HPLC法測定賴氨匹林中阿司匹林含量的方法學(xué)驗(yàn)證

摘要：目的 對建立的HPLC法測定賴氨匹林中阿司匹林含量方法，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。方法 儀器：Agilent1260，色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相：甲醇-水-冰醋酸（40：60：1）；檢測波長：276nm；進(jìn)樣量：10μl。結(jié)果 精密度RSD=0.43%，線性和范圍0.33540～0.48633mg/ml，回收率99.40%～100.18%，定量限0.2064μg/ml，檢測限0.06192μg/ml。結(jié)論 建立的方法準(zhǔn)確、可靠，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室要求。

關(guān)鍵詞：賴氨匹林；HPLC；方法學(xué)驗(yàn)證

中圖分類號：R9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

賴氨匹林為阿司匹林和賴氨酸的復(fù)鹽，為非甾體解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥，不僅具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎的作用，它還是一種良好的治療心血管疾病的藥物，具有抗血小板聚集、阻止血栓形成的作用[1～3]。適用于發(fā)熱及輕、中度疼痛。本文針對HPLC法測定賴氨匹林中阿司匹林的含量，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

分析步驟：按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中阿司匹林C9H8O4的含量。

式中：Au：供試品溶液中主峰響應(yīng)值；As：對照品溶液中主峰響應(yīng)值；Cs：對照品溶液濃度mg/ml；Cu：供試品溶液濃度mg/ml。

對該方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，證明方法是否準(zhǔn)確、可靠，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室要求。

1 儀器與試劑

1.1儀器 天平：梅特勒托利多XS105、高效液相色譜儀：Agilent1260.

1.2試劑 甲醇（色譜純、ACS）、冰醋酸（分析純、天津市科密歐）、乙腈（色譜純、ACS）。

1.3對照品 阿司匹林（中檢院）

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相：甲醇-水-冰醋酸（40：60：1）；檢測波長：276nm；進(jìn)樣量：10μl；流速：1.0ml/min。理論板數(shù)按阿司匹林峰計(jì)算不低于2000。

2.2進(jìn)樣精密度驗(yàn)證 取阿司匹林對照品適量，加2ml冰醋酸溶解，并用乙腈稀釋成約0.4mg/ml的溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2.3回收率驗(yàn)證 精密稱取對照品9份，分別加冰醋酸2ml使溶解，加乙腈稀釋至刻度，精密量取10ml至20ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度。配制成含阿司匹林80%、100%、120%的溶液，每個濃度各三份，分別精密量取各溶液10μl進(jìn)液相色譜儀，計(jì)算回收率。

2.4線性驗(yàn)證 取阿司匹林對照品33.54mg，精密稱定，加冰醋酸2ml，超聲使溶解，用乙腈稀釋至每1ml約含阿司匹林3.2mg的溶液，分別精密量取2.0ml、2.2ml、2.4ml、2.5ml、2.9ml，用乙腈稀釋成10ml，搖勻。分別取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。

2.5定量限 精密稱取對照品10.32mg，加2ml冰醋酸使溶解，加乙腈制成含阿司匹林0.4128μg/ml的溶液，作為溶液（1）。取溶液（1）10ml加乙腈稀釋至20ml，搖勻，作為定量限溶液。

2.6檢測限 取上述溶液（1）3ml，加乙腈稀釋至20ml，作為檢測限溶液。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1進(jìn)樣精密度驗(yàn)證結(jié)果 主峰峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%，主峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于1.0%，主峰的理論板數(shù)符合規(guī)定（見表1）。

3.2回收率驗(yàn)證結(jié)果 9份樣品的回收率RSD小于2.0%，且回收率在99.40%～100.18%，說明該方法測定樣品中阿司匹林含量回收率較好（見表2）。

3.3線性驗(yàn)證結(jié)果 阿司匹林在濃度0.33540～0.48633mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系較好（見表3，圖1）。

圖1 阿司匹林含量線性曲線圖

3.4定量限 取定量限溶液10μl，注入液相色譜儀，結(jié)果：信噪比為10.1，大于10∶1。

3.5檢測限 取檢測限溶液10μl，注入液相色譜儀，結(jié)果：信噪比為3.6，大于3∶1。

4 試驗(yàn)結(jié)論

綜合以上數(shù)據(jù)，含量進(jìn)樣精密度RSD=0.43%；阿司匹林濃度在0.33540～0.48633mg/ml內(nèi)線性關(guān)系較好；回收率試驗(yàn)結(jié)果RSD為0.28%，小于2.0%，且回收率均在99.40%～100.18%，說明該方法測定賴氨匹林中阿司匹林含量回收率較好；定量限為0.2064μg/ml；檢測限為0.06192μg/ml。得出以下結(jié)論：此方法準(zhǔn)確、可靠，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室要求[4～8]。

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編輯/成森