3種越南產沉香的GC—MS分析

楊錦玲 梅文莉 董文化 余海謙 戴好富

摘 ?要 ?從感觀評價和化學成分方面，對越南紅土沉香與越南黃熟香、吊口沉香以及報道的奇楠沉香和普通沉香進行比較，結果發現：紅土沉香木心為紫褐色;與報道的奇楠沉香比較，奇楠沉香油脂豐富，易于切割成卷，而紅土沉香油脂含量不高（6.16%），較硬，不易切割。采用GC-MS技術分析越南紅土沉香、黃熟香和吊口沉香乙醚提取物的化學成分和相對含量，發現紅土沉香油脂中2-（2-苯乙基）色酮和2-[2-（4-甲氧基）苯乙基]色酮的相對含量之和高達51.57%，其油脂的成分組成與奇楠沉香油脂接近，而黃熟香和吊口沉香中二者相對含量之和分別為0.77%和0.78%。說明紅土沉香是介于普通沉香與奇楠沉香之間，質量更接近于奇楠沉香。

關鍵詞 ?紅土沉香;黃熟香;吊口沉香;GC-MS

中圖分類號 ?R284.1 ? ? ? ? ?文獻標識碼 ?A

GC-MS Analysis of Three Kinds of

Agarwood from Vietnam

YANG Jinling1，2， MEI Wenli1， DONG Wenhua1， YU Haiqian1， DAI Haofu1*

1 Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology， Chinese Academy of Tropical Agricultural

Sciences， Hainan Engineering Research Center of Agarwood， ?Haikou，Hainan 571101

2 Horticultural and Garden College， Hainan University， Haikou，Hainan 572008

Abstract ?In this article， agarwood “Hong Tu” was compared with agarwood“Huang Shu Xiang”， “Diao Kou”， “Qi-Nan”reported previously and ordinary agarwood from the side of organoleptic evaluation and chemical composition. It found that the colour of wood surface of “Hong Tu” was purple brown; agarwood “Hong Tu” compared with agarwood “Qi-Nan” found that agarwood “Qi-Nan” was rich in resin and was easy to be cut in curly， while the resin content of agarwood “Hong Tu”was not so high （6.16%）， and it was difficult to be cut. The chemical constituents and relative contents of the ether extracts of the three types of agarwood were analyzed by gas chromatography-mass （GC-MS） spectrometry. The relative content of compounds 2-（2-phenylethyl）chromone and 2-[2-（4-methoxyphenyl）ethyl]chromone in “Hong Tu”was 51.57%， which the constitute of resin gets close to “Qi-Nan”， while the relative content of the two compounds in “Huang Shu Xiang”and“Diao Kou” was 0.77% and 0.78%， respectively. The results indicated that the quality of “Hong Tu” was between ordinary agarwood and “Qi-Nan”， while it was closer to agarwood “Qi-Nan”.

Key words ?Agarwood “Hong Tu”; Agarwood“Huang Shu Xiang”; Agarwood “Diao Kou”; GC-MS

doi ?10.3969/j.issn.1000-2561.2015.08.023

沉香為瑞香科沉香屬（Aquilaria）植物中含有樹脂的木材[1-2]。國產沉香主產于海南、廣東等地，進口沉香主產于馬來西亞、印度尼西亞、越南等國[2]。沉香不僅是中國、日本、印度以及其他東南亞國家的天然香料和傳統名貴藥材[3]，可作為鎮靜劑、鎮痛劑，用于減輕胃痛，止咳，風濕和高熱癥狀等[4]，而且是佛教，伊斯蘭教和印度教等公認的稀世珍寶[1]。迄今全世界已發現沉香屬植物19種，均被列入《瀕危野生動植物種國際貿易公約》（CITES）附錄Ⅱ，市場上流通的沉香主要來源于Aquilaria malaccensis、Aquilaria crassna、Aquilaria sinensis和Aquilaria filarial 4種植物[1]。

