eIF4E和Ki67在子宮內膜癌組織中的表達及意義

夏偉蘭，沈丹婷，麥慧芬，孫靜，張廣亮

(1深圳市寶安婦幼保健院，廣東深圳518100；2南方醫科大學附屬南方醫院)

·基礎研究·

eIF4E和Ki67在子宮內膜癌組織中的表達及意義

夏偉蘭1，沈丹婷1，麥慧芬1，孫靜1，張廣亮2

(1深圳市寶安婦幼保健院，廣東深圳518100；2南方醫科大學附屬南方醫院)

目的 探討eIF4E和Ki67在子宮內膜癌組織中的表達及意義。方法 采用免疫組化SP法檢測eIF4E和Ki67在36例Ⅰ型子宮內膜癌、9例Ⅱ型子宮內膜癌及30例正常子宮內膜組織中表達情況，分析兩者與子宮內膜癌臨床病理特征的關系以及兩者表達的相關性。結果 eIF4E、Ki67在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內膜癌中的表達均高于正常子宮內膜(P均<0.01)。eIF4E和Ki67的表達均與子宮內膜癌組織病理分級、手術臨床分期、肌層浸潤程度及有無淋巴結轉移相關(P均<0.05)，二者在子宮內膜癌中的表達呈顯著正相關(r=0.763，P<0.01)。結論 eIF4E和Ki67與子宮內膜癌的發生發展有關,聯合檢測eIF4E和Ki67可能有助于判斷子宮內膜癌患者的預后。

子宮腫瘤；eIF4E；Ki67

子宮內膜癌(EC)的發生、發展是一個多因素、多步驟的復雜過程，大量原癌基因、抑癌基因、凋亡基因、轉錄調節因子等基因表達發生改變，對EC的發生發展具有重要作用[1]。本研究采用SP免疫組化法檢測子宮內膜癌組織中eIF4E和Ki67的表達情況，探討二者在子宮內膜癌的發生、發展、浸潤和轉移中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 45例子宮內膜癌石蠟包埋標本取自2009～2012年南方醫院病理科手術切除標本，均經病理學檢查確診。患者年齡32～70歲、平均53歲。依照FIGO1988年標準，組織學病理分級G1級13例、G2級24例、G3級8例，手術分期Ⅰ期21例、Ⅱ期17例、Ⅲ期7例。無肌層浸潤8例、淺肌層浸潤27例、深肌層浸潤10例；無淋巴結轉移37例、有淋巴結轉移8例。選擇同期因子宮肌瘤行子宮全切患者的子宮內膜標本30例作為對照組。所有患者月經規律，無合并癥及并發癥，無婦科內分泌疾，術前半年未使用激素類藥物治療。兩組臨床資料具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用SP染色法，eIF4E一抗工作濃度按1∶300稀釋，Ki67一抗工作濃度按1∶150稀釋，DAB顯色。以PBS代替一抗作為空白對照，以乳腺癌為陽性對照。采用OLYMPUS-BX51正置熒光顯微鏡觀察染色結果,eIF4E陽性為腺上皮細胞胞質內出現棕黃色或棕褐色顆粒，Ki67陽性為細胞核內出現棕黃色或棕褐色顆粒。每張切片先在低倍鏡(10×10)下篩選出陽性表達較強的區域，然后在高倍鏡(10×40)下隨機選擇5個不連續視野進行拍照，經全自動圖像分析系統進行彩色圖像的采集與存儲。用Imagepro-plus6.0專業圖像分析軟件對蛋白表達情況進行半定量分析，計算光密度值(MOD)。

1.2.2 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，數據分布的正態性檢驗采用Shapiro-wilk正態性分析；正態分布的數據，進一步檢驗樣本總體方差是否齊性。方差齊者MOD值的比較采用t檢驗或One-way ANOVA方差分析；偏態分布及方差不齊數據，MOD值的比較采用樣本的非參數檢驗。相關性分析采用Pearson相關分析法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 eIF4E及Ki67在子宮內膜癌中的表達 eIF4E和Ki67陽性均呈棕黃色或棕褐色，eIF4E主要定位于細胞質中，少部分低分化的癌組織細胞核中亦可見棕黃色顆粒，間質未見表達；Ki67主要定位于細胞核。eIF4E及Ki67在Ⅰ和Ⅱ型子宮內膜癌中表達的MOD值均顯著高于正常子宮內膜(P=0.000),eIF4E和Ki67表達與子宮內膜癌分型無明顯相關(P1=0.244,P2=0.267)。見表1。

