抗疏健骨顆粒的長期毒性實驗研究*

史傳道，劉海英，張榮強，陳志輝，樊曉晨

1陜西中醫學院，陜西 咸陽 712046；2第四軍醫大學；3西安紅十字會醫院

抗疏健骨顆粒的長期毒性實驗研究*

史傳道1，劉海英2，張榮強1，陳志輝1，樊曉晨3

1陜西中醫學院，陜西 咸陽 712046；2第四軍醫大學；3西安紅十字會醫院

目的：觀察抗疏健骨顆粒長期應用的安全性，為臨床用藥提供實驗依據。方法：將SD大鼠160只隨機分為高劑量組(40 g/kg)、中劑量組(20 g/kg)、低劑量組(10 g/kg)及空白對照組，連續灌胃給藥6個月。分別于實驗中期(給藥3個月)、實驗結束(給藥6個月)及停藥后4周恢復期測量大鼠體質量，計算臟器系數，測定血液學和血液生化學指標，作組織病理學檢查。結果：抗疏健骨顆粒高、中、低劑量組大鼠的外觀體征，行為活動，體質量，臟器系數，血液學和血液生化學指標與空白對照組比較，均無統計學差異(P＞0.05)；病理檢查未見與藥物毒性相關的明顯病變，停藥后也未見藥物延遲性毒性反應。結論：抗疏健骨顆粒在規定劑量下口服是安全的，無明顯毒性反應。

抗疏健骨顆粒；SD大鼠；長期毒性實驗

抗疏健骨顆粒以“補腎、健脾、活血”立法，由淫羊藿、丹參、杜仲、懷牛膝、白術、骨碎補等中藥組成，用于防治骨質疏松癥。為確保臨床用藥的安全性，本研究對其進行了大鼠長期毒性試驗。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 抗疏健骨顆粒(1 g干浸膏粉相當于13.5 g生藥)由陜西省中藥基礎與新藥研究重點實驗室提供，使用時加蒸餾水配制成不同藥物濃度供實驗應用；化學試劑均為市售分析純；血液生化檢測專用試劑及血液細胞學檢測專用試劑均為專供產品。

1.2 實驗動物 S D大鼠160只，體質量80～110g，雌雄各半，雌性大鼠無孕，由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號：S C X K(陜) 2012-003。動物按性別分籠飼養于有空調的動物實驗室內，室溫(22±40)℃，相對濕度60%±80%。自由飲水，喂標準顆粒飼料。

1.3 實驗儀器 全自動生化分析儀(O l y m pu s A U 600型，日本)；全自動血細胞分析儀(S ys m a x X T-1800，日本)；全自動血凝分析儀(A M A X-200型，德國)。

1.4 分組及給藥 將6～8周齡S D大鼠160只隨機分為抗疏健骨顆粒高劑量組(40 g/k g)、中劑量組(20 g/k g)、低劑量組(10 g/k g)及空白對照組(生理鹽水)各40只，高、中、低3個劑量分別為人每天用量的80、40、20倍。給藥體積為0.01m L/g (體質量)，空白對照組給予等體積生理鹽水溶液，2次/d，每周6天，連續給藥6個月。給藥前及給藥期間每周稱體質量1次，并按體質量調整給藥計量。全部實驗過程分3個階段，即試驗中期(給藥3個月)、試驗結束(給藥6個月)及4周的停藥恢復期。實驗期間每天觀察大鼠一般狀態、體征、攝食量、飲水及糞便狀況。如有中毒反應的動物取出單籠飼養，重點觀察。有死亡或瀕死動物及時尸檢［1］。

1.5 標本采集與處理 連續給藥3個月，在末次給藥24小時后，每組隨機抓取10只大鼠(雌雄各半)，腹腔注射戊巴比妥鈉(35m g/k g)麻醉，腹主動脈取血，用血細胞分析儀檢測［2］采集血樣的紅細胞(R B C)、血紅蛋白(H G B)、白細胞(W B C)、血小板(P L T)、淋巴細胞系(L Y M)及中性細胞系(M O N)等血液學指標。另外取血分離血清，用生化自動分析儀測定血清中的總膽紅素(T B I l)、總蛋白(T P)、白蛋白(A L B)、谷丙轉氨酶(A L T)、谷草轉氨酶(A S T)、堿性磷酸酶(A L P)、尿素氮(B U N)、肌酐(C rea)、葡萄糖(GL U)等生化指標。并進行全面尸檢，取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺等臟器稱重，計算臟器系數。然后對上述主要臟器及胃、小腸、子宮、卵巢、睪丸、腦等臟器用10%甲醛固定，進行常規病理學檢查［3］。其余動物連續給藥6個月，在停藥后24小時每組隨機抓取20只動物(雌雄各半)，依次進行如上檢測［4］。留作恢復期觀察的動物于停藥4周時依次進行如上檢測。

1.6 統計學方法 數據采用S P SS 20.0軟件進行統計處理，計量資料以(±s)表示，組間比較采用方差分析，采用L S D-t法進行兩兩比較；系統尸解及組織病理學采用定性指標描述，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 對動物一般情況的影響 給藥期間，抗疏健骨顆粒各劑量組及空白對照組大鼠外觀體征、行為活動、進食量及糞便等狀況正常，動物無一死亡；高劑量組個別時間點大鼠食量有所減少，但與空白對照組比較無明顯差異；停藥觀察4周亦無明顯變化，見表1。

2.2 對動物體質量的影響 給藥期間抗疏健骨顆粒各劑量組及空白對照組大鼠體質量正常增長。與空白對照組比較，各劑量組體質量變化差異無統計學意義(P＞0.05)；停藥觀察4周后，亦無明顯變化，見表2。

表1 對大鼠食量的影響 g/(kg·d)

