自身免疫性疾病患者免疫學指標和血清細胞因子的檢測及臨床意義

宋愛華 王昕升 李艷靜

自身免疫性疾病的發病原因至今未明，多認為免疫功能紊亂及細胞因子表達異常與疾病發生密切相關，其中B 細胞產生自身抗體及T 淋巴細胞亞群失衡是疾病發生的主要機制［1］。通過對患者外周血檢測有助于我們了解疾病的活動程度，從而對判斷病情進展及采取合理的治療措施具有重要參考價值。本研究對150 例自身免疫性疾病患者外周血CD4+CD2+5 調節性T 細胞、T 淋巴細胞亞群、免疫球蛋白、補體、炎性因子及黏附分子水平進行檢測，并與健康人指標比較，探討上述指標變化的臨床意義，旨在為疾病的診斷和治療提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012 年1 月至2015 年1 月我院風濕免疫科收治的自身免疫性疾病患者150 例，其中男60 例，女90 例;年齡13 ～65 歲，平均年齡(35 ±5)歲。均符合自身免疫性疾病診斷標準。150 例患者包括系統性紅斑狼瘡50 例，類風濕性關節炎50 例，強直性脊柱炎50 例。排除標準:①艾滋病、甲狀腺功能亢進及其他免疫系統疾病患者;②嚴重肝腎疾病、糖尿病、惡性腫瘤及感染性疾病患者;③入院前服用過免疫抑制劑、非甾體解熱鎮痛藥的患者;④妊娠期、哺乳期及經期女性患者。分別根據Valentijn 法、歐洲抗風濕聯盟的改良疾病活動性標準(3 變量)(DAS28-3)、強直性脊柱炎疾病活動指數(BASDI)評分將患者分為活動期組80 例，穩定期組70 例。另隨機選取同期于我院進行健康體檢的正常人150 例為對照組，其中男66例，女84 例;年齡15 ～64 歲，平均年齡(34 ±5)歲。3組年齡、性別比等一般資料比較，差異無統計學意義(P ＞0.05)。見表1。

表1 3 組一般資料比較

1.2 儀器與試劑 960 酶標儀購自美國Sigma 公司。流式細胞儀為美國Beckman Coulter EPICS XL 產品，試劑由廠家配套提供。ELISA 試劑盒購自武漢博士德生物有限公司。7080 全自動生化分析儀購自日本日立公司。

1.3 觀察指標及檢測方法 抽取患者清晨空腹靜脈血3 ml，3 000 r/min 離心10 min，取上清，－80℃保存備用。

1.3.1 T 淋巴細胞亞群檢測:采用流式細胞術檢測CD4+CD2+5 調節性T 細胞、CD3+、CD4+、CD8+、NK 細胞及CD4+/CD8+變化。

1.3.2 免疫球蛋白及補體檢測:在全自動生化分析儀上采用免疫透射比濁法測定IgA、IgG、IgM、C3、C4水平。

1.3.3 血清炎性因子及黏附分子檢測:采用ELISA法 測 定 血 清TNF-α、IL-10、IL-17、IFN-γ、ICAM-1、VCAM-1、E-selectin 水平。

1.4 統計學分析 應用SPSS 10.0 統計軟件，計量資料以±s 表示，采用單因素方差分析，組間比較采用q檢驗，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組CD+4CD+25 調節性T 細胞、T 淋巴細胞亞群及NK 細胞比較 與對照組和穩定期組比較，活動期組CD+4CD+25 調節性T 細胞、CD+4、CD+4/CD+8、NK 細胞明顯降低，CD+8明顯升高，差異有統計學意義(P ＜0.05)，CD+3差異無統計學意義(P ＞0.05)，而對照組和穩定期組以上指標比較差異均無統計學意義(P ＞0.05)。見表2。

表2 3 組CD +4 CD +2 5 調節性T 細胞、T 淋巴細胞亞群及NK 細胞比較 ± s

表2 3 組CD +4 CD +2 5 調節性T 細胞、T 淋巴細胞亞群及NK 細胞比較 ± s

注:與對照組比較，* P ＜0.05;與穩定期組比較，#P ＜0.05

組別 CD +4 CD +2 5(%) CD +8 3(%) CD +4 (%) CD +8 (%) CD +4 /CD +8 NK(%)對照組(n =150)8.9 ±1.2 64 ±10 50 ±8 25 ±4 1.80 ±0.29 16.3 ±2.5疾病組(n =150) 6.7 ±1.1 63 ±9 32 ±5 36 ±6 1.42 ±0.20 12.2 ±2.0穩定期組(n =70) 7.3 ±1.3 66 ±10 40 ±6 29 ±4 1.75 ±0.26 14.1 ±2.1活動期組(n =80) 4.1 ±0.6* # 63 ±9 25 ±4* # 47 ±7* # 0.68 ±0.11* # 7.1 ±1.2* #

2.2 3組免疫球蛋白、補體比較 與對照組和穩定期組比較，活動期組IgA、IgG、IgM 明顯升高，C3、C4 明顯降低，差異有統計學意義(P ＜0.05)，而對照組和穩定期組以上指標比較，差異均無統計學意義(P ＞0.05)。見表3。

