藤茶二氫楊梅素對雞內臟器官及小腸消化酶活性的影響

戴 青，龔 飛，郁建平

（貴州大學 藥學院，貴州 貴陽550025）

藤茶是我國特有的藥茶兼用植物，富含二氫楊梅素（dihydromyricetin，DMY）等黃酮類物質，具有抗炎抗菌、抗氧化、降血糖等作用[1－5]。有研究表明，用藤茶黃酮及二氫楊梅素作飼料添加劑，能有效提高動物機體的免疫力，增強生產性能、促進生長，可改善動物的肉質品質，作為新型綠色無公害飼料添加劑具有廣闊的應用前景[6－8]，但目前在畜牧業(yè)生產中的應用水平和廣泛程度還不高。隨著現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模化的不斷發(fā)展，為了防治畜禽疾病、提高經(jīng)濟效益，人們在飼料中添加各種抗生素、激素等添加劑，但長期使用會導致許多不良后果，如畜產品中藥物殘留，通過食物鏈進入人體，給人類疾病防治帶來困難，造成嚴重安全隱患[6]。因此，研究安全、高效和環(huán)保的新型飼料添加劑具有十分重要的意義。為藤茶資源的合理開發(fā)利用以及其在養(yǎng)殖生產中的應用提供參考依據(jù)，筆者于2014年3—5月進行了藤茶中二氫楊梅素對雞內臟器官質量及指數(shù)、小腸消化酶活性的影響試驗。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

選用96只體重相近、健康的40日齡貴州瑤山雞，隨機分為4組，每組3次重復，每重復8只雞，試驗期70d。試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別在基礎日糧（表1）中添加0.025%、0.05%和0.1%的二氫楊梅素（由貴州大學生化營養(yǎng)研究所植化實驗室提取），試驗Ⅳ組（對照組）只喂基礎日糧，其他飼養(yǎng)管理措施一致。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diets（air dry basis）

1.2 內臟器官采集與處理

試驗結束后隨機從各組每個重復中各選取2只雞稱重，然后放血致死、脫毛，迅速剖開腹腔取出心臟、肝臟、腺胃、肌胃、肺、小腸，去出腺胃、肌胃、腸道中的食糜，用吸水紙吸去器官表面水分后稱重。用尺子測量腸道總長度，每只雞截取腸道1cm，擠出食糜并用生理鹽水清洗后裝入凍存管于－20℃保存。計算臟器指數(shù)：

臟器指數(shù)（相對質量）＝（臟器鮮質量／活體質量）×100%。

1.3 小腸的消化酶測定

1.3.1 樣本前處理 準確稱取腸組織重量，按重量（g）∶體積（mL）＝1∶9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿，2 500r／min離心10min，分別收集上清液。

1.3.2 蛋白酶測定 取上清液用生理鹽水稀釋10倍，取樣50μL用考馬斯亮藍法測定待測勻漿蛋白濃度。取3支試管，其中2支為測定管，1支為空白管，分別在每管內加入1.5mL蛋白酶底物應用液，37℃預溫5min，然后在測定管中各加15μL 樣本，在空白管中加15μL樣本勻漿介質。加入樣本的同時開始計時，混勻后倒入0.5cm 光徑的石英比色皿中，于253nm 處測定吸光度，記下30s時的吸光度值A1，將比色皿置于比色槽中不動，同時將比色槽溫度恒定保持在37℃，于20.5 min時測定吸光度值A2后計算酶活力。在pH 8.0 和37℃條件下，1mg蛋白中含有的蛋白酶1 min 使吸光度變化0.003即為1個蛋白酶活力單位。

1.3.3 淀粉酶測定 取上清液用生理鹽水稀釋一定倍數(shù)，底物緩沖液先于37℃預溫5 min。取3支試管，其中2支為測定管，1支為空白管，分別在每管內加入0.5mL 底物緩沖液，然后在測定管內分別加0.1mL待測樣本（空白管內不加），混勻，37℃水浴，準確反應7.5 min，取出后沸水滅活，再每管分別加0.5 mL 碘應用液。最后，測定管各加3.0mL蒸餾水，空白管加3.1mL 蒸餾水，混勻，于波長660nm，1cm 光徑比色，蒸餾水調零，測定各管吸光度后計算酶活力。組織中1mg蛋白在37℃與底物作用30min，水解10mg淀粉定義為1個淀粉酶活力單位。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS19.0 統(tǒng)計處理軟件中ANOVA 模塊進行單因素方差分析，用Duncan氏法對各組間平均數(shù)進行多重比較。試驗結果用平均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 內臟器官的質量及指數(shù)

從表2看出，添加二氫楊梅素試驗組的心臟、肺質量與對照組間差異均不顯著，其中，試驗Ⅱ組、Ⅲ組的心臟質量分別比對照組高3.93%和13.87%，試驗Ⅰ組、Ⅲ組的肺質量分別比對照組高22.57%和7.93%。添加二氫楊梅素試驗組的肝臟、胃質量均低于對照組，其中，試驗Ⅱ組、Ⅲ組的肝臟質量與對照組間差異顯著，試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的胃質量分別比對照組低14.69%、28.81%和15.11%，其中，Ⅰ組、Ⅲ組與對照組間差異顯著，Ⅱ組與對照組間差異極顯著。

