急性腦梗死患者血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF的變化及意義

張琦，牛文彥，李曉亮，蘇桂新，孫續國

(1天津醫科大學，天津300070；2天津中醫藥大學第一附屬醫院)

急性腦梗死患者血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF的變化及意義

張琦1,2，牛文彥1，李曉亮1，蘇桂新1，孫續國1

(1天津醫科大學，天津300070；2天津中醫藥大學第一附屬醫院)

目的 探討血漿生物標志物檢查診斷急性腦梗死患者的特異性和敏感度，以輔助臨床診斷和病情隨訪。方法 分別測定150例急性腦梗死患者(觀察組)和50例健康查體者(對照組)的血漿同型半胱氨酸(Hcy)、內皮型一氧化氮合酶(eNOS)、可溶性血栓調節蛋白(sTM)、超敏C反應蛋白(hs-CRP)及血管性假血友病因子(vWF)水平。結果 觀察組血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平均顯著高于對照組(P均<0.05)。根據ROC曲線得出當Hcy臨界值為9.11 μmol/L時診斷急性腦梗死的敏感性為95.2%、特異性為76%，eNOS臨界值為437.30 μmol/L時診斷的敏感性為79%、特異性為96%，sTM臨界值為7.43 μmol/L時診斷的敏感性為75.2%、特異性為96%，hs-CRP臨界值為3.38 mg/L時診斷的敏感性為81.9%、特異性為90%，vWF臨界值為194.85 ng/mL時診斷的敏感性為75.2%、特異性為80%。結論 血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平可作為急性腦梗死診斷的輔助指標。

腦梗死，急性；同型半胱氨酸；一氧化氮合酶；C反應蛋白質；血栓調節蛋白；血管性假血友病因子

研究顯示，血漿同型半胱氨酸(Hcy)濃度升高是心腦血管疾病的獨立危險因素[2]，高水平Hcy可激活炎癥細胞表達炎癥因子促進血栓形成，導致腦梗死的發生[3，4]；內皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性可反映血漿NO水平，可間接作為內皮細胞損傷程度評價指標，提示血栓形成或輔助診斷心腦血管梗死[5]；血栓調節蛋白(TM)是血管內皮細胞合成并位于細胞表面的凝血酶受體，血漿可溶性TM(sTM)可作為反映血管內皮損傷的敏感指標[6]；血清超敏C反應蛋白(CRP)是急性炎癥標志物，與動脈粥樣硬化發生和演變相關[7]；血管性假血友病因子(vWF)是血管內皮細胞下層黏附的糖蛋白，內皮細胞損傷后釋放vWF，參與血小板黏附和聚集過程，是反映血管內皮功能異常的特異性標志物。上述生物標志物對系統分析急性腦梗死具有重要臨床意義。本研究通過檢測急性腦梗死患者血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP及vWF水平，繪制ROC曲線分析上述指標用于診斷急性腦梗死的特異性和敏感性，為臨床診斷及隨訪病情提供依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年4月～2014年4月天津中醫藥大學第一附屬醫院收治的急性腦梗死患者150例(觀察組)，男71例、女79例，年齡48～82(67.39±8.25)歲。均符合1995年中華醫學會第四次全國腦血管病學術會議修訂的《各類腦血管疾病診斷要點》[8]，并經頭顱CT和(或)MRI檢查確診?；颊哂诎l病72 h內入院，神經功能缺損程度評分16～30分。另擇健康查體者50例作為對照組，男25例、女25例，年齡45～76(63.21±11.45)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 檢測方法 采集受試者靜脈血2 mL，枸櫞酸鈉抗凝，離心分離血漿。Hcy測定采用循環酶法，使用日本HITACHI7180全自動生化分析儀檢測，試劑由臺塑公司提供。sTM和eNOS測定采用酶聯免疫雙抗體夾心(ELISA)法，使用芬蘭雷勃公司Multiskan MK3酶標儀、Wellwash4 MK2洗板機檢測，試劑由深圳晶美生物工程有限公司提供。hs-CRP測定采用免疫比濁法，使用美國貝克曼庫爾特公司的IMMAGE 800雙光徑免疫濁度分析儀檢測，試劑由美國貝克曼公司提供。vWF檢測采用酶標法，使用法國STAGO公司STA-compact全自動血凝儀檢測，試劑由STAGO公司提供。

