淺析細菌內(nèi)霉素在藥品檢驗中的作用

顧 佳，張 斌，崔曉懿

哈爾濱市食品藥品檢驗檢測中心

淺析細菌內(nèi)霉素在藥品檢驗中的作用

顧 佳，張 斌，崔曉懿

哈爾濱市食品藥品檢驗檢測中心

在藥品的生產(chǎn)和流通過程中，內(nèi)霉素污染問題是不可能完全避免的。由于細菌內(nèi)霉素對人體的嚴重危害，藥品細菌內(nèi)霉素的檢測程序就必不可少。現(xiàn)如今細菌內(nèi)霉素的檢測方法，主要有凝膠法、動態(tài)濁度法、顯色基質(zhì)法三種方法。

藥品檢測；內(nèi)霉素；凝膠法；濁度法；顯色基質(zhì)法

細菌內(nèi)霉素作為外源性致熱源，可以激活人體內(nèi)的中性粒細胞，從而導(dǎo)致體溫調(diào)節(jié)中樞的發(fā)熱現(xiàn)象。內(nèi)霉素通過消化道進入人體時并不能產(chǎn)生危害，可是一旦通過注射的途徑進入血液，就會使人體產(chǎn)生“熱原反應(yīng)”引起不同的疾病。因此在醫(yī)藥檢測領(lǐng)域，無論是注射用藥劑、放射性藥物還是抗生素、疫苗等的藥品都必須進行細菌內(nèi)霉素含量的檢測。

一、細菌內(nèi)霉素的檢測手段

現(xiàn)在的細菌內(nèi)霉素檢測手段，主要有凝膠法和光度測量法兩種。

1.1 、凝膠法

凝膠法是利用鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)來檢測藥品中是否含有過量細菌內(nèi)霉素的方法。凝膠法操作簡單，即便離開實驗室也能對細菌內(nèi)霉素的含量進行檢測。

1.2 、光度測量法

光度測量法分為濁度法和顯色基質(zhì)法在藥品的試劑檢測中，我們通常使用的方法是動態(tài)濁度法。動態(tài)濁度法是通過檢測反應(yīng)混合物的濁度到達某一吸光度的速率計算樣品內(nèi)霉素含量的一種方法。

二、細菌內(nèi)霉素檢測幾種方法的對比

為了保證數(shù)據(jù)的一致性和準確性，我們所引用的主要數(shù)據(jù)就是依次使用凝膠法、動態(tài)濁度法、顯色基質(zhì)法對乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液進行檢測。

2.1 、凝膠法和動態(tài)濁度法細菌內(nèi)霉素檢測對比

所需主要儀器和試劑：BET-32M細菌內(nèi)霉素檢測儀；UV-2550型紫外分光光度計；PHS-3C型酸度計；ZH-2型自動漩渦混合器；細菌內(nèi)霉素檢查用水（bet）；鱟試劑；內(nèi)霉素標準品（ces）。

樣品：乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液。

2.1.1.細菌內(nèi)霉素限值的確定

已知L＝K/M，K為人用每kg體重每小時最大可接受的內(nèi)霉素劑量，K＝5 EU/（kg·h）?？紤]到藥品使用安全性要求及一般大容量輸液細菌內(nèi)霉素限值要求，將本品的L定為0.5 EU/mL為宜。

2.1.2.標準曲線的可靠性試驗

用細菌內(nèi)霉素檢查用水對內(nèi)霉素標準品進行稀釋為四個濃度的樣品，于鱟試劑混合均勻后插入細菌內(nèi)霉素檢測儀內(nèi)進行檢測，經(jīng)過測量整理可得系數(shù)r＞0.980，故標準曲線成立。

2.1.3.樣品最大稀釋倍數(shù)和干擾性試驗

按照公式MVD=L/λ，計算得樣品實驗時MVD為16倍。將乳酸左氧氟沙星注射液分別稀釋為2、4、6、8倍進行回收實驗。分別取上述各液0.15ml加到預(yù)先加有0.15ml的鱟試劑反應(yīng)管，混合均勻在同上檢測條件下進行測定，測定結(jié)束后按照標準曲線回歸方程計算出內(nèi)霉素含量。通過實驗可知，樣品的回收率均在規(guī)定范圍之間，符合相關(guān)要求。

