不同地區白術飲片中白術內酯的含量測定

★ 許舒顏 (深圳市寶安區石巖醫院 廣東 深圳518108)

白術主產浙江、安徽等地，是著名的“浙八味”之一，其中浙江磐安、新昌、嶸州被認為是白術藥材的道地產區［1］。由于我國白術產地較多，各產地環境、氣候、地貌等均有差異，因此所產白術藥材功效及成分含量差異較大［2］，本研究采用高效液相色譜方法對不同地區白術飲片中白術內酯Ⅱ和白術內酯Ⅲ的含量進行了測定，通方法學考察驗證，該方法精密度、穩定性、重復性、回收率試驗良好，方法可行，現整理報道如下:

1 材料與儀器

1.1 儀器 島津-LC20AT高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜工作站(日本島金有限公司);TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);AB-135型萬分之一電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);KH 300P型超聲波清洗器(昆山禾創超聲儀器有限公司);SHZ-3循環水多用真空泵(上海市滬西分析儀器上有限公司);FZ102微型植物試樣粉碎機(北京市永光明醫療儀器廠)。

1.2 試劑 甲醇(分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司)，所用試劑均為分析純，水為超純水(浙江杭州娃哈哈集團)，甲醇(色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司)。

1.3 試藥與藥材 白術內酯Ⅱ標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0906045);白術內酯Ⅲ(中國藥品生物制品檢定所，批號為0804061);白術產地見表1。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑;流動相甲醇:水(45∶55)，檢測波長為335nm，進樣量10μL，流速1.0mL/min。

表1 白術藥材來源

2.2 標準品溶液的制備 取白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ對照品適量，精密稱取1mg，置100mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL含0.01mg的溶液，即得標準品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 取藥白術飲片，粉碎，過120目篩或者四號篩。精密稱取白術樣品粉末1.0g，加入帶有塞得錐形瓶中，精密稱定100mL甲醇溶液，加入至錐形瓶中，稱定重量，超聲30min，取出，放涼，在稱定重量，加入甲醇不足減少的重量，混勻，過濾，量取濾液10mL，加入50mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混勻，即得所需樣品溶液［3］。

2.4 線性關系考察 分別精密量取上述配好的0.01mg/ml標準品溶液2，5，10，15，20μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積數值，以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線得到線性回歸方程白術內酯Ⅱ:Y=2 221.2X+7 843.1，r=0.999 6;白術內酯Ⅲ:Y=1 844.1X+5 865.1，r=0.999 7，對照品在2.0～20.0μL范圍內線性關系良好，樣品濃度與峰面積成直線關系。

2.5 精密度試驗 精密量取2.2項下配制的標準品溶液連續重復測定6次，計算平均值及RSD值。結果顯示標準品和樣品RSD值分別為0.32%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 精密量取連續進標準品溶液，進樣量為10μL，每隔一定時間測定一次峰面積，測定24h，根據測得對照品峰面積，計算白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ含量的平均值及RSD值。試驗結果顯示，在24h內RSD值為1.12%，1.23%，表明樣品溶液在24 h內基本穩定。

2.7 重復性試驗 精密稱取標準品溶液一份，連續進針，進樣量為10μL，精密稱取2.3項下白術樣品溶液6份，分別測定峰面積值。計算白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ含量平均值、RSD值，重復性試驗結果顯示，白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ含量的RSD值為1.18%，1.24%，表明該方法重復性較好。

表2 白術內酯Ⅱ回收率試驗測定結果

表3 白術內酯Ⅲ回收率試驗測定結果

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取同一批次白術藥材粉末1g，按比例精密加入2.2項下標準品，制備低、中、高劑量組，每組平行3份，按上述的方法處理后，依次測定，計算回收率、RSD值。加樣回收率考察結果顯示，所有供試品回收率均介于95%～105%之間，樣品的平均回收率為99.98%，99.63%;RSD值為1.03%，1.25%，均小于3%，說明本法準確性較好，方法可行。結果見表2-3。

2.9 含量測定結果 取9批不同產地的白術樣品按照上述方法提取的樣品溶液，按照2.3項下的方法處理，制備供試品溶液，測定相應樣品的峰面積，根據對照品與樣品的峰面積計算白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ含量，結果見表4。

表4 9個不同產地白術含量測定結果

3 討論

本研究對測定波長進行了選擇，取白術內酯對照品、供試品及空白溶液，在200～400nm波長范圍進行光譜掃描。供試品和對照品在335nm處有最大吸收，而空白溶液無吸收。測得數據與查詢相關報道文獻接近。白術提取液最大吸收波長與對照品最大吸收波長一樣，故將335nm作為測定波長。相關研究報道，白術，在制藥、香料、化妝品、保健食品［24］等許多領域廣闊的市場前景，可以說是中藥之瑰寶［4］。相信隨著對白術進一步的研究，白術一定會在醫藥領域、化妝品領域、食品等相關領域發揮越來越大的作用。綜上所述，不同地區白術飲片中白術內酯Ⅱ和白術內酯Ⅲ的含量有較大的差異，通過方法學考察驗證，該方法精密度、穩定性、重復性、回收率試驗良好，方法可行。

［1］葛建，樓紀東，林芳，等.反相高效液相色譜法同時測定參苓白術顆粒中白術內酯Ⅱ和白術內酯Ⅲ的含量［J］.時珍國醫國藥.2009，12(6):152-154.

［2］段啟，李彩萍，趙珍東，等.高效液相色譜法測定清炒白術中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ［J］.中南藥學.2009，14(5):614-616.

［3］宿廷敏，王敏娟，阮時寶.白術的化學成分及藥理作用研究概述［J］.貴陽學院學報(自然科學版).2008，4(2):135-137.

［4］段啟，許冬謹，謝晨.HPLC法測定白術不同炮制品中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ［J］.中草藥.2009，21(9):886-888.