2 結果

2.1 兩組血漿生物標志物水平比較 見表1。

表1 兩組血漿生物標志物水平比較±s)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 ROC曲線分析 將兩組血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平錄入SPSS軟件，進行正態分布檢驗后，以指標的敏感度為縱軸、1-特異度為橫軸繪制ROC曲線，見圖1。血漿Hcy、eNDS、GTM、hs-CRP、vWF的ROC曲線下面積分別為0.938、0.873、0.879、0.922、0.786。其中Hcy與hs-CRP的曲線下面積大于0.9，與0.5相比差異有統計學意義,提示用于診斷急性腦梗死的準確性較高。sTM、eNOS和vWF的曲線下面積分別為0.879、0.873和0.786，在0.7到0.9之間，提示用于診斷急性腦梗死的準確性中等。

圖1 血漿Hcy、eNOS、s-TM、hs-CRP、vWF 診斷急性腦梗死的ROC曲線

2.3 各血漿生物標志物評價指標分析 見表2。

表2 各血漿生物標志物的評價指標分析

3 討論

血管內皮損傷標志物在急性腦梗死早期診斷中具有重要意義。本研究顯示，急性腦梗死患者血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP及vWF水平明顯高于健康對照者，提示這五個標志物可用于輔助檢查急性腦梗死。進一步繪制這五項生物標志物的ROC曲線，結果顯示，Hcy的ROC曲線最接近于理想診斷指標曲線，其ROC曲線下面積為0.938。據報道，血漿Hcy水平每增加5 μmol/L，血管疾病發生的危險增加50%，是腦卒中的獨立危險因素[9]。目前缺少確定臨界值，本實驗臨界值為9.11 μmol/L時，靈敏度為95.2%、特異度為76%。hs-CRP的ROC曲線下面積為0.922，大于0.9，認為其診斷的準確性較高。最近報道，hs-CRP能夠更早期、靈敏地反映炎癥水平，可用于臨床輔助檢查急性腦梗死。本研究顯示，急性腦梗死患者血漿eNOS水平顯著高于健康對照組，在臨界值為437.30 μmol/L時其靈敏度為79%、特異度為96%。ROC曲線下面積為0.873，在0.7到0.9之間，認為其準確性中等，臨床上尚未有報道eNOS診斷急性腦梗死檢測參考范圍，本文提出高于437.30μmol/L為診斷臨界值。vWF在急性腦梗死發病早期參與腦梗死的病理生理過程，可反映血管內皮損傷程度，有早期診斷及判斷預后的潛能[10]。急性腦梗死患者vWF水平顯著高于健康對照組，在臨界值為194.85 ng/mL時其靈敏度為75.2%、特異度為80%，陽性似然比88.8%，陰性似然比為60.6%，ROC曲線下面積為0.786，認為其診斷的準確性中等。血漿sTM水平能夠反映血管內皮細胞損傷，可用于早期輔助檢查急性腦梗死[11]。本研究中急性腦梗死患者血漿sTM水平顯著高于健康對照組，在臨界值7.43 μmol/L時靈敏度為75.2%、特異度為96%。ROC曲線下面積為0.879，在0.7到0.9之間，其準確性中等，目前臨床上尚未確定sTM輔助診斷急性腦梗死參考范圍，本研究提出高于7.43 μmol/L為檢查臨界值。

綜上所述，五項生物標志物中Hcy作為急性腦梗死的輔助檢查指標準確性最高，hs-CRP準確性僅次于Hcy，eNOS、s-TM及vWF輔助檢查準確性中等。

[1] 呂曉莉,張華,閆福堂,等.血清同型半胱氨酸水平與腦梗死相關性分析[J].陜西醫學雜志,2010,39(7):875-876.

