Survivin和OPN在不同宮頸病變組織中的表達(dá)及相關(guān)研究

王艷書，魯靜，李海燕*

（1.大理學(xué)院，云南大理671000；2.保山中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，云南保山678000）

Survivin和OPN在不同宮頸病變組織中的表達(dá)及相關(guān)研究

王艷書1，魯靜2，李海燕1*

（1.大理學(xué)院，云南大理671000；2.保山中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，云南保山678000）

目的：探討Survivin、OPN在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤（CIN）、宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測Survivin、OPN在10例慢性宮頸炎、20例宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ期（CINⅢ）和50例宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況。結(jié)果：Survivin和OPN在慢性宮頸炎、CINⅢ、宮頸鱗癌中的表達(dá)陽性率均隨病變嚴(yán)重程度逐級增強(qiáng)，3組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Survivin的表達(dá)陽性率與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級有關(guān)（P＜0.05），與年齡、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P＞0.05）；Survivin的表達(dá)陽性率與宮頸鱗癌的臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與年齡、病理分級無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論：Sur?vivin+OPN的聯(lián)合檢測有可能作為宮頸鱗癌的早期診斷、病情監(jiān)測和預(yù)后判斷的指標(biāo)。

Survivin；OPN；免疫組化；慢性宮頸炎；宮頸上皮內(nèi)瘤；宮頸鱗癌

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)中發(fā)病率最高的惡性腫瘤，全世界每年約有50萬新發(fā)子宮頸癌病例，約有23萬婦女死于宮頸癌〔1〕。我國宮頸癌的發(fā)病率高居世界第二位，近年來宮頸癌的發(fā)生還有年輕化的趨勢。腫瘤是一個多因素、多步驟、多階段、連續(xù)發(fā)展的過程，與多種癌基因、抑癌基因、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)、調(diào)控、細(xì)胞凋亡及血管的生長有關(guān)〔2〕。生存素（Survivin）是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子，具有抑制凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂及促進(jìn)血管生成的作用。Survivin參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是一種有多種功能的酸性分泌型鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白，在多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中起著促進(jìn)作用〔3〕，其高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展和患者預(yù)后有關(guān)。Survivin和OPN都可以通過抑制細(xì)胞的凋亡從而在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及生長和轉(zhuǎn)移中起到重要的作用。本文通過采用免疫組織化學(xué)SP法檢測Survivin、OPN在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤（CIN）及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，旨在探討Survivin、OPN的表達(dá)與慢性宮頸炎、CIN、宮頸鱗癌三者間的關(guān)系及二者在宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 資料來源從保山市人民醫(yī)院病理科2009年4月至2012年1月存檔的手術(shù)標(biāo)本中選取臨床病理資料完整，經(jīng)手術(shù)切除的宮頸鱗癌標(biāo)本50例，CIN標(biāo)本20例（均屬CINⅢ期），因子宮肌瘤手術(shù)行子宮全切標(biāo)本中的慢性宮頸炎組織標(biāo)本10例。50例宮頸鱗癌的患者年齡范圍在28～66歲，平均年齡47歲。其中年齡≥45歲的31例，年齡＜45歲的19例，所有患者術(shù)前均未做過放化療。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測一抗Survivin為AR0270單克隆抗體工作液，購自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司；OPN為GPP6344，多克隆抗體工作液，購自上海今邁生物科技有限公司；二抗為DD13；DAB溶液KS002加強(qiáng)型，陽性對照片也分別購自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司和上海今邁生物科技有限公司。采用免疫組化SP法進(jìn)行染色，標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，每個蠟塊連續(xù)4 um切片3張，其中1張做HE染色，所有切片采用同批次試劑檢測。

