黃連不同炮制品中總生物堿含量的測定

(1.沈陽工學院生命工程學院，遼寧撫順 113122;2.遼寧格林生物藥業(yè)集團有限公司，遼寧沈陽 110000;3.中國醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院，遼寧沈陽 110000;4.山東安池農(nóng)牧科技有限公司，山東濟南 250220)

胡 爽1，劉 峰2，陳美言3，劉曉輝4

黃連是臨床廣為使用的一味中藥，其為毛茛科植物黃連、三角葉黃連或云連的干燥根莖，其味苦、性寒，歸心、脾、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功用。近年來，黃連炮制品種類較多，地理分布也較廣泛，因此其藥材質(zhì)量不易控制。該試驗采用紫外－分光光度法，對黃連及炮制品藥材中的總生物堿含量進行測定［1］，對其質(zhì)量監(jiān)控具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器。紫外－可見分光光度計(安捷倫U－3010型)，HH－4數(shù)顯恒溫水浴鍋(天津匯科儀器設(shè)備有限公司)，AS3120A超聲波清洗器(杭州匯爾儀器有限公司)，AR2140電子分析天平(上海力衡儀器儀表有限公司)。

1.1.2 試藥。黃連藥材均由四川購進，小檗堿對照品由成都普思生物科技有限公司提供，甲醇、乙醇等均為分析醇。

1.1.3 炮制品制備。黃連炮制品均由黃連藥材，參照《中藥炮制學》［2］、《中華人民共和國藥典》［3］、《中藥炮制學辭典》［4］進行制備。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液的制備。精密稱取鹽酸小檗堿對照品4.001 mg，將其置于25 ml容量瓶，加入適量甲醇鹽酸溶液(100∶1)［5］，待溶解后稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為0.160 1 mg/ml備用;精密吸取濃度為0.160 1 mg/ml的鹽酸小檗堿對照品溶液1.05 ml至25 ml的容量瓶中，向其加入0.05 mol/L的H2SO4溶液定容［6］，制得對照品溶液，其濃度為0.006 73 mg/ml。

1.2.2 供試品溶液的制備。精密稱取黃連及炮制品藥材，約3.0 g，置圓底燒瓶中。加入10倍量60%乙醇，加熱連續(xù)回流提取3次，每次1 h。濾過，合并，定容至100 ml容量瓶中，精密移取0.20 ml用0.05 mol/L的硫酸水溶液定容至100 ml容量瓶，作為供試品溶液。

1.2.3 檢測波長的確定。取0.05 mol/L硫酸溶液為空白溶液，置1 cm吸收池中，再取適量鹽酸小檗堿對照品(0.006 73 mg/ml)加入到吸收池中，在200～500 nm波長區(qū)間內(nèi)掃描;另取黃連藥材供試品溶液，置1 cm吸收池中，在200～500 nm波長掃描，發(fā)現(xiàn)對照品及黃連藥材供試品最大吸收在345 nm處，且易于測定，雜質(zhì)峰干擾較少(圖1)。最終確定345 nm作為檢測波長。

1.2.4 方法學考察。

1.2.4.1 線性關(guān)系的考察。精密移取小檗堿對照品0.5、0.7、1.3、1.5、2.0 ml，用硫酸溶液(0.05 mol/L)定容至 25 ml容量瓶。按照“1.2.3”項下方法進行吸光度測定。以對照品溶液取樣量為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.4.2 精密度試驗。取同一黃連生品藥材的供試品溶液，分別精密移取5份，測定其吸光度，并計算峰面積的RSD值。

1.2.4.3 穩(wěn)定性試驗。取同一黃連生品藥材的供試品溶液置室溫下，分別在0、3、6、9、12、24 h 進行測定，計算峰面積的RSD值。

1.2.4.4 重復(fù)性試驗。精密稱取黃連藥材5份，每份3.0 g，按“1.2.2”項下方法制備黃連藥材的供試品溶液，計算峰面積的RSD組。

1.2.4.5 加樣回收率試驗。取已知含量的黃連藥材5份，每份1.0 g。分別加入小檗堿對照品132.49 mg(所含總生物堿的含量與1 g黃連藥材所含總生物堿量相同)。按“1.2.2”項方法制備黃連生品藥材供試品溶液，測定回收率。

1.2.5 黃連生品及炮制品中總生物堿的測定。取黃連藥材及炮制品藥材各約3.0 g，精密稱定，按“1.2.2”項下方法分別制備供試品溶液，按“1.2.3”項下方法對黃連藥材及炮制品藥材進行測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學考察

2.1.1 線性關(guān)系考察。在345 nm檢測波長下，繪制標準曲線(圖2)，確定回歸方程為 Y=2.818 7X+0.018 1，R2=0.999 7，表明樣品在0.080 05～0.330 22 mg線性關(guān)系良好。

2.1.2 精密度試驗。按“1.2.4.2”方法操作，計算峰面積的RSD=0.91%，表明該試驗精密度較好。

2.1.3 穩(wěn)定性試驗。按“1.2.4.3”方法操作，計算峰面積的RSD=1.89%，表明供試品具有較好的穩(wěn)定性。

2.1.4 重復(fù)性試驗。按“1.2.4.4”方法操作，計算峰面積的RSD=1.60%，表明該試驗的重復(fù)性良好。

2.1.5 加樣回收率試驗。由表1可見，黃連生品藥材供試品溶液的平均回收率為97.98%，RSD為1.00%，表明該方法回收率較好，具有可行性。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=5)

2.2 黃連生品及炮制品中總生物堿的測定 從表2可以直觀看出8種炮制品總生物堿含量有所不同，酒制黃連總生物堿的含量最高(137.3 mg/g)，碳制黃連總生物堿的含量最低(108.6 mg/g)，其余黃連炮制品中總生物堿含量相差不大。結(jié)果表明，炮制方法不同，生物堿的溶出率有所改變。

3 討論

目前的文獻報道多是研究黃連生品藥材的質(zhì)量控制，對于其相關(guān)炮制品研究的文獻報道較少，且對于炮制品的研究種類并不全面。該試驗研究的黃連炮制品種類較為廣泛，采用8種炮制方法進行炮制，可以全面了解不同炮制品與生品間有效成分的含量變化關(guān)系，為臨床用藥提供有利依據(jù)。

此外，該試驗還對黃連中總生物堿的提取工藝進行了考察。通過考察乙醇、水、水(含1%HCL)和甲醇等提取溶劑，確定乙醇為最佳提取溶劑;通過考察超聲提取、加熱回流提取、索氏提取等提取方式，確定加熱回流提取效率最高;分析正交設(shè)計試驗結(jié)果，選取10倍量60%乙醇，加熱回流提取60 min，共提取3次為最好提取工藝。

表2 黃連生品及炮制品中總生物堿的測定結(jié)果(n=5)

［1］黃小平，張毅，鐘國躍.不同產(chǎn)地和生長年限黃連的總生物堿含量測定［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2003，11(11):42.

［2］葉定江，張世臣，潘三紅.中藥炮制學［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，1999:216.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部［S］.北京:化學工業(yè)出版社，2005:141.

［4］葉定江，原思通.中藥炮制學辭典［M］.上海:上?？茖W技術(shù)出版社，2005:6.

［5］吳春紅，謝穎.RP－HPLC法測定黃連中小檗堿含量［J］.華西醫(yī)學，2006，21(3):467.

［6］徐曉宏，張鐵軍，廖茂梁，等.打孔吸附樹脂分離純化黃連總生物堿的工藝研究［J］.中草藥，2007，4(8):1167.