表1 eIF4E與Ki67在正常內膜及子宮內膜癌組織中 的表達比較

注：與正常子宮內膜比較，*P<0.01。

2.2 eIF4E及Ki67與子宮內膜癌臨床病理特征的相關性 見表2。

2.3 eIF4E和Ki67在子宮內膜癌中表達的相關性 Pearson積差相關分析顯示，eIF4E與Ki67在子宮內膜癌中的表達呈顯著正相關(r=0.763，P<0.01)。

表2 eIF4E及Ki67表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系±s)

3 討論

eIF4E是一種新的原癌基因，是帽依賴性mRNA翻譯過程中的限速因子，在蛋白質翻譯合成過程中起重要調控作用[2]，其過度表達選擇性地增加一些基因產物的表達，如原癌蛋白、腫瘤浸潤相關基因產物等[3]。已有研究表明，正常組織中eIF4E水平較低，而在多種腫瘤組織中過表達，其過表達促進細胞增殖和誘導細胞轉化，而且這種過表達與腫瘤的形成、浸潤、轉移密切相關[4]。近年研究發現，在多種惡性腫瘤中發現eIF4E過度表達并與腫瘤的侵襲、轉移能力呈正相關，抑制eIF4E的表達可以減少腫瘤相關基因的表達[5～8]。本研究顯示，Ⅰ、Ⅱ型子宮內膜癌中eIF4E的表達均顯著高于正常子宮內膜組，而Ⅰ型與Ⅱ型子宮內膜癌中eIF4E表達差異無統計學意義，提示eIF4E過度表達可能導致子宮內膜癌的改變，然而不能作為鑒別兩型的標志物。進一步分析表明，eIF4E表達與子宮內膜腺癌FIGO分期、組織學分級、肌層浸潤深度及淋巴轉移顯著相關，提示eIF4E表達上調可能與子宮內膜腺癌的發生、發展密切相關，并隨著其惡化程度的增加而持續增加，其表達水平對判斷子宮內膜癌的惡性程度有一定價值，且其可作為預后評估的指標。

Ki67是一種與細胞增殖有關在核抗原，它的合成、表達與增殖細胞的增殖周期有關,其在G0期和G1早期不表達，G1期中期后開始表達，在S期及G2期表達逐漸增加，至M期達高峰[9]。Ki67能客觀反映細胞的增殖活性，是臨床上應用比較廣泛的增殖細胞標記物[10]，并與多種腫瘤的發生發展、轉移和預后有關。其表達與腫瘤的臨床病理學分級呈正相關[11]，因此可以用作判斷腫瘤侵襲力和預后的標志。本研究顯示, Ki67表達與組織學病理分級、手術臨床分期、肌層浸潤深度和有無淋巴結轉移有關,并隨組織學病理分級的增加、手術臨床分期進展、肌層浸潤越深及有淋巴結轉移,其表達增強，說明Ki67在子宮內膜癌的發生、發展中起重要作用,提示Ki67過表達與子宮內膜癌的不良預后有關。

本研究對eIF4E和Ki67的表達進行相關性分析后發現，在子宮內膜癌組織中，二者表達呈顯著正性相關，其具體機制可能與mTOR信號通路有關。mTOR信號通路為細胞啟動翻譯信號及細胞由G0/G1期進入S期所必需，并與蛋白合成、細胞周期的調控相關[12]。正常情況下，eIF4E和其抑制物4E-BPs的結合形成復合物，一般不能觸發翻譯，然而當外界刺激激活了mTOR信號通路，激活的mTOR使其下游引物4E-BP1磷酸化，導致eIF4E與其解離并活化，解離出來的eIF4E可以激活位于5′2UTR區的特殊的調控元件，促使翻譯起始復合物形成，從而促使翻譯的進行，引起腫瘤形成，然后腫瘤細胞由G1期進入S、G2、M期，Ki67的表達亦隨之增強。

綜上所述，eIF4E、Ki67表達與子宮內膜癌的發展、分化和侵襲有密切關系。聯合檢測兩者的表達對評價子宮內膜癌生物學行為、指導選擇治療方案及腫瘤侵襲轉移機制的研究具有重要意義，可作為子宮內膜癌早期診斷、判斷預后及隨訪的生物學指標，也有可能成為子宮內膜癌患者基因治療的選擇。

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2014-07-20)