1.3 免疫組織化學(xué)評分Survivin和OPN的染色均以細(xì)胞漿和（或）細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色或棕色顆粒為陽性標(biāo)準(zhǔn)。綜合染色面積和染色強(qiáng)度進(jìn)行評分。第一項，按細(xì)胞顯色有無及染色深淺對強(qiáng)度評分：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；第二項，每張切片隨機(jī)觀察10個視野，按每高倍鏡視野（×200）陽性細(xì)胞數(shù)百分比計分：陰性為0分，小于10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%者3分，＞75%為4分。以上兩項評分相乘即為陽性強(qiáng)度，0分為陰性（-），1～4分為弱陽性（+），5～8分為陽性（++），9～12分為強(qiáng)陽性（+++），以上結(jié)果均由至少兩位病理科醫(yī)生以雙盲法觀察共同確定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，統(tǒng)計方法采用χ2檢驗（根據(jù)不同數(shù)值采用χ2檢驗專用公式、對于樣本數(shù)＜40的數(shù)值采用校正公式和對于樣本數(shù)＞1且＜5的數(shù)值采用確切概率法進(jìn)行計算）。對于相關(guān)性分析采用配對資料的關(guān)聯(lián)性分析。

2 結(jié)果

2.1 Survivin、OPN在不同宮頸病變組織中的表達(dá)

Survivin在慢性宮頸炎、CINⅢ、宮頸鱗癌這3種不同宮頸病變組織中的陽性表達(dá)率依次為10%、35%、72%。見表1。將Survivin在以上3種不同宮頸病變組織中的陽性表達(dá)率進(jìn)行兩兩χ2檢驗，結(jié)果表明，Survivin在慢性宮頸炎和CIN中的表達(dá)陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.307，P＞0.05），但Survivin在慢性宮頸炎和宮頸鱗癌中的表達(dá)陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.004，P＜0.05），Survivin在CIN和宮頸鱗癌中的表達(dá)陽性率比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001，P＜0.05）。見表2。

表1 Survivin在不同宮頸病變組織中的表達(dá)

表2 Survivin在不同宮頸病變組織中的陽性表達(dá)率兩兩比較

OPN在慢性宮頸炎、CINⅢ、宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)率依次為10%、45%、62%。見表3。將OPN在以上3種不同宮頸病變組織中的陽性表達(dá)率進(jìn)行兩兩χ2檢驗，結(jié)果表明，OPN在慢性宮頸炎和CIN中的表達(dá)陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P= 0.001，P＜0.05），OPN在慢性宮頸炎和宮頸鱗癌中的表達(dá)陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.003P＜0.05），OPN在CIN和宮頸鱗癌中的表達(dá)陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.055，P＞0.05）。見表4。

，

表3 OPN在不同宮頸病變組織中的表達(dá)

表4 OPN在不同宮頸病組織中的陽性表達(dá)率兩兩比較

2.2 Survivin、OPN表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Survivin在宮頸鱗癌不同臨床分期、不同病理分級組織中的表達(dá)陽性率比較均存在統(tǒng)計學(xué)差異，但在年齡及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)陽性率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。OPN在宮頸鱗癌不同臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)陽性率比較差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義，但在年齡及不同病理分級組織中的表達(dá)陽性率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。見表5。采用配對資料的關(guān)聯(lián)性分析方法對宮頸鱗癌組織中Survivin與OPN表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行檢驗，χ2=5.702，P=0.017，P＜0.05，r=0.627，說明宮頸鱗癌組織中Survivin與OPN的表達(dá)之間呈正相關(guān)，相關(guān)程度高。

表5 宮頸鱗癌中Survivin和OPN的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個漸進(jìn)的過程，從宮頸的良性病變發(fā)展到上皮內(nèi)瘤變（CIN）再到宮頸癌要幾年到十幾年的時間。宮頸癌如能早期發(fā)現(xiàn)并及時治療，治愈率可達(dá)90%以上。早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變CIN對預(yù)防和治療宮頸癌有重要意義。宮頸癌早期的臨床表現(xiàn)不典型也沒有特異性，現(xiàn)有的宮頸癌篩查方法的檢出率也不是很穩(wěn)定，目前也尚無可靠的無創(chuàng)性指標(biāo)來預(yù)測宮頸癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后。在分子水平上找到一種理想的腫瘤標(biāo)記物，能在宮頸癌的發(fā)病危險度預(yù)測、早期診斷及預(yù)后判斷等方面發(fā)揮作用是非常必要的。

