調(diào)味品中黃曲霉毒素B1含量結(jié)果的不確定度分析

霍玉發(fā)，蔣選舉

白城市疾病預(yù)防控制中心，吉林白城 137000

黃曲霉毒素B1是已知化學(xué)物質(zhì)中致癌性最強(qiáng)的一種，耐熱，裂解最低溫度為280℃，一般烹調(diào)加工溫度下難以破壞?；ㄉ⒂衩?、稻谷、小麥等糧油食品是黃曲霉毒素B1污染的主要食物，釀制調(diào)味品所使用的稻谷類等可能被黃曲霉毒素B1污染，致使調(diào)味品中可能含有這種毒性物質(zhì)，因此，必須使用適宜的檢測(cè)方法測(cè)定調(diào)味中黃曲霉毒素B1含量。為此筆者應(yīng)用GB/T5009.23-2006《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分》中高效液相色譜法（第三法）檢測(cè)調(diào)味品中黃曲霉毒素B1含量，應(yīng)用測(cè)量不確定度理論建立數(shù)學(xué)模型，分析掌握導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差的關(guān)鍵因素，提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果的可信性和有效性。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1實(shí)驗(yàn)樣品來(lái)源

該單位衛(wèi)生科采集的調(diào)味品安全風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)黃曲霉毒素B1樣品。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分》GB/T5009.23-2006。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑及器材

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品制造商給出擴(kuò)展不確定度為（2.0±1.5）%（農(nóng)業(yè)部環(huán)境科研監(jiān)測(cè)所提供）；1、10、20 mL移液管；25、100 mL容量瓶；Aglent1260型液相色譜儀（認(rèn)證編號(hào) BCSJK-LH-039）。

1.4實(shí)驗(yàn)操作

按《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分》GB/T5009.23-2006操作。

1.5計(jì)算公式和實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果計(jì)算公式：

式中：ω-試樣中黃曲霉毒素B1的含量，單位μg/kg；

A-樣品洗脫液黃曲霉毒素B1的峰面積，單位μg；

V-試樣提取過(guò)程中提取液的體積，單位mL；

f-試樣溶液衍生后較衍生前的濃縮倍數(shù)；

V-通過(guò)免疫親和柱被測(cè)樣品的體積，單位mL；

m-試樣的取樣質(zhì)量單位，g。

按標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法10次重復(fù)測(cè)定結(jié)果：

2 各不確定度來(lái)源

黃曲霉毒素B1檢測(cè)過(guò)程中各不確定度來(lái)源，見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)過(guò)程中的不確定度來(lái)源

3 建立檢測(cè)結(jié)果的不確定度計(jì)算數(shù)學(xué)模型

4 各分量不確定度的計(jì)算

4.1 樣品引入的不確定度

4.1.1 樣品制備過(guò)程中帶來(lái)的不確定度 a：取樣（樣品均勻性）該實(shí)驗(yàn)依據(jù)GBT5413.37-2010規(guī)定，將樣品充分混勻后隨機(jī)取樣，可認(rèn)為是均勻的，代表性充分，由此帶來(lái)的不確定度可忽略不計(jì)。b：稱重過(guò)程：①稱量變動(dòng)性，根據(jù)歷史記載，在50 g以內(nèi)，變動(dòng)性標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05 mg，則：u1﹙m﹚=0.05 mg。②天平校正產(chǎn)生的不確定度，按檢定證書(shū)給定為±0.005 mg，按均勻分布，則校正產(chǎn)生的不確定度為：u2（m）=0.0289 g。

由于天平稱量了2次（空瓶和空瓶+樣品）所以天平引起的不確定度為：u2（m）=0.00408 g。

則由天平引起的相對(duì)不確定度為：

4.1.2 樣品的回收率 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法的要求，樣品處理過(guò)程存在損失或污染方法回收率在90%～105%之間。由于 b+＝(105－100)%＝5%，b－＝（100－90）%＝10%，根據(jù)公式計(jì)算得=4.33%。

