電針三陰交對自然圍絕經期大鼠雌二醇和大腦皮層神經遞質的影響

彭曉濤，程凱，徐玲，李由

(1.北京醫院針灸按摩科，北京 100730；2.北京中醫藥大學針灸推拿學院)

·基礎研究·

電針三陰交對自然圍絕經期大鼠雌二醇和大腦皮層神經遞質的影響

彭曉濤1，程凱2，徐玲2，李由2

(1.北京醫院針灸按摩科，北京 100730；2.北京中醫藥大學針灸推拿學院)

目的 研究電針三陰交對自然圍絕經期大鼠卵巢雌二醇(E2)和大腦皮層神經遞質的影響。方法 本實驗以自然衰老大鼠為模型，將大鼠以隨機數字法分為治療組(電針組)、模型組(對照組)、正常組(青年組)，每組7只。治療組大鼠予三陰交電針治療，隔日一次，共治療15 次。其他兩組大鼠進行常規飼養，不進行針刺，隔日抓取。采用高效液相色譜-配以電化學檢測法(HPLC-ECD)測定各組大腦皮層中神經遞質的含量，酶聯免疫吸附法測定卵巢E2含量。結果 E2模型組的E2含量比正常組顯著降低(P<0.01)，治療組的E2含量比模型組顯著升高(P<0.01)。與正常組比較，模型組大鼠多巴胺(DA)含量下降不明顯(P>0.05)，NE的含量顯著下降(P<0.01)，5-羥色胺(5-HT)的含量升高顯著(P<0.01)；模型組的5-HT/去甲腎上腺素(NE)值顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，治療組大鼠的DA含量升高顯著(P<0.01)，NE的含量也明顯升高 (P<0.05)，5-HT的含量顯著降低(P<0.01)，治療組的5-HT/NE值降低顯著(P<0.01)。結論 電針三陰交可以有效調節自然衰老圍絕經期大鼠卵巢E2和大腦皮層神經遞質的含量。

圍絕經期;電針;穴,三陰交;雌二醇;大鼠,Sprague-Dawley

圍絕經期是婦女從生育期過渡到老年期的轉折點，在這一時期由于激素水平的變化所導致的一系列以自主神經功能紊亂為主的癥候群，即圍絕經期綜合征(PMS)。本病的主要臨床表現有骨關節痛、疲乏、情緒波動、頭痛、失眠、潮熱、出汗等[1-3]。現代醫學的治療方法以激素替代療法(HRT)為首選，雖然療效確切，但其相關副作用的報道[4-6]亦屢見不鮮。針灸治療本病療效肯定[7]。三陰交穴作為肝脾腎三經之匯，尤為首選[8]。本實驗以自然衰老的圍絕經期大鼠為模型，通過電針三陰交穴，觀察大鼠卵巢E2和大腦皮層神經遞質[去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)]的變化，探討E2與神經遞質的相關性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 本實驗動物皆購于北京維通利華動物中心[SCXK(京)2012-0001]。清潔級SD大鼠共40只,3月齡SD大鼠7只,體質量(220±20)g;11～15月齡SD 大鼠33 只，體質量(320±20)g。實驗室溫度(20±2)℃，濕度65%,12 h光暗周期,自由攝食、飲水。在上述條件下飼養30 d，自第30天晚上，禁食12 h，于第31天上午統一取材。

1.2 動物模型及分組 雌性SD大鼠在11～15月齡時的激素水平及生理病理變化與人類婦女圍絕經時期相似，通過陰道組織涂片法[9]進行3個動情周期(約15 d)的連續監測。根據動情間期陰道分泌物及細胞學的變化[10]，結果顯示大鼠處于動情間期，符合圍絕經期的變化規律，提示該月齡大鼠已經進入圍絕經期。故而本實驗選擇的動物模型為11～15月齡的SD大鼠。根據上述標準，篩選出14只大鼠，以隨機數字法分組：治療組7只，模型組7只。7只3月齡的SD大鼠為正常組。

