生龍接骨膠囊的質量標準的研究

摘要：目的 建立生龍接骨膠囊的質量標準。方法 采用薄層色譜法對生龍接骨進行定性鑒別，并應用高效液相色譜法對制劑中三七的主要活性成分人參皂苷Rg1進行含量測定。結果 生龍接骨的薄層色譜圖斑點清晰，陰性對照無干擾；人參皂苷Rg1在1.138～11.38μg范圍內與峰面積的線性關系良好，r=0.9994、專屬性強、重現性好、平均回收率為96.5%，RSD%=0.35%（n=6）。結論 所建立的鑒別方法操作簡單，專屬性強，定量方法穩定靈敏，重現性良好，能夠較好控制生龍接骨膠囊質量。

關鍵詞：生龍接骨膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；質量標準

生龍接骨膠囊主要由三七、當歸、熟地、雞血藤、續斷、骨碎補等17味藥材組成，具備溫經行血、續筋接骨、消腫止痛以及通絡散瘀的作用，臨床主要應用于骨折、跌打損傷、愈合較慢的患者中[1]。目前，該制劑已部分應用于臨床治療中，為有效控制生龍接骨膠囊的生產質量，本文對其質量標準進行了系統的研究。

1 儀器和試劑

高效液相色譜儀（Agilent1100，美國）；電熱恒溫水浴鍋（泰斯特，天津）；電熱恒溫鼓風干燥箱（精鷹醫療器械，山東）；Mole search超純水儀（摩爾科技，上海）等儀器。

人參皂苷Rg1對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110703-200424）；自制生龍接骨膠囊（生產批號：20060816、20060817、20060818）；乙腈、甲醇為色譜純；正丁醇、磷酸、乙醚、氨水均為分析純。

2 制作方法

十七種成分，將三七和血竭粉碎為細粉，備用；其余當歸等成分加入到水中進行二次煎煮，其中，第一次煎煮時間為2h，第二次煎煮時間為1.5h，濾過。將上述濾液合并，并濃縮為密度1.30，約為70℃以上稠膏，烘干，將其粉碎為細粉，然后將上述三七等細粉加入，混合均勻，制作成顆粒，裝入膠囊，共制為1000粒顆粒。該藥物屬于硬膠囊，內容物為棕褐色、紅棕色的粉末、顆粒，氣微、味微苦。

3 鑒別

3.1供試品溶液制備 取5g本品，研為細末，加入25ml甲醇，超聲下處理30min，濾過，蒸干濾液，在殘渣中加入20ml水溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，提取20ml/次；合并正丁醇液，應用氨試液進行2次洗滌，洗滌20ml/次；將氨試液棄去，再用水洗滌3次，30ml/次，然后將水液棄去；在殘渣內加入5ml水有效溶解；應用D101型大孔樹脂柱，依次應用50ml水和50ml的30%乙醇將其洗脫，丟棄洗脫液；繼續用50ml的70%乙醇進行洗脫，對洗脫液進行收集，蒸干后，在殘渣中加入1ml甲醇進行溶解，備用。

3.2陰性樣品溶液制備 除川續斷外，其余各種藥物均按照處方量進行投料，作為陰性樣品；然后按照上述制備方法，制成陰性對照溶液。

3.3對照品溶液制備 將川續斷皂苷Ⅵ作為對照品，加入甲醇后，將其制作為每1ml中含有1mg溶液。

3.4實驗方法 按照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB制定的薄層色譜法進行試驗[2]。首先分別吸取5～10μl供試品溶液和陰性樣品溶液，及2μl對照品溶液，將其點到同一個硅膠G薄層板上，薄層板成分主要為羧甲基纖維素鈉，展開劑主要應用在10℃環境下放置的三氯甲烷-甲醇-水，展開后將其取出，晾干，應用10%硫酸乙醇溶液噴灑，放置到105℃的環境下加熱處理，直到斑點顯色清晰為止。在供試品色譜內，于對照品色譜互相對應位置，其所顯示的斑點顏色相同，且在陰性樣品色譜圖中無斑點出現。