Survivin在分化成熟的組織中不表達(dá)，而選擇性地在絕大多數(shù)惡性腫瘤組織中高表達(dá)〔4〕，并且Survivin的表達(dá)增高在腫瘤發(fā)展的早期就已經(jīng)出現(xiàn)，并隨著腫瘤的生長、浸潤而表達(dá)逐漸增強(qiáng)。本研究中Survivin在慢性宮頸炎、CINⅢ、宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)按宮頸病變的嚴(yán)重程度逐級增強(qiáng)，并且在三者中的陽性表達(dá)間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，尤其是在CINⅢ與宮頸鱗癌中的表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，這提示Survivin可能與宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，Survivin可能參與了宮頸癌形成過程的調(diào)節(jié)，并促進(jìn)了慢性宮頸炎、CINⅢ等損傷發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的作用，Survivin有可能成為預(yù)測宮頸癌發(fā)病危險度和宮頸癌早期診斷的指標(biāo)。Survivin的表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級有關(guān)，與年齡、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，這提示Survivin的表達(dá)可能與宮頸鱗癌的浸潤和惡性程度有關(guān)，故Sur?vivin的檢測有可能成為宮頸鱗癌病情監(jiān)測的指標(biāo)，但不宜作為判斷宮頸鱗癌預(yù)后的獨立指標(biāo)。最新研究表明OPN可能成為臨床上首選的腫瘤標(biāo)志物。OPN與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系，大量研究也證實腫瘤轉(zhuǎn)移往往伴有OPN的表達(dá)增高，因此它被公認(rèn)為腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因或轉(zhuǎn)移基因〔5〕。OPN對于腫瘤的增殖過程有重要意義，OPN可以通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子從而促進(jìn)腫瘤新生血管生成〔6〕，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究中OPN在慢性宮頸炎、CINⅢ、宮頸鱗癌中的表達(dá)陽性率也隨著宮頸病變的嚴(yán)重程度逐級遞增，三者組間陽性表達(dá)率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。本次研究中，OPN在慢性宮頸炎中的表達(dá)陽性率與CINⅢ中陽性表達(dá)率及宮頸鱗癌中陽性表達(dá)率相比，差異都有統(tǒng)計學(xué)意義，但OPN在CINⅢ中的表達(dá)陽性率和宮頸癌中的表達(dá)陽性率相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這與一些研究者的結(jié)果不一致，其研究結(jié)果顯示宮頸癌組與慢性宮頸炎組間OPN表達(dá)陽性率間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而OPN表達(dá)陽性率在CIN組與慢性宮頸炎組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這可能與本次研究病例數(shù)少及CIN病例均為CINⅢ有關(guān)。OPN的表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，這一結(jié)果與郝筱詩等〔7〕的研究結(jié)果相同，這提示OPN的表達(dá)與宮頸鱗癌的浸潤、病變進(jìn)展程度及預(yù)后有關(guān)，故OPN的檢測可能成為宮頸鱗癌病情監(jiān)測和預(yù)后判斷的指標(biāo)。OPN的表達(dá)與宮頸鱗癌的年齡、病理分級無關(guān)，提示OPN不宜作為判斷宮頸鱗癌惡性程度的獨立指標(biāo)。這與有關(guān)學(xué)者的研究結(jié)果〔8-9〕及其他文獻(xiàn)報道的結(jié)果不完全一致。這可能與本次試驗中樣本量太少、免疫組化結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)，還可能與OPN在宮頸癌組織中的表達(dá)具有不穩(wěn)定性有關(guān)。Survivin與OPN在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。Survivin和OPN的表達(dá)都與宮頸鱗癌的臨床分期有關(guān)，而在與病理分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系上二者則呈互補(bǔ)，所以Survivin+OPN的聯(lián)合檢測在一定程度上可能有望成為宮頸鱗癌早期診斷和預(yù)后判斷的指標(biāo)，本次研究為宮頸鱗癌早期診斷和預(yù)后判斷提供了一定的理論支持，今后還應(yīng)加大樣本量進(jìn)行更深入的研究。

〔1〕楊艷秋，段麗.德宏州人乳頭瘤病毒感染與TCT檢測相關(guān)性分析〔J〕.大理學(xué)院學(xué)報，2012，11（12）：63-65.

