價。結果治療組客觀緩解率(ORR)為48.57%，對照組為41.67%，差異無統計學意義(P＞0.05) ;治療組疾病控制率(DCR)為85.71%，對照組為63.89%，差異有統計學意義(P＜0.05)。治療組T細胞亞群CD3+、CD4+、CD(56)升高，CD4+/CD8+比值上升，差異有統計學意義(P＜0.05) ; CD8+治療前后變化不大(P＞0.05)。在不良反應方面，治療組白細胞減少、血紅蛋白減少和胃腸反應發生率明顯低于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論自體CIK細胞回輸安全，副作用小，與培美曲塞聯合二線治療晚期非小細胞肺癌可以提高近期療效，減輕化療不良反應，提高患者免疫功能，值得臨床推廣。

【關鍵詞】自體CIK細胞;培美曲塞;肺癌，非小細胞

作者單位: 050011河北省石家莊市第三醫院腫瘤科(王金爍、關麗云)，心胸外科(謝澤新)，檢驗科(董佳) ;河北省石家莊市第一醫院腫瘤二科(李慧杰)

E-mail: lihuijie302@ sina.com

肺癌是世界范圍內發病率最高的腫瘤，是導致患者死亡的重要原因，其中非小細胞肺癌占80%以上，是臨床常見的惡性腫瘤，由于起病隱匿，多數患者就診時已為晚期，化療在提高晚期非小細胞肺癌(NSCLC)生活質量、延長生存期方面起著重要作用。然而肺癌一線化療總緩解率不高，許多患者在化療過程中或化療后出現疾病進展，需要進行二線治療。培美曲塞(pemetrexed，PEM)是一種新型多靶點抗葉酸藥物，具有高效低毒特點［1］。2004年8月被美國FDA批準治療局部晚期或轉移性NSCLC二線藥物［2］。但化療同時會影響機體的免疫功能，導致許多患者因不能耐受化療不良反應而中斷化療。隨著分子生物學和腫瘤免疫學的不斷發展，以免疫治療為基礎的生物治療模式越來越受到人們重視。細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)是在多種細胞因子的誘導下生產的異質性細胞群，不僅對腫瘤細胞具有直接殺傷作用，還可調節機體免疫功能，是過繼免疫治療中的效應細胞，近年來已嘗試應用于實體瘤的治療中［3］。石家莊市第三醫院腫瘤科收集2011年6月至2014年6月晚期非小細胞肺癌71例，進行臨床療效觀察，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料以2011年6月至2014年6月在石家莊市第三醫院就診的晚期非小細胞肺癌71例為研究對象，其中男45例，女26例;年齡46～71歲，平均年齡(59.8±1.3)歲;ⅢB期18例，Ⅳ期53例。按入院順序隨即分為治療組(n=35)和對照組(n=36)。治療組中，男25例，女10例;腺癌23例，大細胞癌9例，其他3 例;平均年齡(59.6±2.8)歲。對照組中，男26例，女10 例;腺癌22例，大細胞癌10例，其他4例;平均年齡(60.1±3.1)歲。2組患者在年齡、性別比以及疾病種類等比較均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。所有病例均經病理或細胞學證實，并按新的肺癌國際分期法TNM分期:Ⅲ～Ⅳ期，一線化療后復發或進展，根據RESIST標準，至少有一個可測量病灶，化療前Karnofsky評分≥60分，預計生存期＞3個月，化療前血常規、心電圖、肝腎功能、心肌酶、血凝四項無明顯異常，血常規中單核細胞+淋巴細胞≥2.0×109/L，無嚴重病毒、細菌感染，對生物制品無過敏反應者，符合人體試驗倫理委員會制定的倫理學標準，均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1對照組:所有患者均接受培美曲塞單藥化療，培美曲塞500 mg/m2第1天加入0.9%氯化鈉100 ml中靜脈滴注10 min以上。培美曲塞使用前1周開始口服葉酸400 μg，直到培美曲塞治療結束后3周;培美曲塞使用前1周開始肌內注射維生素B12 1 000 μg，此后每3個周期肌內注射1次，至化療結束;在培美曲塞使用前1 d，使用當天及使用后1 d，口服地塞米松4 mg，2次/d。同時給予格拉司瓊等藥物止吐治療。每21天為1個周期，連用2周期后評價療效。

