射干不同有效成分體外抗病毒藥效學作用分析

徐 倩

(南昌市洪都中醫院 制劑中心，江西 南昌 330008)

?

射干不同有效成分體外抗病毒藥效學作用分析

徐 倩

(南昌市洪都中醫院 制劑中心，江西 南昌 330008)

目的：觀察分析射干各有效成分的體外抗病毒藥學作用。方法：采用組織細胞培養方法，觀察分析射干有效成分對皰疹I、呼吸道合胞病毒、柯薩奇16、腺病毒3型、皰疹Ⅱ及腺病毒7型等病毒的對抗作用。結果：經分析發現，除2號和6號外，射干各有效成分均沒有毒界線藥液，同時對各病毒致細胞病變均有抑制作用，如腺病毒3型和7型、柯薩奇16、呼吸道合胞病毒及皰疹等。結論：除2號和6號以外，射干不同有效成分對各種病毒均具有不同程度的對抗作用。

抗病毒；射干；有效成分；藥效學

射干是一種多年生草本植物，其根狀莖呈不規則塊狀，顏色為黃色或黃褐色，莖直立。該植物須根較多，莖高一般為1～1.5m，為實心[1-2]。本文就射干不同有效成分的體外抗病毒藥效學作用進行分析，觀察分析射干有效成分對皰疹I、呼吸道合胞病毒、柯薩奇16、腺病毒3型、皰疹Ⅱ及腺病毒7型等病毒的對抗作用，具體報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

以序列號1～12分裝射干不同有效成分，本研究所用受試藥物由我院研究所提供。借助于硅膠柱對射干進行分離，用不同比例的氯仿-甲醛液經洗脫獲得。受試藥物中1～11號由野鳶尾苷元、鳶尾苷元及德鳶尾苷元與次野鳶尾苷元構成，即異黃酮苷元混合物；12號則由德鳶尾苷、鳶尾苷與野鳶尾苷所構成，即異黃酮苷混合物。在溫度為120℃及0.1MPa高壓條件下進行滅菌，滅菌時間為20min，分裝儲存于冰箱內備用，裝設容量為5mL，冰箱溫度為4℃。

所用病毒株有皰疹I、呼吸道合胞病毒、柯薩奇16、腺病毒3型、皰疹Ⅱ及腺病毒7型；細胞株包括非洲綠猴腎細胞、咽喉癌上皮細胞及宮頸癌細胞；試劑主要包含青鏈霉素母液、胎牛血清、TPCK胰酶、HEPES緩沖液、培養基及EDTA胰酶等。儀器設備有全外排式生物安全柜、二氧化碳培養箱及倒置顯微鏡等。

1.2 方法

(1)細胞株進行3～5天的復蘇傳代培養，讓其貼壁形成為單層，在折光度和立體感均較強的條件下，利用EDTA胰酶進行消化，當貼壁細胞面有針尖樣的小孔，且松動處于流動態時吸盡消化液，再添加相應細胞培養液，使細胞得以吹散，藍染色計數。將細胞數調至大概3×104/mL，接種96孔的細胞培養板中，每孔為100μ/L，18～24h后，待細胞成片切融合度達80～90%單層再應用。

(2)按比例借助細胞培養液對1～12號射干有效成分進行稀釋。在96孔培養板中接種細胞懸液，在二氧化碳含量5%、溫度36.5℃的培養箱中培養，時間一般為24h，將原培養液倒掉，借助于Hank’s液對細胞進行清洗。完成上述操作，把已稀釋的各有效成分滴加至所對應且已成為單層的各細胞株上，放置在溫度為36.5℃的二氧化碳培養箱中培養5～7天，每日于倒置顯微鏡下觀察細胞病變，做好記錄工作。

(3)以10倍梯度降低的方式對所用病毒進行稀釋，濃度為3×104/mL，采取染毒細胞病變法，把非洲猴腎細胞、咽喉癌上皮細胞及宮頸癌細胞接種于96孔培養板，并放于二氧化碳培養箱中培養，箱內溫度為36.5℃，培養時間為24h，倒掉培養液并利用Hank’s液對細胞進行清洗，把所稀釋的各病毒液接種于已成為單層的細胞板，其中呼吸道合胞病毒與腺病毒3型、7型所接種的細胞為咽喉癌上皮細胞，剩余病毒所接種的細胞為非洲綠猴腎細胞，放置二氧化碳培養箱中培養大約5天，培養溫度為36.5℃，每日于倒置顯微鏡下觀察細胞病變。在射干各有效成分對抗病毒致細胞病變上，進行細胞病變抑制實驗。

2 結果

經測定，除2號和6號外，射干各有效成分均沒有毒界線藥液，同時對各病毒致細胞病變均有抑制作用，如腺病毒3型和7型、柯薩奇16、呼吸道合胞病毒及皰疹等。射干各有效成分不同細胞毒性測定結果見表1。各病毒測定不同細胞半數感染濃度情況見表2。射干各有效成分對抗病毒致細胞病變結果見表3。

表1 射干各有效成分不同細胞毒性測定結果

3 討論

射干為鳶尾科射干屬植物，其根莖為中藥材射干主要來源，具有較為長遠的藥用歷史，收載于《中國藥典》，具有散血消腫、清熱解毒及利咽消痰等作用[3]。其抗病毒機理為扶正祛邪，現代藥理學研究表明，中草藥抗病毒作用主要經病毒繁殖期間吸附、成熟、穿入及膚質等環節被阻斷而使病毒得到抑制，或經機體免疫能力增強及機體非特異性、特異性免疫能力的加強抑制病毒。

表2 各病毒不同細胞板半數感染劑量測定結果

本研究采用病毒先吸附而后加藥的方式，觀察分析射干不同有效成分的抗病毒作用。研究結果顯示，由野鳶尾苷、鳶尾苷及德鳶尾苷所構成的異黃酮苷混合物與由野鳶尾苷元、鳶尾苷元、次野鳶尾苷元及德鳶尾苷元所構成的異黃酮苷元混合物大部分成分均具備顯著的體外抗病毒作用，究其原因可能是射干各有效成分經病毒成熟、穿入及復制等環節被阻斷，從而發揮抗病毒的功效。

表3 射干各有效成分對抗病毒致細胞病變結果

[1] 孫國祥,宋楊,張靜嫻,等.指紋定量法評估射干抗病毒注射液指紋歸屬度和藥效物質工藝收率[J].中南藥學,2009,7(6):446-451.

[2] 李國信,王光函,姜鴻,等.射干提取物在大鼠體內的藥動學研究[J].中草藥,2010,41(12):2052-2053.

(責任編輯：李嵐春)

2015-05-14

徐倩(1980-)，江西省南昌市洪都中醫院主管藥師，研究方向為中藥制劑藥理分析及質量標準。

R285

A

1673-2197(2015)18-0009-02

10.11954/ytctyy.201518005