表2 對大鼠體質量的影響 g/(kg·d)

2.3 對大鼠血液學指標的影響 抗疏健骨顆粒連續給藥3個月后，與空白對照組比較，各項血液學指標差異無統計學意義；連續給藥6個月后，高劑量組大鼠W B C、L Y M略有升高，但在正常范圍內，與空白對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)；其他各劑量組的各項指標與空白對照組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；停藥恢復1月后，中劑量組、低劑量組大鼠P T略有升高，與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)；其他指標與空白對照組比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，見表3。

表3 對大鼠血液學指標的影響

2.4 對大鼠血液生化指標的影響 抗疏健骨顆粒連續給藥3個月后，中劑量組大鼠血清A S T值有所降低，與空白對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)；高劑量組血清C rea值有所升高，與空白對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)，其他各劑量組的各項指標與空白對照組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；連續給藥6個月后，高劑量組大鼠血清C rea值升高，與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，其他各劑量組各項指標與空白對照組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；停藥恢復1個月后，與空白對照組比較，各項指標差異無統計學意義(P＞0.05)，見表4。

表4 對大鼠血液生化指標的影響

2.5 對動物臟器系數的影響 給鼠連續用藥3月、6月和停藥4周后，抗疏健骨顆粒高、中、低劑量組和空白對照組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺等主要臟器系數比較差異無統計學意義(P＞0.05)，表明長期灌服抗疏健骨顆粒對大鼠主要臟器無明顯影響，見表5。

表5 對大鼠臟器系數的影響 mg/g

2.6 組織學檢查 連續用藥3月、6月和停藥4周后，分別處死動物，剖取臟器。肉眼觀察見臟器外形、體積、色澤正常，無充血、腫脹、壞死等異常現象。然后，用10%甲醛溶液固定臟器48小時，按常規方法做病理切片，在光學顯微鏡下觀察。結果空白對照組有2例、高劑量組有1例標本存在肝細胞輕度脂肪變性，屬動物常態分布；高劑量組有1例標本有部分睪丸組織萎縮，綜合血液學和生化學指標分析，判定由睪丸發育不良所致，與藥物毒性引起的病變無關。其他各劑量組臟器組織形態學正常，與空白對照組比較，未見明顯由藥物毒性引起的病理改變。表明大鼠長期灌胃抗疏健骨顆粒不會影響動物器官組織形態學改變。

3 結論

本研究表明抗疏健骨顆粒以40、20、10 g/k g (體質量)，相當于人每天用量的80、40、20倍，連續灌胃給藥3個月、6個月及停藥4周后，與空白對照組比較，動物的一般狀況、體質量、主要臟器系數無明顯差異；血液學指標、血液生化學指標各劑量組與空白對照組比較，雖有個別檢測指標存在一定差異，但其測定值仍在正常值范圍內或停藥后恢復到正常值范圍內，故無實際意義［5］。主要臟器的病理檢查表明，組織形態學正常，未見與藥物毒性相關的明顯病變；停藥4周后也未見藥物延遲性毒性反應。表明抗疏健骨顆粒在規定劑量下口服是安全的，無明顯毒性反應。

［1］ 中華人民共和國衛生部藥政管理局.中藥新藥研究指南(藥學、藥理學、毒理學)［M］.北京：中華人民共和國衛生部藥政管理局，1994：194-235.

［2］ 中華人民共和國食品藥品監督管理局.中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則［M］.北京：中華人民共和國衛生部，2005：3-13.

［3］ 徐叔云.藥理實驗方法學［M］.3版.北京：人民衛生出版社，2003：231.

［4］ 黃芳華.中藥新藥申報資料中長期毒性試驗的常見問題［J］.中國新藥雜志，2004，13(7)：661-663.

［5］ 中華人民共和國衛生部藥政管理局.新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編［M］.北京：人民衛生出版社，1993：199-200.

The Long-term Toxicity Testof KangShu JianGu Granuleson SD Rats

SHIChuandao1,LIU Haiying2,ZHANG Rongqiang1,CHEN Zhihui1,FAN Xiaochen3
1 ShaanxiUniversity of Chinese Medicine,Xianyang 712046,China; 2 The Fourth Military Medical University;3 Xi′an Red Cross Hospital

Objective:To observe the long-term safety of KangShu JianGu granules(anti-osteoporosis and bone-strengthening granules)and provide the experimental basis for clinicalmedication.Methods:Totally 160 SD ratswere randomized into high dosegroup(40 g/kg),middle dosegroup(20 g/kg),low dose group(10 g/kg)and blank group,w ith intragastrically adm inistered for6months.The rats'constitution tested,organ coefficient counted, hematologic and biochem ical indexes determ ined aswell as histopathological examinationswere conducted in the m iddle period(administered for 3months),in the end period(administered for 6months)and after 4 weeks of stoppingmedicine respectively.Results:In the comparison of rats'outward appearance,behavior,constitution,organ coefficient as well as hematologic and biochem ical indexes between the high,m iddle and low dose groups and the blank group,therewas no significantdifference;by pathologicalexam ination,therewas no obvious illness relevant to medical toxicity and no indication of delayed toxicity reaction after stopping medicine.Conclusion:KangShu JianGu granulesof the specified dose taken orally are safew ithoutobvious toxic reaction.

KangShu JianGu granules;SD rat;long-term toxicity test

R285.15

A

1004-6852(2015)03-0014-06

2014-02-22

2012年陜西省科技統籌創新工程計劃項目(編號2012KTCL03-22)；陜西省中管局中醫藥科研項目(編號13-LC069)；陜西省教育廳科研項目(編號11JK0674)。

史傳道(1965—)，男，碩士研究生導師，教授。研究方向：退行性骨病的中西醫結合診治。