1.2.2治療組:在接受培美曲塞單藥化療的基礎上，加用靜脈回輸自體CIK細胞治療。于化療前2 d采用血細胞單采儀收集外周血單個核細胞，第3天應用培美曲塞單藥化療，化療方法同前。經初步得到的外周血細胞經實驗室離心、洗滌、純化后置于CO2孵育箱中，在體外進行擴增培養14 d。當CIK細胞總數達到4×109/L個以上、培養基經細菌、霉菌培養為陰性后開始收集。采用0.9%氯化鈉溶液洗滌，加入5%人血白蛋白、IL-2等，最后加0.9%氯化鈉溶液配制成100 ml混懸液，約含CIK細胞數為(1～2)×109/L。患者于第1個化療周期結束后的第24小時開始靜脈回輸自體CIK細胞，每次200 ml，1次/d，連續2 d為1個治療周期。第1個化療周期結束待血常規恢復正常后，于第2個化療周期前2 d，再次采集外周血單個核細胞進行培養，培養14 d，于第2周期化療結束后第24小時再次回輸，方法同前。1個化療周期序貫1個周期的細胞過繼免疫治療為1個療程。自體CIK細胞輸注時需由醫護人員嚴密監護，輸注前30 min給予肌內注射苯海拉明20 mg以預防過敏反應，輸注過程中囑護士每隔10 min輕輕擠壓轉輸袋底部，使沉淀細胞重新懸浮。如治療期間出現不可耐受的不良反應及時終止治療［4］。治療2個療程后評價療效。

1.3觀察指標

1.3.1腫瘤客觀療效評價:所有患者均接受2個周期治療后進行療效評價。根據美國國家癌癥研究所實體瘤療效評價標準(NCI-RECIST)對所有靶病灶和非靶病灶進行療效評價［5］，完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩定(SD)、疾病進展(PD)。客觀緩解率(objective response rate，ORR)為(CR+PR)/總例數× 100%，疾病控制率(disease control rate，DCR)為(CR+PR+SD)/總例數×100%。

1.3.2T細胞亞群檢測:所有患者于治療前和治療2周期后均抽取外周血，應用流式細胞儀檢測T細胞亞群CD+3、CD+4、CD+8、CD56、CD+4/CD+8，化療期間每周監測血常規及肝功能1次。

1.3.3不良反應分析:按照WHO標準進行評價，分為0～Ⅳ度［6］。研究主要關注的不良事件為骨髓抑制及胃腸道反應。

1.4統計學分析應用SPSS 17.0統計軟件，計量資料滿足正態性要求，以珋x±s表示，采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1近期療效71例晚期非小細胞肺癌患者均可評價療效，經評價無患者獲得CR，治療組PR 17例，SD 13例，PD 5例，客觀緩解率(ORR)為48.57%，疾病控制率(DCR)為85.71%;對照組PR 15例，SD 8例，PD 13例，ORR為41.67%，DCR為63.89%。2組ORR比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，DCR差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1　2組患者近期療效比較　例(%)

2.2T淋巴細胞亞群變化2組間比較，治療前各項指標無明顯異常(P＞0.05) ;治療組治療后較治療前CD3+、CD4+、CD56升高，CD4+/CD8+比值上升，差異有統計學意義(P＜0.05)，且與對照組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，CD8+治療前后變化不大(P＞0.05) ;對照組治療前后比較差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2　2組治療前后對T細胞亞群表達的影響　±s

表2　2組治療前后對T細胞亞群表達的影響　±s

注:與治療前比較，*P＜0.05;與治療組比較，#P＜0.05

項目　治療組(n=35)治療前　治療后對照組(n=36)治療前　治療后CD3+　55±5　58±5*　56±5　55±5#CD4+　31±6　35±6*　30±6　30±6#CD8+　29±5　29±5　30±5　28±5#CD4+/CD8+　1.27±0.35　1.49±0.54*　1.18±0.26 1.21±0.34#CD56　18±4　21±5*　20±5　18±4#

2.32組不良反應發生率比較治療組白細胞減少、血紅蛋白減少和胃腸反應發生率分別為51.43%、45.71%、37.14%;對照組白細胞減少、血紅蛋白減少和胃腸反應發生率分別為75.00%、69.44%、61.11%，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3　2組不良反應率比較　例

3　討論

復發性晚期非小細胞肺癌患者的治療主要采用以全身化療為主的綜合治療，針對一線不成功的患者，采用二線治療有利于緩解患者病情［7］。但患者本身腫瘤負荷較重，免疫功能低下，不能繼續耐受手術及放化療，然而病情持續進展，新的治療手段尤為重要。培美曲塞(pemetrexed，PEM)是一種新型多靶點抗葉酸藥物，通過抑制胸苷酸合成酶、二氫葉酸還原酶、甘氨酰胺核苷甲酰基轉移酶的活性，減少嘌呤及胸腺嘧啶核苷酸生物合成，影響腫瘤細胞DNA和RNA合成，從而發揮抗腫瘤作用［8］。培美曲塞在治療腺癌和大細胞癌方面的總生存期優于鱗癌。惡性腫瘤患者機體免疫功能低下已經成為共識，當宿主免疫功能低下或者受抑制時，腫瘤的發病率增高。當腫瘤進行性生長時，患者免疫功能進一步受到抑制［9］。生物治療是繼手術、放療、化療后的第四種治療模式［10］。腫瘤生物免疫治療是指從自體外周血中分離的單個核細胞經過體外激活和擴增后輸入患者體內，調節和增強機體免疫功能的一種最新腫瘤治療技術，能較徹底清除腫瘤細胞。

