正交試驗法確定金蓮花中總黃酮最佳提取工藝

張黎黎++胡雪芬++王秀麗

摘 要：目的 研究金蓮花提取工藝。方法 采用正交試驗法對金蓮花中總黃酮進行提取，以出膏率和紫外分光光度法測定的總黃酮得率為指標，考察乙醇濃度（A）、回流時間（B、回流次數（C）、料液比（D）4個因素。檢測波長為500 nm。結果 優化的金蓮花提取條件為A2B1C3D2。結論 采用65%乙醇，料液比為1∶10，回流3次，每次2小時為最佳工藝，其中回流次數為顯著性因素。黃酮最高含量為15.74%，最高出膏率為45.72%。

關鍵詞：金蓮花 總黃酮 紫外分光光度法 正交試驗法

中圖分類號：S859 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）02（a）-0001-02

金蓮花為毛茛科植物金蓮花屬植物金蓮花的干燥花，又名旱金蓮、旱地蓮、金芙蓉等，為多年生草本植物。在我國金蓮花有著悠久的藥用歷史，史載于清代。主要分布于東北、華北、西北，野生資源十分豐富[1]，具有清熱、解毒、抑菌作用。趙學敏所著《本草綱目拾遺》，其謂“金蓮花出五臺山，又名旱地蓮，一名金芙蓉，色深黃，味滑苦，無毒，性寒，治口瘡喉腫，伏熱牙宣，耳痛目痛，明目，解嵐瘴，疔瘡，大毒諸風”?？梢娊鹕徎ㄋ幚碜饔脧V泛，其臨床主要用于治療上呼吸道感染、咽炎、扁桃腺炎等疾病[2]。金蓮花所含成分主要有葒草苷、牡荊苷等黃酮類化學物及Trollioside、2"-O-（2"-methylbutyry1）isoswertisin等有機酸類成分[3]。目前的研究多數認為黃酮類化合物是金蓮花主要抗菌消炎的有效活性成分之一，因此高效率地提取金蓮花中的黃酮類成分、確定最佳的提取純化方法，是人們研究的焦點[4]。該文采用正交試驗對金蓮花進行提取并以蘆?。ㄒ蛱J丁母核與葒草苷相似）為對照品對提取物中總黃酮進行測定，依據黃酮類化合物含量及提取物出膏率確定最佳提取工藝。

1 樣品、儀器與藥品

1.1 樣品

金蓮花采自大興安嶺地區，經大興安嶺藥檢所鑒定確定為正品金蓮花。

1.2 樣品

UV-260紫外可見分光光度計（日本島津）；SC202-00型電熱恒溫干燥器（上海醫療器械五廠）；超級恒溫水浴鍋（江蘇金壇環宇科學儀器廠）JPCQ0628型超聲波清洗機（超聲波頻率28 kHz，武漢嘉鵬電子有限公司）。

1.3 標準品

蘆丁購自中國藥品生物制品鑒定所。

1.4 藥品

所用試劑亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁均為分析純。

2 提取方法

2.1 標準曲線的制定

2.1.1 標準液的配制

精密稱取120 ℃干燥至恒重的蘆丁標準品13.0 mg，置于100 mL容量瓶中，加30%乙醇適量，微熱，使蘆丁溶解，冷卻后用30%乙醇定容至刻度，搖勻，備用。

2.1.2 蘆丁標準曲線的繪制

精密吸取蘆丁的標準液0、0.50、0.75、1.00、1.5、2.0 mL置于10 mL容量瓶中，用30%乙醇補充至5 mL，再分別加入5%NaNO2溶液0.3 mL、搖勻放置6 min，再加入10%Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻放置6 min，加入4%NaOH溶液2 mL，此時溶液呈紅色，搖勻，加入30%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以0號為空白，以500 nm波長處測定吸光度值[5]，得數據圖1所示。

由圖1得標準曲線方程為：Y=2.5198X

-0.0049；相關系數r=0.9998，標準品在0～0.26 mg/mL范圍內呈良好線性關系?？砂礃藴是€法進行定量分析。

2.1.3 穩定性

用與繪制吸收曲線配制相同的方法配制的樣品進行穩定性實驗，結果表明：樣品放置30 min，測得其吸光度值幾乎不變。

2.2 正交試驗工藝優化

2.2.1 因素水平表的制定

以乙醇濃度、回流時間、回流次數、料液比為考察因素，每個因素設定三水平安排正交試驗，見表1。

根據表1因素水平表制定L9（34）正交表，進行9次試驗，為保證實驗重現性，每次實驗平行3次，確定最佳提取工藝。

2.2.2 樣品液的制備

精密稱取100 ℃恒溫干燥至恒重的金蓮花藥材5 g，用萬能粉碎機打成20目左右的粗粉，置于圓底燒瓶中，取適量所用濃度的乙醇溶液浸泡1 h，按規定時間回流，過濾得提取液。將提取液濃縮至50 mL，取1 mL，置50 mL容量瓶中，定容，取1 mL按照2.1.1方法操作，得數據如表2所示。

3 結果與討論

由表3可以看出，實驗4的黃酮含量最高，經方差分析得出回流次數影響最顯著，最佳工藝為A2B1C3D2，即采用65%乙醇，料液比為1∶10，回流3次，每次2小時為最佳工藝，其中回流次數為顯著性因素。在本實驗中黃酮含量最高可達15.74%，遠高于藥典標準；同時在9次試驗中，煎煮時間對出膏率影響最大，最高可達45.72，也高于藥典標準。通過本實驗可為金蓮花總黃酮最佳提取工藝提供理論依據，同時說明大興安嶺地區野生金蓮花總黃酮含量高，藥效佳，大興安嶺地區野生金蓮花具有巨大的開發價值。

參考文獻

[1] 北京師范大學生物系.北京植物志（下冊）[M].北京出版社，1993：224.

[2] 王平.金蓮花沖劑治療上呼吸道感染療效觀察[J].中成藥，1996，18（3）：50.

[3] 李勝銀，蔡金娜，劉江云等.金蓮花化學成分研究[J].亞太傳統醫藥，2008，4（7）：18.

[4] 王建萍，陳治宇.不同提取純化工藝對金蓮花總黃酮含量的影響[J].承德醫學院學報，2008，25（4）：356.

[5] 譚曉虹，方秀梅.金蓮花中總黃酮含量的測定[J].張家口醫學院學報，2002，19（6）：37.endprint