沉香素有“四名十二狀”之分，是宋朝的香茗大家——丁謂對其進行的分類與分級[5]。“四名十二狀”指在受自然因素的影響所結沉香的種類與形態，“四名”是指沉水香、棧香、生結和熟結，是對沉香結香標準的總體分類，“十二狀”則是沉香樹自上而下結香的種類。凡是黑節而木心堅實，能夠下沉水底的叫沉水香;半浮半沉者為棧香;活體枝干上所結沉香為生結;香樹死亡狀態下的沉香稱為熟結。吊口沉香屬于棧香，是指因強風摧折等自然因素，香樹枝干折斷面沖向地面，汁液流注結成脂以后，形成吊刺形狀，清除白木，即為吊口。黃熟香是熟結中的一種，香樹經歷數百年后，本末皆枯朽，揉之如泥，中存一塊，色黃質輕，為黃熟香。中國古人特別鐘愛黃熟香，不僅因其香味靜穆異常，其黃色象征著金貴，光明與希望，符合中國人的審美訴求。越南熟結沉香根據所出土壤顏色的不同，又分為黃土沉、黑土沉和紅土沉。其中，紅土沉香珍貴稀有，素有“千年沉香，萬年紅土”之說，在市場上，其受歡迎的程度、價格皆可與最上等最珍貴的奇楠相媲美。

基于沉香廣泛的應用價值和高貴稀有的特性，沉香的相關研究已經成為國內外學者關注的熱點[1， 6-11]。通過對沉香化學成分的研究，揭示沉香的化學本質，沉香主要含有2類化合物：色酮類化合物和倍半萜類化合物。沉香所含色酮類和倍半萜類化合物的不同，導致了沉香的質量、香味等差異。越南紅土沉香屬于稀有珍貴品種，市場上假冒、造次情況非常嚴重，迄今為止，未有紅土沉香相關研究報道。筆者通過GC-MS分析越南紅土沉香、黃熟香、吊口沉香的化學成分，并與報道的普通沉香、奇楠沉香進行比較，揭示紅土沉香珍貴之謎，進而為紅土沉香的真偽鑒定和質量評價提供參考依據。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?儀器與試劑 ? HP6890/5975C GC/MS聯用儀（美國安捷倫公司），色譜柱為ZB-5MSI 5% Phenyl-95%DiMethylpolysiloxane（30 m×0.25 mm × 0.25 μm）彈性石英毛細管柱; BP221S萬分之一電子秤（北京賽多利斯天平有限公司）;美國BRANSONIC-5510E-DTH超聲波清洗儀。氣質中使用的試劑均為分析純。

1.1.2 ?樣品 ? 越南紅土沉香（S1）于2013年10月購于越南芽莊，越南黃熟香（S2）樣品于2013年8月購于越南，越南吊口沉香（S3）樣品于2013年4月購于越南，經中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所戴好富研究員鑒定，3批沉香樣品源植物均為Aquilaria crassna。憑證標本（201310YNHT、201308YNHSX、201304DK）存放于中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所。3種沉香的外觀、氣味、質地見圖1和表1。

1.2 ?方法

1.2.1 ?樣品制備 ? 沉香樣品切開粉碎后，分別精確稱取紅土沉香、黃熟香、吊口沉香14.610、50.000、50.000 g，分別加入3倍樣品粉末體積的乙醚溶劑進行超聲提取3次，每次超聲15 min，靜置5 min后過濾得到乙醚提取液，合并3次提取液，揮干后得到沉香的油狀乙醚提取物分別為0.900、1.942、0.566 g。計算其乙醚提取物質量分別占樣品干重的6.16%、3.88%、1.13%。分別取乙醚提取物適量，配制成1 mg/mL的待測樣品溶液。