CIK是一種新型免疫活性細胞。將人外周血單個核細胞在體外經多種細胞因子共同刺激后獲得的一群異質細胞，具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK樣的非MHc限制性殺瘤作用。CIK細胞具有增值速度快、殺瘤活性高、抗凋亡特性及殺瘤效應不受癌細胞多重耐藥的影響等多種獨特優勢［11］。在腫瘤綜合治療中，自體CIK細胞治療占有越來越重要的地位。

肺癌的發生與基因的改變及免疫功能下降有密切關系，因此晚期非小細胞肺癌患者，機體免疫功能下降，免疫監視能力降低，容易發生免疫逃逸現象。生物治療抗腫瘤的主要免疫抑制是激活免疫細胞如NK細胞、T淋巴細胞等完成的。其中T淋巴細胞是機體細胞免疫主要參與者，是免疫應答的核心細胞，主要有兩個亞群，即輔助性T細胞(Th) CD4+和抑制性T細胞(Ts) CD8+。機體的免疫平衡系統主要是由這兩類細胞相互影響來維持。CD4+/CD8+為免疫調節的一項指標，其比值的降低是疾病嚴重程度及預后不良反應的重要指標。CD4+/CD8+比值及NK細胞低于正常時則被認為免疫調節功能紊亂，容易發生惡性腫瘤，只有在CD4+/CD8+比值及NK細胞正常時，才能夠發揮正常的抗腫瘤作用。

CIK細胞殺傷靶細胞原理: CIK細胞能以不同的機制識別腫瘤細胞，通過直接的細胞質顆粒穿透封閉的腫瘤細胞膜進步胞吐，實現對腫瘤細胞的裂解;通過誘導腫瘤細胞凋亡殺傷腫瘤細胞;分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多種抗腫瘤的細胞因子; CIK細胞回輸后可激活機體免疫系統，提高機體的免疫功能。CIK細胞治療腫瘤比較簡單，從患者的外周血中抽取部分免疫細胞于體外進行擴增和誘導，培養一定時間后，患者自身免疫細胞的數量和抗瘤活性都大大提高，再將這些激活的具有強大抗腫瘤作用的免疫細胞回輸至患者體內，從而降低了腫瘤復發和轉移的機率，改善了患者的生活質量，延長了患者的生存期。本研究采用CIK細胞聯合培美曲塞二線治療晚期非鱗非小細胞肺癌，治療組近期客觀緩解率(ORR)為48.57%，疾病控制率(DCR)為85.71%;對照組0RR為41.67%，DCR為63.89%。2組客觀緩解率比較差異無統計學意義(P ＞0.05)，疾病控制率比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。說明CIK細胞聯合化療可以提高腫瘤治療的效果。在T細胞亞群的觀察方面，治療組治療后較治療前CD+3、CD+4、CD56升高，CD+4/CD+8比值上升，差異有統計學意義(P＜0.05) ; CD+8治療前后變化不大(P＞0.05)。說明CIK聯合化療能顯著改善患者的免疫功能狀態，提高患者的免疫力。在不良反應反面，CIK細胞治療可以降低骨髓抑制和惡心、嘔吐的發生率，減少因化療不良反應所產生的痛苦，明顯提高患者的生活質量。此外，該研究顯示，自體CIK細胞在治療過程中主要不良反應為畏寒、發熱，僅少數患者可出現乏力、肌肉酸痛、頭痛等類似感冒樣癥狀，均可自行緩解或對癥治療后恢復正常，患者耐受性好，具有較高的安全性。

通過本研究結果顯示，對于晚期NSCLC患者，自體CIK細胞過繼免疫治療可以緩解和穩定瘤灶，控制瘤體發展，改善患者生活質量，提高患者免疫功能，取得良好的臨床療效，增加患者化療的依從性，延長患者生存期，值得在臨床上推廣使用。

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(收稿日期:2014－11－12)

通訊作者:李慧杰，050011河北省石家莊市第一醫院腫瘤二科;

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.10.010

【文章編號】1002－7386(2015) 10－1477－03

【文獻標識碼】A

【中圖分類號】R 734.2