各組間心臟、肝臟指數(shù)差異均不顯著，肝臟指數(shù)均低于對照組。胃指數(shù)試驗Ⅰ組、Ⅲ組顯著低于對照組；試驗Ⅱ組顯著低于試驗Ⅰ組和Ⅲ組，極顯著低于對照組。肺指數(shù)試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組與對照組間差異均不顯著，但試驗Ⅱ組與Ⅰ組、Ⅲ組間差異均顯著（表2）。

2.2 小腸長度及消化酶活性

從表3看出，添加二氫楊梅素飼喂貴州瑤山雞對其小腸長度、消化酶活性有顯著或極顯著影響。腸道長度試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別比對照組增加6.30%、13.04%和6.90%，其中，試驗Ⅱ組與對照組間差異顯著，其余各組間差異不顯著。小腸蛋白酶活性試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別比對照組高65.34%、70.75%和31.98%，其中，試驗Ⅰ組、Ⅱ組與對照組間差異顯著，Ⅲ組與對照組間差異不顯著，試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組間差異均不顯著。小腸淀粉酶活性試驗Ⅲ組較對照組顯著提高30.22%，試驗Ⅱ組較對照組提高16.55%，試驗Ⅰ組較對照組降低8.03%，但與對照組間差異均不顯著；試驗Ⅰ組與Ⅱ組間差異顯著，Ⅰ組與Ⅲ組間差異極顯著。

表2 試驗各組貴州瑤山雞的內臟器官質量和臟器指數(shù)Table 2 The visceral organ weight and organ index of each group of Yaoshan chickens

表3 試驗各組貴州瑤山雞的小腸長度及消化酶活性Table 3 The intestine length and digestive enzymes activity of each group of Yaoshan chickens

3 結論與討論

1）二氫楊梅素（DMY）對雞內臟器官的影響。內臟器官是各種營養(yǎng)物質消化和吸收的主要場所，健康及生長良好的內臟器官是肉雞快速生長的基礎，只有當內臟器官得到充分發(fā)育，才能為肌肉等養(yǎng)分消耗器官的物質合成奠定基礎[9]。目前，國內關于DMY 對雞心、肝、胃、肺等器官指數(shù)及發(fā)育的影響研究較少，且主要集中于對免疫器官的影響方面。試驗結果表明，日糧中添加DMY 組雞的心臟、肺質量與對照組間均無顯著差異，與張繼東等[10]研究桂皮型中草藥添加劑對雞心臟等器官的影響結果一致。但本試驗中，與對照組相比，添加0.05%和0.1%的DMY 可顯著降低雞的肝臟質量，0.025%、0.1%的DMY 可顯著降低雞的胃質量，0.05%的DMY 可極顯著降低胃質量。原因可能是DMY 加快食糜在胃腸道中的消化速度，減小了胃腸道的消化負擔。

臟器質量及指數(shù)能近似反應動物的生理狀況及對環(huán)境的適應程度。臟器指數(shù)可從另一側面反應產肉性能，指數(shù)越小則意味著更高的產肉可能[11－12]。試驗結果表明，日糧中添加DMY 對雞心臟、肝臟和肺指數(shù)無顯著影響，但添加0.025%和0.1%的DMY 可顯著降低胃指數(shù)，0.05%的DMY 可極顯著降低胃指數(shù)，表明日糧中添加DMY 可影響雞消化器官的生長發(fā)育。劉麗等[13]研究日糧水平對雞內臟器官質量及指數(shù)的影響發(fā)現(xiàn)，臟器指數(shù)與活體質量間呈負相關，相關性大小依臟器不同而有所差異。而本試驗中各臟器指數(shù)并不完全與活體質量呈負相關，這可能與試驗雞品種和飼養(yǎng)環(huán)境等不同有關。在屠宰過程中發(fā)現(xiàn)，各組雞的心、肝、胃和肺的形狀和顏色無明顯差異。

2）二氫楊梅素（DMY）對雞小腸消化酶活性的影響。雞腸道的消化吸收能力主要取決于腸道內壁的面積，面積越大，吸收能力越強[14]。試驗結果表明，日糧中添加不同水平的DMY 均可增加雞的腸道長度，能在一定程度上增加腸道內壁的面積，進而提高消化、吸收能力，其中添加0.05%組與對照組間差異顯著。日糧添加DMY 均能提高雞的小腸蛋白酶活力，其中添加0.025%、0.05%組與對照組間差異顯著，說明DMY 能刺激雞腸道消化腺分泌更多的蛋白酶，從而使雞更好地分解腸道內的蛋白類營養(yǎng)成分，進而有助于雞對飼料蛋白的消化吸收，提高飼料利用率。而添加0.05%、0.1%組的小腸淀粉酶活力比對照組高，其中0.1%組與對照組間差異顯著。淀粉酶活力提高則可使禽類更好地消化吸收飼料中的淀粉類營養(yǎng)成分，提高飼料利用率。

3）綜上所述，藤茶二氫楊梅素添加量以0.05%最為適宜，與對照組相比，能降低肺質量及指數(shù)（P＞0.05），顯著降低肝臟質量（P＜0.05），極顯著降低胃質量及指數(shù)（P＜0.01），增加小腸淀粉酶活力（P＞0.05），顯著增加小腸長度和蛋白酶活力（P＜0.05）。在貴州瑤山雞基礎日糧中添加0.05%的藤茶二氫楊梅素可降低內臟器官質量及指數(shù)，增強消化道的消化、吸收能力，從而提高飼料利用率，促進雞的生長。

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