1.2.2 ?GC-MS分析條件 ? 色譜條件：色譜柱為ZB-5MSI 5%Phenyl-95% Dimethylpolysiloxane （30 m×0.25 mm×0.25 μm）彈性石英毛細管柱;升溫程序：柱溫50 ℃，保持2 min，以5 ℃/min升溫至310 ℃，保持10 min;汽化室溫度250 ℃;載氣為高純He（99.999%）;載氣流量1.0 mL/min;分流比40 ∶ 1;溶劑延遲時間：3.0 min。

質譜條件：電子轟擊（EI）離子源;電子能量70 eV;離子源溫度230 ℃;四極桿溫度150 ℃;接口溫度280 ℃;發射電流34.6 μA;倍增器電壓1 434 V;質量掃描范圍20～550 m/z。

2 ?結果與分析

3個沉香樣品乙醚提取物的總離子流圖（圖2），對總離子流圖中的各峰經質譜數據系統檢索及核對Nist2005和Wiley275標準質譜圖，并借鑒前人和本研究組前期的鑒定方法[6， 12-14]，結合質譜圖與文獻數據進行對照。紅土沉香、黃熟香和吊口沉香乙醚提取物中分別檢測到28、38和47個色譜峰（表2），并用峰面積歸一化法測定這些色譜峰在樣品中的總相對含量之和分別為89.18%、82.41%和79.75%。紅土沉香中鑒定的2-（2-苯乙基）色酮類成分11個（71.27%），黃熟香中檢測到2-（2-苯乙基）色酮類成分14個（68.16%），吊口沉香中檢測到2-（2-苯乙基）色酮類成分18個（23.68%）;紅土沉香中鑒定的倍半萜類化合物7個（11.45%），黃熟香中鑒定的倍半萜類化合物9個（7.07%），吊口沉香中鑒定的倍半萜類化合物3個（21.31%）;紅土沉香中未鑒定成分1個（3.16%），黃熟香中未鑒定成分4個（5.20%），吊口沉香中未鑒定成分5個（22.58%）;吊口沉香中檢測到甾體類成分5個（1.50%），紅土沉香和黃熟香中均未檢測到（表2）。

3 ?討論與結論

2-（2-苯乙基）色酮成分、白木香醛等倍半萜類成分和芐基丙酮等芳香族成分作為沉香中特征性成分，其在沉香中的種類和含量決定了沉香的品質。梅文莉等[12]報道，GC-MS總離子流圖中，2-（2-苯乙基）色酮類成分通常出現在倍半萜類成分之后。結合總離子流圖與鑒定結果對3個樣品進行分析，發現紅土沉香與黃熟香的相似性高于吊口沉香，紅土沉香和黃熟香離子流圖中40 min以前出現的色譜峰數目較少，豐度較低，即倍半萜類成分相對含量低，分別為11.58%和7.07%，而后期出現的色譜峰豐度較高，即色酮類成分相對含量高，分別為71.27%和68.16%，且豐度最高的色譜峰均為2-（2-苯乙基）色酮類成分;而吊口沉香總離子流圖中出現在前面的峰比較多，豐度較高，鑒定的倍半萜類成分相對含量為21.31%，后面的色酮類成分豐度相對較低，占23.68%，且相對含量最大的成分為倍半萜白木香醛（16.00%）。紅土沉香和黃熟香的成分均以色酮為主，而倍半萜的相對含量較低，可能是因為它們都屬于“熟結”沉香的緣故。吊口沉香則相反，色酮的相對含量較低，而倍半萜的相對含量較高，同時還含有紅土沉香和黃熟香等“熟結”沉香中所沒有的甾體類化合物，這些都是其作為“生結”沉香與“熟結”沉香相區別的化學成分特征。紅土沉香與黃熟香在化學成分上的主要區別在于其含量最大的成分不同，紅土沉香中相對含量最大的成分是2-[2-（4-甲氧基）苯乙基]色酮（28.94%），而黃熟香中相對含量最大的成分是6，7-二甲氧基-2-（2-苯乙基）色酮（39.11%）。楊德蘭等[13]研究發現，奇楠沉香與普通沉香的差別主要是奇楠沉香中2-（2-苯乙基）色酮和2-[2-（4-甲氧基）苯乙基]色酮相對含量之和明顯較高，達到37.30%～84.71%，而普通沉香中兩者相對含量之和僅為0.16%～13.30%。本研究所采用的分析方法與楊德蘭等[13]研究分析方法一致，發現紅土沉香中兩者總相對含量之和為51.57%，而黃熟香和吊口沉香中兩者之和分別為0.77%，0.78%。說明該紅土沉香油脂的成分組成與奇楠沉香油脂更為接近，因此其質量優于黃熟香和吊口沉香油脂。奇楠沉香的形成需要悠久的歷史，紅土沉香油脂成分與奇楠油脂接近，說明紅土沉香的形成時間較長，這也印證了民間“千年沉香，萬年紅土”之說。

