氧化苦參堿聯合拉米夫定對慢性乙型肝炎患者免疫功能的影響

曹文智 侯文利 郭小君 魏占芳 田秀琴

慢性乙型肝炎(CHB)是乙肝病毒(HBV)感染引起的肝細胞免疫炎癥損傷，最終導致大片肝組織壞死，逐漸進展為重型肝炎、肝硬化甚至肝癌，嚴重威脅人類健康和生命安全［1］。其發病機制尚未完全闡明，研究顯示病毒持續復制和免疫調節紊亂在CHB 發生發展中發揮重要作用，且與疾病轉歸密切相關［2－4］。本研究通過觀察氧化苦參堿聯合拉米夫定對CHB 患者免疫相關指標的影響，旨在探討免疫功能在氧化苦參堿治療CHB 中的作用，為氧化苦參堿在CHB 治療領域的應用提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012 年1 月至2015 年1 月張家口市傳染病醫院收治的CHB 患者120 例，隨機分為對照組和觀察組，每組60 例。對照組中男35 例，女25 例;年齡35 ～51 歲，平均年齡(43 ±5)歲;病程1 ～10 年，平均(5.2 ±0.7)年。觀察組中男37 例，女23例;年齡32 ～54 歲，平均年齡(43 ±5)歲;病程1 ～11年，平均(6.0 ±0.8)年。2 組一般資料有可比性。

1.2 納入與排除標準 (1)納入標準:①符合2005年制定的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準［5］;②患者入組前6 個月內未接受過抗病毒治療及注射乙肝疫苗;③血清HbsAg(+)、HbeAg(+)持續時間＞6 個月;④血清HBV-DNA 定量≥1 ×105拷貝/ml;⑤血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)＞正常值上限2 倍，但≤正常值上限10 倍;⑥所有患者均簽署知情同意書。(2)排除標準:①合并其他肝炎病毒感染者;②合并酒精性肝炎、藥物性肝炎等慢性肝病者;③合并肝硬化、肝癌者;④合并心、肝、肺、腎等重要臟器功能不全者;⑤有核苷類藥物過敏史者;⑥有精神疾病病史者。

1.3 治療方法 2 組均給予口服甘草甜素、靜脈滴注促肝細胞生長素、人血白蛋白、輸注血漿等保肝常規﹑對癥治療。對照組在常規治療基礎上給予拉米夫定(葛蘭素史克有限公司)，100 mg/d，1 次/d。觀察組在對照組基礎上給予氧化苦參堿(石家莊以嶺藥業股份有限公司)，600 mg 加入到250 ml 5%葡萄糖注射液中，靜脈滴注，1 次/d。療程均為6 個月。

1.4 觀察指標 觀察2 組癥狀、體征改善情況、HBVDNA 水平、HBV-DNA 陰轉率及HBeAg 陰轉率。分別于治療前后抽取患者清晨空腹靜脈血5 ml，采用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)檢測血清FOXP3 水平，試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。嚴格按照試劑盒說明書操作。960 酶標儀購自美國Sigma 公司。流式細胞儀測定外周血CD+4CD+25 調節性T 細胞、T 淋巴細胞亞群指標(CD+3、CD+4、CD+8、CD+4/CD+8)。免疫比濁法測定免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及補體C3、C4水平。

1.5 癥狀評分標準 臨床癥狀主要有乏力、厭食、腹脹、肝區痛，按照癥狀、體征嚴重程度分為0 ～3 分:分別表示無癥狀、體征及輕、中、重度。

1.6 統計學分析 應用SPSS 10.0 統計軟件，計量資料以± s 表示，采用t 檢驗，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組癥狀、體征改善情況比較 治療前2 組乏力、厭食、腹脹、肝區痛積分比較，差異無統計學意義(P ＞0.05);治療后2 組乏力、厭食、腹脹、肝區痛積分均較治療前顯著降低，差異有統計學意義(P ＜0.05)，但觀察組降低程度更明顯，與對照組比較差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表1。

表1 2 組癥狀、體征改善情況比較n =60，分， ± s

表1 2 組癥狀、體征改善情況比較n =60，分， ± s

注:與治療前比較，* P ＜0.05;與對照組比較，#P ＜0.05

組別 乏力 厭食 腹脹 肝區痛對照組治療前 1.87 ±0.26 1.75 ±0.25 1.47 ±0.21 1.98 ±0.33治療后 1.51 ±0.24* 1.32 ±0.20* 1.06 ±0.14* 1.60 ±0.26*觀察組治療前 1.90 ±0.25 1.77 ±0.23 1.49 ±0.24 1.96 ±0.31治療后 1.02 ±0.13* # 0.88 ±0.11* # 0.72 ±0.10* # 1.23 ±0.16*#

2.2 2組HBV-DNA 水平、HBV-DNA 陰轉率、HBeAg陰轉率比較 與對照組比較，觀察組HBV-DNA 水平顯著降低，HBV-DNA 陰轉率、HBeAg 陰轉率顯著升高，差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表2。

表2 2 組HBV-DNA 水平、HBV-DNA 陰轉率、HBeAg 陰轉率比較n =60，例(%)

2.3 2組CD4+CD2+5 調節性T 細胞、FOXP3 水平比較 治療前2 組CD4+CD2+5 調節性T 細胞、FOXP3 水平比較，差異無統計學意義(P ＞0.05);治療后2 組CD4+CD2+5 調節性T 細胞、FOXP3 水平均較治療前顯著降低，差異有統計學意義(P ＜0.05)，但觀察組降低程度更明顯，與對照組比較差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表3。