1.3 治療方法 固定大鼠，取雙側三陰交(大鼠后肢，內踝尖直上10 mm)，直刺3 mm，連接電針儀。頻率：2/100 Hz，交替刺激；波形：疏密波；強度：0.1～0.2 mA，以針柄輕微顫動為好，留針20 min，隔天1次，共15次。其他兩組不針刺，僅給予與治療組等量抓取和固定刺激。第31天統一取材，取材前禁食12 h。

1.4 取材和指標含量測定 取材時,大鼠快速斷頭,剝離大腦皮層;解剖腹腔,取左側卵巢。液氮保存，并放入-80 ℃冰箱。

卵巢E2采用酶免法測定；大腦皮層神經遞質(DA、NE、5-HT)采用高效液相色譜-配以電化學檢測法(HPLC-ECD)測定。

1.5 統計學處理 采用SPSS21.0 進行統計分析，計量資料先進行正態分布t檢驗，組間差異進行ANOVA單因素方差分析，相關性分析采用Pearson法。

2 結果

2.1 電針三陰交穴對自然圍絕經期大鼠卵巢E2的影響 與正常組[(671.21±140.60) pmol/L]相比，模型組的E2含量[(213.37±63.38) pmol/L]顯著降低，差異有統計學意義(P<0.01)。和模型組相比，治療組的E2含量[(462.90±157.77) pmol/L]顯著升高，差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2 電針三陰交穴對自然圍絕經期大鼠大腦皮層中神經遞質的影響 見表1。

表1 各組大鼠大腦皮層中DA、NE、5-HT的比較

組別鼠數(只)DANE5-HT5-HT/NE正常組70.02±0.010.36±0.160.50±0.122.35±0.96模型組70.01±0.010.07±0.01b0.96±0.23b8.78±1.34b治療組70.03±0.01a0.21±0.03c0.51±0.16a4.12±1.90a

注：與模型組比較,aP<0.01，cP<0.05;與正常組比較,bP<0.01

2.3 圍絕經期大鼠E2與神經遞質的相關性 結果表明，各組大鼠的E2與神經遞質的變化趨勢具有高度的相關關系。其中E2與NE、DA等兒茶酚胺類神經遞質呈正相關，與5-HT呈負相關。利用回歸方法進行分析顯示，E2與NE呈顯著正相關(y=2.337x - 0.074，r=0.995，P<0.01)，與DA無相關關系(r=0.069，P>0.05)。E2與5-HT呈負相關(y=-3.721x+1.113，r=0.807，P<0.01)。

3 討論

圍絕經期綜合征在中醫屬于“絕經前后諸癥”的范疇，在歷代文獻的記載，散在于多種病癥之中，如“失眠”、“臟躁”、“郁證”等。中醫理論認為，本病與肝、脾、腎三臟關系密切。腎為先天之本，脾為后天氣血生化之源，女子則以肝為先天。腎氣虛，天癸竭，氣血不足，血海空虛，且肝腎同源，肝失疏泄，故而諸癥皆現。針灸治療本病，通過對相應穴位的刺激，改善機體功能紊亂，調節人體內分泌、神經、免疫系統的失調，從而緩解相關癥狀，達到治療的目的。針灸治療的療效肯定，且安全無毒副作用，逐漸被人們所認可。三陰交穴，是足太陰脾經穴位，又是足三陰經之交匯穴，可通調臟腑，有補肝益腎，健脾和胃，通經活血，利濕化濁之功效，是臨床治療本病的首選穴位。