4.1.3 樣品的定容過(guò)程引入的不確定度 容量誤差：根據(jù)JJG646-1990《定量、可調(diào)移液器試行檢定規(guī)程》規(guī)定1 mL可調(diào)移液器吸取1 mL時(shí)容量誤差為1.5%。

4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的不確定度

4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的不確定度 購(gòu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，編碼（SB05-195-2008，（k＝2）±0.5%），u(ρ)＝0.25 μg/mL

4.2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的稀釋過(guò)程 采用 （1±0.015）mL移液管和（100±0.10）mLA 級(jí)容量瓶來(lái)完成，f＝f（100）。由容量誤差、溫度、人員讀書(shū)和重復(fù)性4個(gè)不確定度來(lái)源分別計(jì)算（過(guò)程略）。Urel（V 移）＝0.867%mL，urel（V 容）＝0.066%mL，urel（f100）＝0.87%。則由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的相對(duì)不確定度為 ur（C 標(biāo)）＝0.89%。

4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合校準(zhǔn)產(chǎn)生的不確定度

4.3.1 擬合過(guò)程 采用5個(gè)質(zhì)量水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定2次，得到相應(yīng)的濃度值值。用最小二乘法進(jìn)行擬合，得到直線方程和相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)表2和表3。

表2 標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量－儀器示值結(jié)果

表3最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量－儀器示值結(jié)果

SR:回歸曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)差

式中：Aoj-各標(biāo)準(zhǔn)液的實(shí)際響應(yīng)值

-根據(jù)回歸曲線算出的理論值

n-回歸曲線的點(diǎn)數(shù)（每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度進(jìn)行3次測(cè)量工15次）

4.3 .2由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合帶來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度

式中：u（C）-標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合帶來(lái)的不確定度b-斜率

SR-回歸曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)差

P-待測(cè)樣品重復(fù)測(cè)定次數(shù)

n-回歸曲線的點(diǎn)數(shù)

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合標(biāo)準(zhǔn)帶來(lái)的相對(duì)不確定度：

4.4 結(jié)果的重復(fù)性帶來(lái)的不確定度值

此樣品在重復(fù)條件下，進(jìn)行10次獨(dú)立測(cè)定，其結(jié)果的算術(shù)平均值為9.82μg/kg。

單次測(cè)量的不確定度：u（xi）=0.27 μg/kg。

算術(shù)平均值的不確定度為0.853μg/kg。

測(cè)量結(jié)果的相對(duì)不確定度為0.87%。

4.5 濃度值量化誤差引起的不確定度分量

儀器的分辨率為0.001，按均勻分布，其不確定度為：

5 各不確定度分量

合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

Urel（X）＝7.305%

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：u（X）＝7.3%×9.8＝0.715 μg/kg

擴(kuò)展不確定度為：U＝ku（k＝2）＝0.715 mg/L×2≈1.43μg/kg

結(jié)果：X=（9.8±1.43）μg/kg（k＝2），見(jiàn)表 4。

表4各不確定度分量

6 討論

通過(guò)對(duì)調(diào)味品中黃曲霉毒素B1檢測(cè)結(jié)果的不確定度來(lái)源分析可以看出，樣品的回收、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋、定容、和分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合過(guò)程引起的不確定度較大，是造成實(shí)驗(yàn)室誤差的主要因素。采用化學(xué)分析計(jì)算，建立測(cè)量結(jié)果的溯源性，提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平，為判斷調(diào)味品質(zhì)量提供有效依據(jù)。

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)疫總局、中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)差化管理委員會(huì).GB/T5009.23-2006.食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分（一）[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

[2]中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2002:14-15.

[3]國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局認(rèn)證與實(shí)驗(yàn)室評(píng)審管理司.計(jì)量認(rèn)證/審查認(rèn)可（驗(yàn)收）評(píng)審準(zhǔn)則宣貫指南[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2001:52-55.