蛇膽的多種鑒別方法

周亞欣

蛇膽自古以來(lái)就是一味名貴藥材，廣泛應(yīng)用于臨床。蛇膽性涼，味苦微甘，有行氣祛痰，祛風(fēng)去濕之功效，用于治療咳嗽多痰、目赤腫痛、皮膚熱毒、口眼生瘡、肺熱咳嗽、胃熱疼痛、肝熱目赤、急性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和痔瘡等。市場(chǎng)上含蛇膽的中藥制劑較多，常見(jiàn)的有蛇膽川貝散、蛇膽陳皮末、蛇膽追風(fēng)丸、蛇膽川貝枇杷膏等。由于蛇膽具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，加上市場(chǎng)需求量大，自然資源遞減，市場(chǎng)上蛇膽的偽品時(shí)有發(fā)現(xiàn)，已報(bào)道的摻假物有雞、鴨、魚、豬、牛等動(dòng)物膽汁和淀粉糊、青菜汁、明膠液、色素以及熟地黃提取液等，以及油膽（用機(jī)油刺激蛇鼻腔或蛇體，使膽汁增多而質(zhì)差）或蜜膽或?qū)⑸吣懚啻谓?，再把蛇膽與酒液分別出售使膽汁稀薄質(zhì)差。因此，應(yīng)正確地鑒別各種蛇膽，從源頭上控制藥品質(zhì)量和保障用藥安全。

一、蛇膽的性狀鑒別

蛇膽的性狀鑒別是根據(jù)膽囊的外形特征、色澤、大小、質(zhì)地、膽蒂位置、膽管（形狀、長(zhǎng)度及韌性）、膽汁稠度、氣味等進(jìn)行比較的鑒別方法。蔣碧英《真?zhèn)紊吣戣b別》描述了正品蛇膽的性狀鑒別要點(diǎn);張穗《十四種蛇膽及其常見(jiàn)偽劣品的外觀性狀鑒別》對(duì)14種蛇膽及其常見(jiàn)偽劣品進(jìn)行了外觀性狀鑒別。這種傳統(tǒng)手段簡(jiǎn)單方便，可直觀地將蛇膽與一般偽品區(qū)別開來(lái)，在早期藥材收購(gòu)、加工部門的現(xiàn)場(chǎng)鑒定中較常使用;但由于蛇膽的形態(tài)學(xué)特征往往因加工方法和條件不同而變化，鑒別效果因人不同（經(jīng)驗(yàn)、主觀影響等），因蛇而異（蛇的種類、大小、生理狀態(tài)等），因觀察環(huán)境（季節(jié)、光線等）而變化，誤差較大，現(xiàn)階段僅作為真?zhèn)舞b別的參考指標(biāo)。

二、蛇膽的顯微鑒別

根據(jù)蛇膽的組織殘片、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行顯微鑒別是蛇膽原藥材鑒別的方法之一。楊育民等《蛇膽和一些小動(dòng)物膽的鑒別》依據(jù)蛇膽內(nèi)含物的形狀、大小及顏色等顯微特征鑒別了蛇膽及其偽充品鑒別;陸惠文《常見(jiàn)蛇膽的組織學(xué)特點(diǎn)及顯微鑒別》根據(jù)蛇膽與偽品等各自的組織學(xué)特點(diǎn)將待檢膽囊標(biāo)本制成石蠟切片，經(jīng)HE染色和顯微觀察，鑒別了蛇膽（眼鏡蛇、金環(huán)蛇、灰鼠蛇等）與偽品蛇膽（雞膽、青魚膽等）。該法雖鑒別效果較好且簡(jiǎn)便，但僅適用于仍保留有顯微特征的原料藥材和成藥。由于膽的內(nèi)含物隨著蛇的生理狀態(tài)不同而有差異，組織學(xué)特征也因切片的取材位置不同而不同，因此增加了鑒別的難度。此外，目前大多數(shù)含蛇膽成藥不保留蛇膽的顯微特征，故此法不宜推廣。

三、蛇膽的理化鑒別

蛇膽的主要成分有膽汁酸、膽色素、膽固醇、黏蛋白、無(wú)機(jī)鹽等，通常膽汁酸被認(rèn)為是其藥理作用的主要功效物質(zhì)。蛇膽膽汁酸主要為?；悄懰?、?；撬狴Z去氧膽酸、?；侨パ跄懰?、石膽酸、游離膽酸等，目前多以這些成分為指標(biāo)對(duì)蛇膽汁進(jìn)行質(zhì)量控制。