[2] 薛蓉,王冬梅,程焱.高同型半胱氨酸血癥在腦梗塞氧化應激和炎癥損傷機制中的作用[J].中華神經科雜志,2007,40(11):751-753.

[3] Smulders YM, Blom HJ. The homocysteine controversy[J]. J Inherit Metab Dis, 2011,34(1):93-99.

[4] 楊慶河,常萬生.腦梗死患者血清同型半胱氨酸水平變化及其與預后的關系[J]．山東醫藥,2013,53(29):46-47.

[5] 陳小明.一氧化氮和心血管疾病[J].中華高血壓雜志,2008,16(9):847-848.

[6] Andreou AP, Crawley JT. Thrombomodulin analogues for the treatment of ischemic stroke[J]. J Thromb Haemost, 2011,9(6):1171-1173.

[7] 楊光輝.血清C反應蛋白水平與腦梗死病情的關系[J].中國醫藥指南雜志,2012,10(5):17-20.

[8] 全國腦血管病學術會議.各類腦血管疾病診斷要點[J].中華神經科雜志,1996,29(6):379.

[9] 沈興婭.急性腦梗死患者血漿同型半胱氨酸、D-二聚體、超敏C反應蛋白水平的研究[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(1):110-111.

[10] Mori D, Yano K,Tsubota K, et al. Simulation of platelet adhesion and aggregation regulated by fibrinogen and von Willebrand factor[J]. Thromb Haemost, 2008,99(1):108-115.

[11] Conway EM. Thrombomodulin and its role in inflammation[J]. Semin Immunopathol, 2012,34(1):107-125.

ROC curve analysis of plasma biomarkers as Hcy, eNOS, sTM, hs-CRP and vWF for patients with acute cerebral infarction

ZHANGQi1,NIUWen-yan,LIXiao-liang,SUGui-xin,SUNXu-guo

(1TianjinMedicalUniversity,Tianjin300070,China)

Objective To explore the specificity and sensitivity of plasma biomarkers in patients with acute cerebral infarction for clinical auxiliary diagnosis and a follow-up. Methods A total of 150 cases of acute cerebral infarction patients (observed group), 50 cases of healthy controls (control group) were included. Circular enzymatic and ELISA method and immune turbidimetric method were respectively used o determine the plasma homocysteine (Hcy), endothelial nitric oxide synthase (eNOS), soluble thrombus regulatory proteins (sTM), hypersensitive c-reactive protein (hs-CRP) and von willebrand factor (vWF) level. Results The plasma levels of those biomarkers as Hcy, eNOS. sTM, hs-CRP and vWF were significantly higher in observed group than those in healthy control group(P<0.05). Aarea under the ROC curve were respectively 0.938, 0.873, 0.879, 0.922 and 0.786. According to the ROC curve, when the Hcy critical value was 9.11 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 95.2%, the specificity was 76%. When the eNOS critical value was 437.30 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 79%, the specificity was 96%.When the sTM critical value was 7.43 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 75.2%, the specificity was 96%. When the hs-CRP threshold was 3.38 mg/L, the diagnostic sensitivity was 81.9%, the specificity was 90%; when the vWF critical value was 194.85 ng/mL, the diagnostic sensitivity was 75.2%, the specificity was 80%. Conclusion The levels of Hcy, eNOS, sTM, hs-CRP and vWF in plasma may be auxiliary biomarkers for the diagnosis of acute cerebral infarction.

cerebral infarction, acute; Hcy; NOS; CRP; TM; vWF

張琦(1985-)，女，技師，研究方向為臨床醫學檢驗。E-mail：102.8@163.com

牛文彥(1965-)，女，教授，研究方向為臨床醫學檢驗及免疫學?，F主持4項國家自然基金，1項教育部博士點專項基金，3項科委重點項目。E-mail：wniu@tijmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.006

R743.33

A

1002-266X(2015)01-0017-03

2014-07-30)