本研究的越南紅土沉香與越南黃熟香、吊口沉香，以及報道的普通沉香[21-24]和奇楠沉香[13，25]進行對比，從感觀因素分析，越南紅土沉香與普通沉香相比，最大的區別在于紅土沉香產于越南紅色土壤中，其木心為紫褐色，普通沉香中未見木心為紫褐色的報道;與奇楠沉香比較，奇楠沉香油性豐富，切割成卷，而紅土沉香較硬，不易切割。根據楊德蘭[13]報道的奇楠沉香品質評價標準，采用乙醚超聲提取法提取紅土沉香、黃熟香和吊口沉香樣品油脂得率分別為6.16%、3.88%、1.13%，說明該紅土沉香油脂與黃熟香、吊口沉香，以及報道的普通沉香油脂（1.3%～9.7%）含量[13]接近，比奇楠沉香油脂含量（34%～45%）[13]低，這可能與紅土沉香出于紅色土壤，表面混有泥土有關，從而降低了油脂得率。

綜上所述，紅土沉香油脂的成分組成與奇楠沉香油脂接近，但其油脂含量偏低，質地偏硬，其質量介于普通沉香與奇楠沉香之間，更接近于奇楠沉香。本研究通過GC-MS分析越南紅土沉香、黃熟香和吊口沉香的化學成分，比較了三者之間及其與報道的奇楠沉香、普通沉香之間的差別，這為紅土沉香的真偽鑒別以及普通沉香的質量標準研究提供了重要參考依據。

參考文獻

[1] Naef R. The volatile and semi-volatile constituents of agarwood，the infected heartwood of Aquilaria species： a review[J]. Flavour Fragr J， 2011， 26： 73-87.

[2] 劉軍民， 翟 ?明. 國產沉香資源開發利用及化學成分研究進展[J]. 中國新藥雜志， 2012， 21（1）： 48-51.

[3] Barden A， Anak NA， Mulliken T， et al. Hearth of the Matter： Agarwood Use and Trade and CITES Implementation for Aquilaria malaccensis[M]. Cambridge： TRAFFIC International，2000.

[4] 國家藥典編委會. 中華人民共和國藥典[M]. 北京： 中國醫藥科技出版社， 2010： 172-173.

[5] 魏希望. 崖香十二狀[J]. 海南沉香， 2014（4）： 46-81.

[6] Mei W L， Yang D L， Wang H， et al. Characterization and determination of 2-（2-Phenylethyl）chromones in agarwood by GC-MS[J]. Molecules， 2013， 18： 12 324-12 345.

[7] Yang L， Qiao L R， Xie D， et al. 2-（2-Phenylethyl）chromones from Chinese eaglewood[J]. Phytochemistry， 2012， 76： 92-97.

[8] Wu B， Kwon SW， Hwang GS， et al. Eight new 2-（2-phenylethyl）chromone（=2-（2-phenylethyl）-4H-1-benzopyran-4-one）derivatives from Aquilaria malaccensis agarwood[J]. Helv Chim Acta， 2012， 95： 1 657-1 665.