3.5實驗結果 通過陰性樣品對照實驗和三批樣品實驗結果的觀察分析，于供試品色譜內，和對照品色譜相應位置，其所顯示出的斑點顏色相同。且其分離效果較好，不會與陰性樣品產生較大干擾。

4 含量測定

4.1色譜條件和系統適用性試驗 將十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；將乙腈-0.1%磷酸溶液（23：77）作為流動相；檢測波長為203nm；柱溫為40℃；按人參皂苷Rg1峰對理論板數進行計算，應不低于3000。

4.2供試品溶液的制備 取裝量差異下的本品，研細后取約2g，精密稱定，置于具賽錐形瓶內，精密加入50ml甲醇，對其重量進行稱定，加熱回流2h，靜置冷卻后，再次對其重量進行稱量；甲醇補充缺失重量，混搖均勻后，濾過處理；精密量取25ml續濾液，水浴蒸干，在殘渣中加入30ml水進行溶解，轉移到分液漏內，20ml乙醚振搖提取，棄乙醚液，再用水飽和的正丁醇液振搖提取4次，20ml/次；合并正丁醇液，繼續使用30ml氨試液進行洗滌，再應用20ml正丁醇飽和的水進行洗滌，分取正丁醇液水浴蒸干，用甲醇對殘渣進行溶解，定容于10ml容量瓶內，濾過即得[3]。

4.3測定方法 分別精密吸取20μl供試品溶液和對照品溶液，將其注入到液相色譜儀內，見圖1、圖2。本品每粒含三七以人參皂苷Rg1（C42H72O14）進行計算，不能少于0.60mg。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

4.4線性范圍考察 精密稱定14.23mg人參皂苷Rg1對照品，將其放置到25ml的量瓶內，加入甲醇定容，分別精密量取1ml、3ml、5ml、7ml以及10ml，置于10ml量瓶內，加入甲醇至刻度位置，充分搖勻后，精密吸取上述溶液20ul，在色譜條件下測定峰面積；將對照品量作為橫坐標，峰面積作為縱坐標，對其進行線性回歸分析。結果表明，在1.138～11.38ug范圍內，人參皂苷Rg1的線性關系良好，線性回歸方程：y=254648×-9204.4，R=0.9994。

4.5精密度試驗 稱取對照品溶液，每毫升0.2845mg，重復性進行6次測定，結果顯示具有較好的精密度，RSD%為0.48%（n=6）。

4.6穩定性試驗 稱取對照品溶液，每毫升0.2845mg，每2h進樣1次，結果顯示，在10h內，人參皂苷Rg峰面積無明顯變化，表明對照品穩定性好，RSD%為0.14%（n=6）。

4.7重復性試驗 在同一批樣品內，共稱定6份，應用上述色譜試驗法進行檢測，結果顯示樣品均具有較好的重復性，RSD%為0.35%（n=6）。

4.8加樣回收率試驗 稱取1g本品（1.905mg/g）6份，分別將其加入到一定量的對照品溶液內，按照含量測定法進行以下試驗，對回收率進行計算，回收率計算公式為：（實測值-樣品所含人參皂苷Rg1含量）/加入人參皂苷Rg1量×100%，本組平均回收率達到96.5%。

5 結論

本文主要通過薄層色譜法對續斷中川續斷皂苷Ⅵ進行鑒別，該方法操作簡便，且具有較強的專屬性和重現性，并應用高效液相色譜法對三七中的人參皂苷Rg1進行含量測定，該法線性范圍寬、專屬性強，重現性好，且樣品穩定可控，在制劑質量標準的控制中發揮著十分重要的作用。

參考文獻：

[1]李勇強，牛海彬，侯宇，等.生龍接骨膠囊在骨折愈合早中期X光影像學研究[J].醫學美學美容（中旬刊），2014，01（08）：56-57.

[2]郭征兵，徐倩.生龍接骨膠囊薄層色譜鑒別[J].江西醫藥，2010，45（06）：585.

[3]孔令提，代龍.接骨七厘散軟膠囊內容物加PEG400濕法超微粉碎工藝研究[J].時珍國醫國藥，2009，20（11）：2810-2812.

編輯/哈濤