2.1.4.動態(tài)濁度法與凝膠法檢測結(jié)果比較

按照《中國藥典》中用動態(tài)濁度法和凝膠法對乳酸左氧氟沙星進行檢測可知兩種方法結(jié)果均符合規(guī)定，詳表如下：

動態(tài)濁度法與凝膠法檢測結(jié)果

動態(tài)濁度法和凝膠法比較來說，有著操作簡便，結(jié)果直觀可見的優(yōu)點。針對藥品的細菌內(nèi)霉素檢測領(lǐng)域要求高、批量大的特點是非常實用的。

2.2 、顯色基質(zhì)法與動態(tài)濁度法細菌內(nèi)霉素檢測實驗比較

所需主要儀器和試劑：渦旋混合儀；紫外可見分光光度計；璃比色杯；定量可調(diào)移液器；顯色基質(zhì)鱟試劑盒；顯色基質(zhì)；內(nèi)霉素標準品（CES）；細菌內(nèi)霉素檢測用水（BET）；Hcl反應(yīng)終止劑。

樣品：乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液

2.2.1.細菌內(nèi)霉素限值的確定

原理同實驗2.1，通過計算可得，本樣品的細菌內(nèi)霉素限制L= 0.5EU/mg

2.2.2.標準曲線可靠性試驗

用和試驗2.1中標準曲線的可靠性試驗2.1.2中的方法對樣品的標準曲線進行可靠性試驗，得到r≥0.980，故標準曲線有效。

2.2.3.樣品的干擾實驗

將三組實驗用乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液加入BET，稀釋4種比例的稀釋級原液，在四個稀釋級原液中加入0.2EU/ml的內(nèi)霉素標準品。用分光光度計測量出稀釋原液與內(nèi)霉素標準品的吸光度。根據(jù)結(jié)果計算稀釋原液除1：5的一組有輕微增強作用外，其余均沒有抑制或增強作用，回收率都在規(guī)定的要求之內(nèi)。

2.2.4.樣品的測定

選擇1：7的稀釋液測定，三組乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的檢測結(jié)果，都符合規(guī)定。

通過實驗對比可，顯色基質(zhì)法除了對實驗用品和稀釋液要求無熱源外，對鱟試劑靈敏度也有著比較高的要求。但而且顯色基質(zhì)法與凝膠法相比，抗干擾能力更強。相比于動態(tài)濁度法，顯色基質(zhì)具有更好的重復(fù)性和可操作性，這種方法卻有著比凝膠法和動態(tài)濁度法更快速、更靈敏。因為它僅需要可見分光光度計和玻璃比色皿就能夠得出結(jié)論，在實驗條件比較簡單的地方也可以展開，因此對于醫(yī)藥檢測領(lǐng)域的細菌內(nèi)霉素的測定，也有著很大的現(xiàn)實意義。

綜上所述，傳統(tǒng)的凝膠法有著測量簡單方便的特點；動態(tài)濁度法有著測量結(jié)果數(shù)據(jù)化更準確的優(yōu)點；顯色基質(zhì)法更是兼有著測量準確和測量工具簡單的特點。這三種方法各有優(yōu)點，因此無論是凝膠法，動態(tài)濁度法，顯色基質(zhì)法目前都是在藥品內(nèi)霉素測量領(lǐng)域常用的方法。所以在日常的藥品檢測當中，就應(yīng)該根據(jù)具體的需要靈活巧妙的選擇和運用這幾種方法。

[1]李春燕.定量檢測香丹注射液中的細菌內(nèi)霉素的方法分析[J].中國藥物經(jīng)濟學.2014(03)

[2]潘宇虹,鐘巖.細菌內(nèi)霉素檢查法在疫苗生產(chǎn)檢查中的應(yīng)用[J].生物技術(shù)世界.2014(03)