理化鑒別中常用的分析方法有化學(xué)分析法和薄層色譜法。蔣三員等《蛇膽質(zhì)量鑒定的研究》通過(guò)比較蛇、雞、鴨、魚膽汁的比黏度、鉀、鈉含量等鑒別了蛇膽。黎源等《雞膽汁與蛇膽汁中氨基酸和微量元素的對(duì)比分析》對(duì)比了蛇膽汁和雞膽汁中的氨基酸及微量元素，發(fā)現(xiàn)蛇膽汁與雞膽汁均含有18種氨基酸，雞膽汁中除了?；撬岷柯缘陀谏吣懼猓渌被岬姆N類和含量非常相似;蛇膽汁中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu的含量均略高于雞膽汁。黃曉文等《眼鏡蛇膽偽品的鑒別》通過(guò)膽囊外觀性狀，膽汁的K2Cr2O7沉淀、糠醛-硫酸顯色反應(yīng)以及薄層色譜法（TLC），鑒別了眼鏡蛇膽檢品，認(rèn)為該方法簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)，可作為真?zhèn)紊吣懙蔫b別方法。植達(dá)詩(shī)《真?zhèn)紊吣懙暮?jiǎn)易鑒別》用糠醛—硫酸法鑒別了蛇膽及其偽品雞膽、鴨膽、魚膽等;鐘榮華《蛇膽及其偽品的鑒別》用糠醛—硫酸法成功鑒別了蛇膽、雞膽、鴨膽和黃鱔膽等，認(rèn)為該法結(jié)果可靠，簡(jiǎn)便易行，但不能鑒別蛇類種屬。薄層層析法由于具備色譜分離特性，因此更適合分析復(fù)雜樣品。孫方人等《廣東眼鏡蛇蛇膽的鑒別和質(zhì)量控制的研究》以?；悄懰釣閷?duì)照用薄層層析法分析了眼鏡蛇蛇膽樣品并見(jiàn)到8個(gè)顯色斑點(diǎn);游勇基等《蟒蛇膽的薄層色譜鑒別》及唐元軍等《蟒蛇膽及其偽品的鑒別》分別用TLC法鑒別了蟒蛇膽;薛漓《一種新的蛇膽摻假品的鑒別》還用TLC法成功鑒別了蛇膽及特殊偽品——熟地黃提取液。此外，TLC法還被廣泛用于蛇膽復(fù)方制劑的鑒別研究。萬(wàn)京樺等《蛇膽川貝枇杷膏中蛇膽汁鑒別方法的實(shí)驗(yàn)研究》構(gòu)建了蛇膽川貝枇杷膏中蛇膽汁的TLC法鑒別方法;陳德球《蛇膽川貝液中蛇膽的鑒別研究》用蛇膽汁及牛磺膽酸鈉作對(duì)照，采用TLC法鑒別蛇膽川貝液中的蛇膽;管玉民《蛇膽川貝液鑒別方法的改進(jìn)》用TLC法鑒別了蛇膽川貝液處方中的蛇膽汁;王倩等《蛇膽追風(fēng)丸的薄層色譜鑒別》用TLC法從蛇膽追風(fēng)丸中成功檢測(cè)出了蛇膽;蔣偉杰等《蛇膽菠蘿蛋白酶腸溶薄膜衣片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》用TLC法從蛇膽菠蘿蛋白酶腸溶薄膜衣片中鑒別出了蛇膽。綜上所述，牛磺膽酸等成分為對(duì)照用TLC法可有效鑒別出復(fù)方制劑中的蛇膽，但不能區(qū)別蛇膽的種屬來(lái)源。

四、蛇膽的分子生物學(xué)鑒別

由于蛇膽保存和制劑加工過(guò)程中的處理方法往往破壞了蛇膽的完整性，因此依據(jù)性狀、顯微特征及理化性質(zhì)進(jìn)行鑒別有一定困難，分子生物學(xué)方法能克服上述問(wèn)題，呈現(xiàn)更客觀的結(jié)果。眾所周知，物種的多樣性是基因多態(tài)性的結(jié)果，而基因多態(tài)性可在分子水平上檢測(cè)，它比在形態(tài)、組織和化學(xué)水平上檢測(cè)更能代表其變異類型的遺傳標(biāo)記。如王義權(quán)等《游蛇科（Colubridae）10種蛇的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA研究》將分子標(biāo)記技術(shù)運(yùn)用到蛇類藥材的鑒定研究中，對(duì)游蛇科10種蛇基因組DNA的多態(tài)性進(jìn)行了分子遺傳標(biāo)記的研究;WANG Yi-quan，ZHOU Kai-ya，XU Luo-shan，《et al. Authentication of Bungarus parvus and its adulterants by DNA molecular method using diagnostic primer》（《.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》）通過(guò)提取金錢白花蛇及其偽品藥材和原動(dòng)物樣品的模板DNA，分析其Cytb基因片斷鑒別了金錢白花蛇;沈曦等《幾種腹蛇12SrRNA和Cytb基因片段序列的初步研究》通過(guò)比較12SrRNA和Cytb基因的部分序列鑒別了幾種蝮屬蛇類;劉向華等《中藥材蛇膽的DNA分子標(biāo)記鑒定研究》從藥材蛇膽的膽衣和膽汁、原動(dòng)物棕黑錦蛇的肌肉和膽汁中提取DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增12SrRNA基因片段，鑒別了蛇類藥材。分子生物學(xué)鑒別方法雖能有效鑒別出蛇類藥材的種屬來(lái)源，目前在蛇類藥材的鑒別中應(yīng)用較廣，但由于市售蛇膽樣品的復(fù)雜性，蛇膽DNA的含量較低，故此法在蛇膽鑒別中的應(yīng)用較少，具體應(yīng)用方案還有待于進(jìn)一步完善。

綜上所述，蛇膽的鑒別雖歷史悠久，但由于技術(shù)方法的制約，目前各種方法均存在一定的缺陷，2010版藥典中亦缺乏較為全面的質(zhì)量控制方法。隨著研究手段的不斷進(jìn)步，運(yùn)用先進(jìn)的分子生物學(xué)手段，采用多種鑒別方法綜合驗(yàn)證、多指標(biāo)綜合控制，從而制定更完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是今后蛇膽質(zhì)量控制的必然趨勢(shì)。