〔2〕李昌榮，李紅浪.Survivin與胃癌相關(guān)性的研究進(jìn)展〔J〕.世界華人消化雜志，2014，22（33）：5079-5085.

〔3〕陳柏林，彭杰，鄔麟.骨橋蛋白在食管腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2014，24（21）：44-47.

〔4〕Weng Y，F(xiàn)ei B，Chi A L，et al.Inhibition of gastric cancer cell growth in vivo by overexpression of adenoassociated vi?rusmediated survivin mutant C84A〔J〕.Oncol Res，2013，20（9）：411-417.

〔5〕張建軍，候培珍.骨橋蛋白與腫瘤的轉(zhuǎn)移〔J〕.中國醫(yī)藥指南，2012，10（29）：431-432.

〔6〕王鳳龍，周林玉.骨橋蛋白在腎癌中表達(dá)的相關(guān)研究〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述，2012，18（15）：2412-2414.

〔7〕郝筱詩，安燕，王立巖，等.骨橋蛋白在宮頸組織中的表達(dá)及與宮頸癌進(jìn)展的相關(guān)性研究〔J〕.中國實驗診斷學(xué)，2012，16（1）：65-67.

〔8〕龐曉云，伍建國，霍木蘭.子宮頸癌患者中骨橋蛋白的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中外醫(yī)學(xué)研究，2011，9（21）：5-6.

〔9〕關(guān)婷，譚同煥.宮頸腫瘤組織中骨橋蛋白和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及意義〔J〕.華南國防醫(yī)學(xué)雜志，2011，25（4）：316-318.

Expressions and Related Studies of Survivin and OPN in Different Cervical Lesions

Wang Yanshu1,Lu Jing2,Li Haiyan1*
（1.Dali University,Dali,Yunnan 671000,China;2.Baoshan College of Traditional Chinese Medicine,Baoshan, Yunnan 678000,China）

Objective:To discuss the expressions of Survivin and OPN in the tissues of chronic cervitis,cervical intraepithelial neoplasia（CIN）and cervical squamous carcinoma.Methods:Immunohistochemical SP method was applied to detect the expressions of Survivin and OPN in 10 cases of chronic cervicitis,20 cases of CIN and 50 cases of cervical cancer.Results:The expression positive rate of Survivin and OPN in chronic cervicitis、CINⅢ、cervical squamous carcinomas increased with the lesion severity level enhancement，three groups of comparative differences are statistically significant（P＜0.05）.The expression positive rate of Survivin in cervical squamous carcinomas was associated with clinical stages and pathologic stage（P＜0.05）,but has nothing to do with age and lymph nodes metastasis（P＞0.05）.The expression positive rate of OPN in cervical squamous carcinomas was associated with clinical stages and lymph node metastasis（P＜0.05）,but has nothing to do with age and pathologic stage（P＞0.05）.Conclusion:The joint detection of Survivin and OPN may serve as the index for early diagnosis,condition monitoring and prognosis judgment of cervical squamous carcinomas.

Survivin;OPN;immunohistochemical;chronic cervicitis;CIN;cervical squamous carcinomas

R737.33

A

1672-2345（2015）08-0049-04

10.3969∕j.issn.1672-2345.2015.08.014

（責(zé)任編輯 袁霞）

云南省教育廳科研基金一般項目（2014Y400）

2014-12-16

2015-04-30

王艷書，講師，主要從事臨床護(hù)理學(xué)研究.

*通信作者：李海燕，教授.