表3 3 組免疫球蛋白、補體比較 g/L， ± s

表3 3 組免疫球蛋白、補體比較 g/L， ± s

注:與對照組比較，* P ＜0.05;與穩定期組比較，#P ＜0.05

IgA IgG IgM C3 C4對照組(n =150) 3.2 ±0.4 11.2 ±1.8 1.21 ±0.18 1.42 ±0.23 0.46 ±0組別.07疾病組(n =150) 4.8 ±0.7 16.1 ±2.5 1.50 ±0.20 1.12 ±0.17 0.27 ±0.04穩定期組(n =70) 3.8 ±0.5 13.3 ±2.1 1.39 ±0.21 1.30 ±0.20 0.38 ±0.06活動期組(n =80) 5.8 ±0.9* # 21.3 ±3.5* # 1.98 ±0.32* # 0.87 ±0.12* # 0.15 ±0.02*#

2.3 3組炎性因子比較 與對照組和穩定期組比較，活動期組TNF-α、IL-10、IL-17、IFN-γ 明顯升高，差異有統計學意義(P ＜0.05)，而對照組和穩定期組以上指標比較，差異均無統計學意義(P ＞0.05)。見表4。

2.4 3組黏附分子比較 與對照組和穩定期組比較，活動期組ICAM-1、VCAM-1、E-selectin 明顯升高，差異有統計學意義(P ＜0.05)，而對照組和穩定期組以上指標比較，差異均無統計學意義(P ＞0.05)。見表5。

表4 3 組炎性因子比較 pg/ml， ± s

表4 3 組炎性因子比較 pg/ml， ± s

注:與對照組組比較，* P ＜0.05;與穩定期組比較，#P ＜0.05

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表5 3 組黏附分子比較 pg/ml， ± s

表5 3 組黏附分子比較 pg/ml， ± s

注:與對照組比較，* P ＜0.05;與穩定期組比較，#P ＜0.05

ICAM-1 VCAM-1 E-selectin對照組(n =150)組別0.41 ±0.06 22.36 ±3.45 0.04 ±0.01疾病組(n =150) 0.62 ±0.09 45.76 ±7.51 0.18 ±0.03穩定期組(n =70) 0.50 ±0.08 35.22 ±5.43 0.07 ±0.01活動期組(n =80) 0.78 ±0.12* 67.68 ±10.13* 0.38 ±0.06*

3 討論

當感染等誘發因素導致機體患有自身免疫性疾病時，CD4+/CD8+T 細胞失衡導致T 淋巴細胞功能紊亂，繼而活化B 淋巴細胞產生大量自身抗體，同時NK 細胞功能失調導致自身抗體產生增加及體液免疫亢進，而抗原抗體復合物的形成又可激活補體系統，引起補體成分C3、C4 下降，由此形成惡性循環，最終造成多系統受累和組織損傷［2，3］。本研究結果顯示，活動期組CD4+、CD4+/CD8+、NK 細胞、C3、C4 明顯降低，CD8+、IgA、IgG、IgM 明顯升高(P ＜0.05)，CD3+變化無統計學意義(P ＞0.05);而穩定期組和對照組比較差異均無統計學意義(P ＞0.05)，與林靜華等［4］報道一致，提示自身免疫性疾病患者活動期存在細胞及體液免疫功能失衡，CD4+/CD8+比值下降是判斷疾病嚴重程度和預后的重要指標。而在疾病穩定期以上指標均有所好轉，反映機體免疫功能紊亂有所改善。

CD4+CD2+5 FoxP3 + Treg 是近年來新發現的一種保護性免疫調節分子，能夠對CD4+T 細胞、CD8+T 細胞、NK 細胞的活化和增殖及B 細胞產生抗體發揮抑制作用，從而維持機體正常的免疫應答過程［5］。研究顯示，多發性硬化、特發性血小板減少性紫癜、自身免疫性肝炎、原發性膽汁性肝硬化等自身免疫性疾病的發病均與CD4+CD2+5 調節性T 細胞表達異常密切相關，Treg 細胞比例降低或功能缺陷可能是導致自身免疫性疾病發生發展的原因之一［6，7］。本研究結果顯示，活動期組CD4+CD2+5 調節性T 細胞表達明顯下降(P ＜0.05)，而穩定組和對照組之間差異無統計學意義(P ＞0.05)，與Habibagahi 等［8，9］報道一致，提示CD4+CD2+5 調節性T 細胞參與了自身免疫性疾病的發病，且與疾病活動性密切相關。然而，Van Amelsfort等［10，11］觀察到類風濕性關節炎患者活動期外周血CD4+CD2+5 FoxP3 + Treg 細胞數量較正常人顯著增加或無變化。我們考慮結果的不一致可能與納入的疾病種類及疾病不同階段的活躍程度有關。由此可見，自身免疫性疾病患者Treg 細胞的表型和功能狀態具有一定不穩定性和復雜性，有待以后進一步探討。

研究表明黏附分子與類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、銀屑病等疾病的發病有關，其致病作用可能是通過調節白細胞的激活及促使炎性細胞的浸潤，導致炎性反應持續存在和疾病的不斷發展［12，13］。本研究結果顯示，活動期組TNF-α、IL-10、IL-17、IFN-γ、ICAM-1、VCAM-1、E-selectin 明顯升高，差異有統計學意義(P ＜0.05)，而穩定期組和對照組比較差異無統計學意義(P ＞0.05)，說明細胞因子和調節因子表達失調與自身免疫性疾病的發病密切相關。

總之，免疫功能紊亂、炎性反應在自身免疫性疾病發生發展的各階段具有重要作用，特別是在疾病活動期炎性因子、T 淋巴細胞亞群、免疫球蛋白等免疫指標異常提示患者預后不良。監測患者免疫指標及炎性反應變化對于了解機體免疫狀態及指導臨床治療具有重要參考價值。

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