表3 2 組CD 4+ CD 2+ 5 調節性T 細胞、FOXP3 水平比較n =60， ± s

表3 2 組CD 4+ CD 2+ 5 調節性T 細胞、FOXP3 水平比較n =60， ± s

注:與治療前比較，* P ＜0.05;與對照組比較，#P ＜0.05

組別 CD +4 CD +2 5 調節性T 細胞(%) FOXP3(ng/L)對照組治療前 12.7 ±1.5 95 ±12治療后 9.5 ±1.2* 70 ±10*觀察組治療前 13.1 ±1.6 98 ±13治療后 7.0 ±1.0* # 41 ±5*#

2.4 2組T 淋巴細胞亞群比較 治療前2 組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值比較，差異無統計學意義(P ＞0.05);治療后2 組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均較治療前顯著升高，CD8+較治療前顯著降低，差異有統計學意義(P ＜0.05)，但觀察組改善程度更明顯，與對照組比較，差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表4。

2.5 2組免疫球蛋白比較 治療前2 組IgA、IgG、IgM比較差異無統計學意義(P ＞0.05);治療后2 組IgA、IgG、IgM 均較治療前顯著降低，差異有統計學意義(P ＜0.05)，但觀察組降低程度更明顯，與對照組比較差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表5。

表4 2 組T 淋巴細胞亞群比較 n =60， ± s

表4 2 組T 淋巴細胞亞群比較 n =60， ± s

注:與治療前比較，* P ＜0.05;與對照組比較，#P ＜0.05

組別 CD +3 (%) CD +4 (%) CD +8 (%) CD +4 /CD +8對照組治療前 69 ±8 24 ±3 43 ±5 0.62 ±0.07治療后 73 ±9* 33 ±5* 35 ±4* 1.01 ±0.16*觀察組治療前 69 ±8 25 ±3 43 ±6 0.60 ±0.05治療后 80 ±10* # 44 ±6* # 28 ±4* # 1.64 ±0.25*#

表5 2 組免疫球蛋白比較 n =60，g/L， ± s

表5 2 組免疫球蛋白比較 n =60，g/L， ± s

注:與治療前比較，* P ＜0.05;與對照組比較，#P ＜0.05

組別IgA IgG IgM對照組治療前 3.87 ±0.60 14.7 ±2.3 2.96 ±0.45治療后 2.77 ±0.44* 11.3 ±1.9* 2.12 ±0.27*觀察組治療前 3.89 ±0.61 14.8 ±2.2 2.90 ±0.39治療后 1.90 ±0.26* # 7.4 ±1.0* # 1.26 ±0.14*#

2.6 2組補體比較 治療前2 組C3、C4 比較差異無統計學意義(P ＞0.05);治療后2 組C3、C4 均較治療前顯著升高，差異有統計學意義(P ＜0.05)，但觀察組升高程度更明顯，與對照組比較差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表6。

表6 2 組補體比較 n =60，g/L， ± s

表6 2 組補體比較 n =60，g/L， ± s

注:與治療前比較，* P ＜0.05;與對照組比較，#P ＜0.05

組別C3 C4對照組治療前 0.68 ±0.09 0.12 ±0.01治療后 0.97 ±0.15* 0.24 ±0.04*觀察組治療前 0.71 ±0.11 0.13 ±0.02治療后 1.28 ±0.19* # 0.36 ±0.05*#

3 討論

HBV 感染慢性化及疾病的反復活動與高載量HBV-DNA、免疫功能缺陷有關，而機體免疫狀態是決定疾病轉歸及患者預后的關鍵因素［2－4］。研究顯示，HBV-DNA 載量與T、B 淋巴細胞免疫功能紊亂密切相關，是慢性乙型肝炎(CHB)逐漸發展為肝硬化、肝癌的高危因素［5，6］。T 淋巴細胞包括CD4+T 淋巴細胞亞群和CD8+T 淋巴細胞亞群。CD4+T 淋巴細胞的主要功能是識別抗原并分泌白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)等多種細胞因子，以促進B 細胞和細胞毒性T細胞的分化成熟，從而產生強大的抗病毒效應［7］。CD4+和CD8+T 淋巴細胞數量和功能異常可導致免疫功能紊亂，病毒持續復制，這是CHB 慢性化的主要原因［8，9］。大量研究證實，CHB 患者存在細胞免疫功能缺陷和體液免疫功能亢進［10，11］。另外，有研究表明CHB 患者補體C3、C4 水平顯著低于正常人群，與肝組織炎性反應及纖維化程度呈負相關［12］。因此，有效抑制病毒復制，糾正機體免疫功能紊亂是CHB 治療的方向和重點。

任衍菊等［13］采用體外細胞實驗證實，傳統中藥氧化苦參堿通過抑制病毒核酸復制和共價閉合環狀DNA(cccDNA)基因表達具有明顯的抗病毒作用。本研究采用氧化苦參堿聯合拉米夫定治療CHB，結果顯示治療6 個月后2 組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值、C3、C4 較治療前顯著升高，CD4+CD2+5 調節性T 細胞﹑FOXP3、CD8+、IgA、IgG、IgM 較治療前顯著降低，且觀察組改善程度優于對照組，差異有統計學意義(P ＜0.05)，說明氧化苦參堿對CHB 患者的免疫功能具有明顯改善作用，在提高患者相對低下的細胞免疫功能同時對亢進的體液免疫功能具有抑制作用，重建機體正常的免疫功能，從而消除病毒，改善患者癥狀、體征，與張賜敏等［14］報道一致。

綜上所述，氧化苦參堿聯合拉米夫定治療CHB 臨床療效顯著，能夠明顯抑制病毒復制，降低血清HBVDNA 水平，提高HBV-DNA 和HBeAg 陰轉率。

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