[9] Chen D， Xu Z R， Chai X Y， et al. Nine 2-（2-phenylethyl）chromone derivatives from the resinous wood of Aquilaria sinensis and their inhibition of LPS-induced NO production in RAW 264.7 cells[J]. Eur J Org Chem， 2012， 27： 5 389-5 397.

[10] Gao Y H， Liu J M， Lu H X， et al. Two new 2-（2-phenylethyl）chromen-4-ones from Aquilaria sinensis（Lour.） Gilg[J]. Helv Chim Acta， 2012， 95： 951-954.

[11] Wu B， Lee J G， Lim C J， et al. Sesquiterpenoids and 2-（2-phenylethyl）-4H-chromen-4-one（=2-（2-phenylethyl）-4H-1-benzopyran-4-one）derivatives from Aquilaria malaccensis agarwood[J]. Helv Chim Acta， 2012， 95： 636-642.

[12] 梅文莉， 楊德蘭， 左文健， 等. 奇楠沉香中2-（2-苯乙基）色酮的GC-MS分析鑒定[J]. 熱帶作物學報， 2013， 34（9）： 1 819-1 824.

[13] 楊德蘭， 梅文莉， 楊錦玲，等. GC-MS分析四種奇楠沉香中致香的倍半萜和2-（2-苯乙基）色酮類成分[J]. 熱帶作物學報，2014， 35（6）： 1 235-1 243.

[14] Ishihara M， Tsuneya T， Uneyama K. Fragrant sesquiterpenes from agarwood[J]. Phytochemistry， 1993， 33（5）： 1 147-1 155.

[15] Yoneda K， Yamagata E， Mizuno M. Pharmoconostical studies on the crude drug of “agarwood”（II）： on Chinese agarwood[J]. Show yakugaku Zassi， 1986， 40（3）： 259-265.

[16] Naf R， Velluz A， Brauchli R， et al. Agarwood oil（Aquilaria agallocha Roxb.）ts composition and eight new valencane-， eremophilane-and vetispirane-derivatives[J]. Flav Fragr J， 1995， 10： 147-152.

[17] Ishihara M， Tsuneya T， Uneyama K. Three sesquiterpenes from agarwood[J]. Phytochemistry， 1991， 30（2）： 563-566.

[18] Nakanishi T， Yamagata E， Yoneda K， et al. Three fragarnt sesquiterpenes of agarwood[J]. Phytochemistry， 1984， 23（9）： 2 066-2 067.

[19] Yang J S， Chen Y W. Studies on the constituents of Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg. I. Isolation and structure elucidation of two new sesquiterpenes， baimuxinic acid and baimuxinal[J]. Acta Pharm Sin， 1983， 18（3）： 191-198.

[20] Ishihara M， Tsuneya T， Uneyama ?K. Guaiane sesquiterpenes from agarwood[J]. Phytochemistry， 1991， 30（10）： 3 343-3 347.

[21] 郭曉玲，田佳佳，高曉霞，等. 不同產區沉香藥材揮發油成分GC-MS分析[J]. 中藥材， 2009， 32（9）： 1 354-1 358.

[22] 陳曉穎， 高 ?英， 李衛民，等. 不同結香方法與國產沉香揮發性化學成分的相關性研究[J]. 中國藥房， 2012， 23（11）： 1 017-1 020.

[23] Wetwitayaklung P， Thavanapong N， Charoenteeraboon J. Chemical constituents and antimicrobial activity of essential oil and extracts of heartwood of Aquilaria crassna obtained from water distillation and supercritical fluid carbon dioxide extraction[J]. Silpakorn Univer Sci Tech J， 2009， 3（1）： 25-33.

[24] 林 ?峰， 戴好富，王 ?輝， 等. 兩批接菌法所產沉香揮發油化學成分的氣相色譜-質譜聯用分析[J]. 時珍國醫國藥， 2010， 21（8）： 1 901-1 902.

[25] Ishihara M， Tsuneya T， Uneyama K. Components of the volatile concentrate of agarwood[J]. J Essential Oil Res， 1993， 5（3）： 283-289.