在圍絕經期綜合征的發生發展過程中，激素水平的變化是其主要原因。卵巢作為女性的性腺，是分泌雌激素的主要場所，隨著卵巢功能衰退，E2的分泌明顯減少，實驗結果亦顯示，模型組的卵巢E2含量較正常組明顯降低(P<0.01)，符合生理變化規律。E2的減少，導致心血管系統、生殖系統、骨骼系統、糖脂代謝及神經遞質活性的異常[11-14]，出現抑郁、失眠、骨質疏松、糖脂代謝紊亂等癥狀。電針三陰交后，治療組大鼠卵巢E2明顯升高(P<0.01),表明電針三陰交可以改善圍絕經期雌激素低分泌狀態，延緩卵巢的衰老，從而緩解圍絕經期綜合征的相關癥狀。

圍絕經期綜合征的臨床表現多以自主植物神經功能紊亂為主，如焦慮、潮熱、抑郁等，其發病機制可能與大腦皮層中樞神經遞質的濃度變化有關。其中，研究顯示，5-HT的濃度改變，可能對下丘腦的體溫調節中樞引起刺激而引發潮熱[15]，與失眠[16]和抑郁[17]亦有相關性。DA可能抑制促性腺激素釋放激素(GnRH)的分泌[18]，而NE的下降可能引發失眠[19]和抑郁[20]。興奮性遞質與抑制性遞質的釋放，需要協調的比例，才能維持穩定的功能。本實驗發現，NE的含量較正常組下降(P<0.01)，而5-HT則明顯升高(P<0.01)，進而使5-HT/NE升高(P<0.01)。電針三陰交可以顯著調節DA、NE、5-HT的含量(P<0.01、P<0.05、P<0.01)，降低5-HT/NE的比值(P<0.01)。提示電針三陰交穴可以有效調節圍絕經期大鼠大腦皮層神經遞質的含量，改善相關癥狀。

同時，E2和神經遞質進行了回歸分析，結果顯示，E2與5-HT 呈負相關(P<0.01),與NE呈正相關(P<0.01)，表明E2與中樞神經遞質之間存在相關性關系，兩者之間相互作用、相互影響，共同調節機體的平衡。

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The efficacy of electro-acupuncturing Sanyinjiao on estradiol and cerebral neurotransmitters in natural premenopausal rats

PengXiaotao*,ChengKai，XuLin,LiYou

(*DepartmentofAcupuncture&Massage,BeijingHospital,Beijing100730,China)

Objective To investigate the efficacy of electro-acupuncturing (EA) Sanyinjiao on estradiol and cerebral neurotransmitters in natural premenopausal rats.Methods The natural aging rats was slected as animal model.The rats were randomly divided into treatment group (EA group),model group (control group),the normal group (youth group),7 rats in each group.Rats in EA group were treated by Sanyinjiao acupuncture every other day,and totally 15 times.Other groups of rats were feed routine and crawled every other day without acupuncture.Cortex neurotransmitter levels of each group were determined by HPLC with electrochemical detection (HPLC-ECD).The contents of estradiol of each group were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.Results Estradiol level of model group was significantly lower than that of the normal groups(P<0.01).Compared with model group,Estradiol was increased significantly in treatment group (P<0.01).Compared with normal group,DA was decreased in model group,but no statistical significance (P>0.05),while the NE was decreased and 5-HT increasing significantly (P<0.01).The ratio of 5-HT/NE was increased significantly in model group(P<0.01).Compared with the model group,DA and NE of treatment group were significantly increased (P<0.01,P<0.05),but 5-HT was significantly decreased (P<0.01).The ratio of 5-HT/NE was decreased significantly in treatment group when compared with model group (P<0.01).Conclusion EA Sanyinjiao can effectively regulate the ovarian estradiol and cerebral cortex neurotransmitters of natural aging perimenopausal rats.There are significant correlation between estradiol and the cerebral cortex neurotransmitters including DA,NE and 5-HT.

Perimenopause ;Electroacupuncture;Point SP6 (Sanyinjiao);Estradiol;Rats,Sprague-Dawley

彭曉濤，醫師,Email:happypger@163.com

R711.51

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2015.05.019

2015-07-10)